血常规复检、镜检标准操作程序

血常规复检、镜检标准操作程序目的用于指导血常规复检、镜检。该SOP的变动程序标准操作程序的变动可由任一是用本程序的工作人员提出并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。血常规复检、镜检标准WBC小于3.0×109或大于15×109；100fl-150fl出现高尖峰；PLT小于60×109；Hb小于50g/L；特殊病人和特殊病情；必须复查，必须推血片镜检；并登记。操作程序1.由本科工作人员重新采血。1.立即测定室内质控，观测结果是非在控，在控，则再次测定，确认。并手工计数，参照相关手工计数操作程序。结果不在控，查找原因，排除后，则再测室内质控测定。在控确认，则再次测定。确认。并手工计数，参照相关手工计数操作程序。涂片染色镜检。白细胞手工计数标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血。标本要求：抗凝剂采用EDTAK2抗凝。用手指末梢血作白细胞检验时，如手指有冻疮，则主张采用耳垂血。标本储存：取材后应立即推制成血涂片，并尽快送检。标本运输：保持干燥，室温运输。血液经稀酸稀释后,成熟红细胞全部被溶解,注入计数池后,在显微镜下计数白细胞.《试剂》冰醋酸2ml蒸馏水98ml操作步骤1.用吸管准确吸取末梢血20ul（WBC小于3.0×109吸取40ul）；拭去管尖外部的余血,将吸管插入小试管中稀释液的底部,轻轻将血放出,并吸取上层清液,洗试管数次,最后混合.2.充池,静置2-3分钟,待白细胞下沉.3.用低倍镜计数4角4个大方格内的白细胞数.计算白细胞数/L=4个大方格内白细胞总数×50×106参考范围成人:(4-10)×109/L儿童:(5-12)×109/L新生儿:(15-20)×109/L注意事项1.标本采集时不能挤压过甚,针刺深度必须适当.2．大小方格内压线细胞应按数上不数下,数左不数右的原则进行计数.3．稀释液要过滤,小试管,计数板必须清洁,以免杂质,微粒等误认为细胞.4.计数时,两次重复计数误差不得超过10%.涂片染色检查。染深蓝色，含空泡或呈泡沫状。Ⅱ型（幼稚型）：胞体较大，核圆形或卵圆形。染色质细致呈网状排列，可见1-2个发生母细胞化的结果。Ⅲ型（不规则型）：胞体较大，外形常不规则，可有多数伪足。核形状及结构与I型相同或不同，染色质较粗糙致密。胞质量丰富，染色淡蓝或灰蓝色，有透明感，边缘处着色较深蓝色。可有少数空泡。（2）受放射线损伤后淋巴细胞形态变化：通过放射生物学的研究以及对射线损伤病人观察，证实淋巴细胞是白细胞中对电离辐射最敏感的细胞。人体遭受较小剂量的电离辐射之后，虽未出现明显临床症状，但血中淋巴细胞的数量却已显著减少。若经较大剂量照射后，淋巴细胞迅速减少，剂量越大，减少得越严重以致衰竭，与此同时受损伤的淋巴细胞还出现形态学改变，如核固缩、核破坏、双核的淋巴细胞以及含有卫星核的淋巴细胞。后者是指胞质中主核之旁出现小核也称微核，是射线损伤后较为特殊的所见。（3）淋巴细胞性白血病时形态学变化：在急、慢性淋巴细胞白血病时，不但出现各阶段的原幼细胞，且处于各分阶段的白血病的细胞都有特殊的形态变化。红细胞形态在良好的染色血涂片上，正常红细胞的大小形态较为一致，直径为6.7～7.7μm，染色淡红色，中央着色较边缘淡。各种病因作用于红细胞生理进程的不同阶段引起相应的病理变化，导致某些类型贫血的红细胞产生特殊的形态变化，可从染色血涂片上红细胞的大小、形态、染色等方面反映出来。此种形态学改变与血红蛋白测定、红细胞计数结果相结合可粗略地推断贫血原因，对贫血的诊断和鉴别诊断有很重要的临床意义。红细胞的形态变化主要表现在以下四个方面：红细胞大小改变1.小红细胞（microcyte）直径小于6μm者称为小红细胞，正常人遇见。如果血涂片中出现较多染色过浅的小红细胞，提示血红蛋白合成障碍，可能由于缺铁引起；或者是珠蛋白代谢异常引起的血红蛋白病。而遗传性球形细胞增多症的小红细胞，其血红蛋白充盈良好，生理性中心浅染区消失。2.大红细胞（macrocyte）直径大于10μm。见于溶血性贫血及巨幼细胞贫血。3.巨红细胞（megalocyte）直径大于15μm。最常见于缺乏叶酸及维生素B12所致的巨幼细胞性贫血。