酶标仪选购的几个关键参数

第第页酶标仪选购的几个关键参数酶标仪选购的几个关键参数！核心提示：酶标仪作为一个常用的仪器，其基本功能不外乎一个比色测定，与比色计所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度掌控、定性和定量测定软件功能等方面的差别，当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能。我们在选购酶标仪时应当考虑如下几个关键参数：滤光系统酶标仪可以用滤光方式来划分。一般来说，可以分为滤光片型和光栅型两大类。也有一些酶标仪里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测，本质上还只是把滤片和光栅放在了一起，并没有使两者糅合而产生新的技术突破。光栅型滤光系统具有使用方便，可以进行光谱扫描，敏捷性等优点。当然，滤光片系统也有其显著的优势，例如价格较为便宜，检测灵敏度高，带宽的可选择性，可以进行快速的滤光片切换，可配备有自动加样系统，在化学发光检测中光线的透过率高。目前，滤光片系统应用更广，由于它可以让试验者完成更多的试验。测定波长一般酶标仪的测定波长在400～750nm或800nm之间，可以满足ELISA的显色测定。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶（HRP），底物通常为四甲基联苯胺（TMB）和邻苯二胺（OPD），其在过氧化氢溶液的存在下，经HRP作用，分别氧化为2，2，二氨基偶氮苯（DAB）和联苯醌。当pH值为5．0左右时，DAB在450nm波优点有最大汲取，当pH值降为L0时，最大汲取波长移至492nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深，因而常用强酸如硫酸或盐酸停止反应。TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数，假如HRP量少，H：O：和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH，即可使蓝色的阳离子根变化为黄色的联苯醌，使用硫酸作为停止剂可使产物稳定90min。因此，450nm和492nm两个波长是目前ELISA测定很常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件，可以同时安装6～8片滤光片，所配备的滤光片均应包含上述两个波长，有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片，影响不大。除了这两个基本滤光片外，考虑到双波长比色的需要，还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片，其他滤光片可依据本身的需要选择。有时，有的试验室希望用酶标仪作微量生化测定，故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能，此时需要一个340nm波长滤光片。此时，酶标仪的测定波长范围就成为340750nm或800nm。酶标仪有单波长和双波长检测功能。有时使用者不知在什么情况下使用单或双波长检测。所谓的“单波长”就是使用一种对显色具最大汲取的波长即450nm或492nm进行比色测定；而“双波长”则除了用对显色具最大汲取的波长即450nm或492nm进行比色测定外，同时用对特异显色不敏感的波长如630nm进行测定，酶标仪最终打印出来的吸光度则为二者之差。630nm波长下得到的吸光度是非特异的，来自于板孔上诸如指纹、灰尘、脏物等所致的汲取。因此，在ELISA比色测定中，最好使用双波长，且不必设空白孔。测定的吸光度范围通常，酶标仪的吸光度测定范围在0～2.5之间即可以满足ELISA的测定要求。早期的酶标仪可测定的吸光度一般在0～2.5之间，但现在基本上都做了拓宽，可实现3.5以上，而且能保持特别好的精密度与线性。因此，对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意努力探求大的吸光度范围，重要要看在肯定的吸光度范围内的线性和精密度如何。光学系统酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道（通常为8或12通道，亦有单通道）检测，一般为硅光管或光导纤维，除测定通道外，有的酶标仪还有一个参比通道，每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何，均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和准确度等体现出来。光学系统好的话，则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避开因通道不同所致的差别。检测速度酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快，有利于提高检测的精密度，即避开由于测定过程中，因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差别。目前市场上常见的酶标仪检测速度都特别快，通常在数秒钟内。震板功能酶标仪的震板功能是指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其进行振荡混匀，使板孔内颜色均一、目前市场上常见的酶标仪均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋转等方式及振荡幅度等任意调整；有的则较为固定。使用有震板功能的酶标仪，在进行ELISA测定显色反应完成加入停止剂后，可不必振荡混匀，直接放人酶标仪上测定即可。温育功能温育功能是指酶标仪自身能按要求自动精准明确地掌控仪器内部的温度，使得ELISA测定中微孔板条的温育过程可在仪器内部完成，而无需再外配温箱。目前，只有少部分酶标仪具有此种功能，温育功能只是酶标仪的一个附加功能，是否具有并不能说明酶标仪档次的高处与低处及仪器的优劣。作为试验室是否选择，则可依据本身试验室的条件及需要来决议。软件功能软件功能是指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其他测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等数据的统计分析并报告结果的功能。软件功能是中高档酶标仪的一个特别紧要的功能。假如硬件方面区别不大，则软件就成为判定酶标仪优劣的惟一指标。对于用户来说，好的软件功能，对实际工作会有较大的帮忙。ELISA定性测定，酶标仪如具有阳性推断值（cut—off）及其测定“灰区”（即指测定吸光度处于cutoff四周的肯定区域，此区域内结果应为“可疑”）的统计计算功能，不但方便了试验室工作人员，而且在某些特定的情况下，有特别高的应用价值。因此，如目的是定量测定，则在酶标仪的软件功能中，最好要有这种曲线回归方程计算分析功能。其他诸如连点、直线等回归计算，则可依据酶标仪的应用目的而定，如兼用于微量生化测定，则此类回归计算就很有必需。另外，酶标仪兼做酶标动力学、凝集反应测定所需的软件是否应具备，当然也应依据使用目的而定。由于此类软件一般都较为昂贵，酶标仪常另外单独按需配备，假如不是试验室特殊需要，就不必强求这种软件功能。语言界面通常进口的中高档酶标仪人机对话多采用英文。这对于某些基层试验室可能会存在语言方面的困难，从而难以最大限度地发挥酶标仪的作用。为解决这方面的问题，已有一些酶标仪采用了中文界面。这样就大大方便了广阔基层试验室技术人员的使用。尽管酶标仪的发展极为快速，种类繁多，功能也不绝加强，但其最根本的功用是不变的，即比色测定。大凡比色测定，其基本要求就是在肯定吸光度范围内要有好的测