其胞体所以增大是因为缺乏上述因子时，幼稚红细胞内DNA合成不足，不能按时分裂所致。如果血涂片中同时存在分叶过多的中性粒细胞则巨幼细胞性贫血可能性更大。4.红细胞大小不均（anisocytosis）是指红细胞之间直径相差一倍以上而言。常见于严重的增生性贫血血涂片中。而巨幼细胞性贫血时尤为明显，可能与骨髓粗制滥造红细胞有关。红细胞形态改变1.球形红细胞（spherocyte）细胞直径小于正常。厚度增加常大于2μm。无中心浅染色区，似球形。常见于遗传性球形细胞增多症和伴有球形细胞增多的其它溶血性贫血。如自身免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病以及红细胞酶缺陷所致溶血性贫血等。2.椭圆形红细胞（elliptocyte）细胞呈卵圆形、杆形、长度可大于宽度3-4倍，最大直径可达12.5μm，横径可为2.5μm。此种红细胞置于高渗、等渗、低渗溶液或正常人血清内，其椭圆形保持不变，但幼红细胞及网织红细胞均不呈椭圆形。在遗传性椭圆形细胞增多症病有血涂片中此种红细胞可达25%，甚至高达75%（正常人约占1%）。3.靶形红细胞（targetcell）红细胞中心部位染色较深，其外围为苍白区域，而细胞边缘又深染，形如射击之靶。有的中心深染区不像孤岛而像从红细胞边缘延伸的半岛状态或柄状，而成不典型的靶形红细胞。靶形红细胞直径可比正常红细胞大，但厚度变薄，因此体积可正常。常见于各种低色素性贫血。在珠蛋白生成障碍性贫血时尤易见到。可能因HbA含量贫乏而又分布不匀所致应注意与在血涂片制作中未及时固定而引起的改变相区别。4.镰形红细胞（sicklecell）形如镰刀状。这是由于红细胞内存在着异常血红蛋白S所致，在缺氧情况下尤易形成此尖红细胞。因此检查镰形红细胞需将血液制成湿片，然后加入还原剂如偏亚硫酸病。5.口形红细胞（stomatocyte）红细胞中央有裂缝，中心苍白区呈扁平状，颇似张开的口形或鱼口。在正常人偶见。如积压涂片中出现较多口形红细胞，见于口形红细胞增多症。少量出现可见于弥漫性血管内凝血（DIC）、酒清中毒。6.棘细胞（acanthocyte）该红细胞表面有针尖状突起，其间距不规则。突起的长度和宽度右不一。在β-脂蛋白缺乏症病人的血涂片中出现较多。也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。须注意与皱缩红细胞区别。皱缩红细胞周边呈锯齿形排列紧密、大小相等，外端较尖。7.裂片细胞（schistocyte）为红细胞碎片或不完整的红细胞。大小不一。外形不规则，有各种形态如刺形、盔形、三角形、扭转形等。正常人血涂片中裂片细胞小于2%，弥漫性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血时出现较多。8.红细胞形态不整（poikilocytosis）指红细胞形态发生各种明显改变的情况而言，可呈泪滴状、梨形、棍棒形、新月形等，最常见于巨幼细胞性贫血。可能因贫血严重但又缺乏原料，在骨髓内粗制滥造；也可能因红细胞脆性增大，在推片时碎裂所致。红细胞内血红蛋白含量改变1.正常色素性（normochromic）正常红细胞在瑞特染色的血片中为淡红色圆盘状，中央有生理性空白区，通常称正常色素性。除见于正常人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和白血病。2.低色素性（hypochromic）红细胞的生理性中心浅染色区扩大，甚至成为环圈形红细胞，提示其血红蛋白含量明显减少，常见于缺铁性贫血、珠蛋白生杨障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血，某些血红蛋白病时也常见到。3.高色素性（hyperchromic）指红细胞内生下性中心浅染区消失，整个红细胞均染成红色，而且胞体也大。其平均红细胞血红蛋白的含量是增高的，但平均血红蛋白浓度多属于正常。最常见于巨幼细胞性贫血。4.嗜多色性（polychromatic）属于尚未完全成熟的红细胞，故细胞较大，由于胞质中含多少不等的嗜碱性物质RNA而被染成灰色蓝色。嗜多色性红细胞增多提示骨髓造红细胞功能活跃。在增生性贫血时增多，溶血性贫血时最为多见。红细胞中出现异常结构1.碱性点彩红细胞（basophilicstipplingcell）简称点彩红细胞，指在瑞特氏染色条件下，胞质内存在嗜碱性深蓝色颗粒的红细胞，属于未完全成熟红细胞，其颗粒大小不一、多少不等、正常人血涂片中很少见到，仅为万分之一。有铅、铋、汞中毒时增多，常作为名铅中毒的诊断的筛选指标。有人认为是由于红细胞的膜受重金属损伤后，其胞质中的核糖体发生聚集性引起，也可能是由于血红蛋白合成过程中原卟啉与铁结合受损所致，伴有再生紊乱现象。2.染色质小体（howelljollysbody）位于成熟或幼红细胞的胞质内，呈圆形，有1-2μm大小，染紫红色，可1至数个，已证实为核残余物，常见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血及脾切除术后。3.卡波环（cabotring）在嗜多色性或碱性点彩红细胞的胞质中出现的紫红色细线圈状结构，有时绕成8字形。现认为可能是胞质中脂蛋白变性所致常与染色质小体同时存在。见于巨细胞性贫血和铅中毒患者。4.有核红细胞（nucleatederyhrocyte）即幼稚红细胞，存在于骨髓中。正常成人外周血液中不能见到。1周之内婴儿的血涂片可见到少量。在成人外周血涂片中出现有核红细胞属病理现象，最常见于各种溶血性贫血。由于大量红细胞破坏后，骨髓增生，除网织红细胞大量入血外，还有一些有核红细胞提前释放入血，这说明骨髓的调节功能良好。另一种可能是造血系统恶性疾患或其它部位的癌肿转达移到骨髓，最常见于急、慢性白血病及红白血病。后者可见更早阶段的幼红细胞，并伴有形态上巨幼样变及其它畸变。综合以上红细胞形态变化，结合红细胞及血红蛋白减低程度，可以初步作出贫血的形态学诊断（见下表）。常见各类贫血的形态学诊断简表血涂片中红细胞形态学所见病因推断参考化验项目红细胞血红蛋白网织红细胞其它红细胞大小不均，以小型为主，有明显中心染区扩大缺铁性贫血↓↓↓↑红细胞大小，形态大致正常再生障碍性贫血↓↓↓血小板↓同上，多色性红细胞较易见到急性失血↓↓↑中性分叶↑同上，易见嗜多色性红细胞，亦可见到有核红细胞急性溶血↓↓↑↑尿中有游离Hb，血小板正常或↑红细胞大小不均，大红细胞及巨红细胞易见到，血红蛋白量丰富，生理性中心浅染区常见多色及有核红细胞缺乏维生素B12及叶酸引起的巨幼细胞性贫血↓↓↓↑血小板正常或↓变异的潜在来源取材不当。涂片过厚或过薄，影响形态观察。操作注意事项1.取材后，必须立即涂片。2.推好的血膜片应在空气中摇动，使其尽快干燥，以免细胞变形。天气寒冷或潮湿时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。3.根据血膜厚薄，细胞量多少及室内温度等把握好染色时间，使染色效果满意。4.镜检时循序检查，必要时用油镜确认；并注意整体情况。血小板手工计数。将血液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注人计数池内计数，再算出每升血液中血小板数。试剂（1）草酸铵法稀液：分别溶解草酸铵1.0g及EDTA·Na20.012g，合并加蒸馏水至100ml,混匀（2）许汝和稀释液：分别溶解尿素（AR级）10g、枸橼酸钠0.5g于蒸馏水至100ml,再加40％甲醛溶液0.1ml,混匀，过滤，保存于冰箱中备用。《操作》（1）于清洁试管中加入稀释液0.38ml。（2）准确吸取毛细血管血20ul(WBC小于60×109吸取40ul)，擦去管尖外附着血液，置于血小板稀释液内，立即充分混匀。街完全溶血后再次混匀1min。（3）取上述均匀的血小板悬液1滴，注入计数池内，静置10~15min，使血小板下沉。（4）用高倍镜计数中央1个大方格（即400个小格）内血小板，乘以0.2×109即为每升血液内血小板数。质量保证方案血小板稀释液要清洁，配成后应过滤。防止微粒和细菌污染。试管吸管也应清洁、干净。（2）针刺应稍深，使血流畅通。拭去第一滴血后，首先采血小板测事实上，操作应迅速，防止血小板聚集和破坏采取标本后尽快计数，以免影响结果。（3）血液加入稀释液内要充分混匀，滴入计数池后一定要静置10～15min。室温高时注意保持计数池周围的湿度，以免水分蒸发而影响计数结果。（4）计数时光线要适中，不可太强，应注意有折光的性的血小板和杂质、灰尘相区别。附在血细胞旁边的血小板也要注意，不要漏数。（5）如在