医院感染监测技术

医院感染监测技术及具体要求一、医院环境监测

环境监测采样原则：采样应具有一定数量和代表性，采样应必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6小时，若样品保存于0-4℃条件时，送检时间不得超过24小时。（一）空气监测与质控1、采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。

2、采样高度：离地面垂直高度80-150cm。

3、布点方法：室内面积≤30m2，设一条对角线上取3点（避开门），即中心一点，两端各距墙1m各取一点，室内面积＞30m2，设东、西、南、北、中5点（离门远点），其中东、西、南、北各点均距墙1m。4、采样方法：一般采用自然菌沉降法：采用直径9cm普通营养琼脂平皿，在各采样点暴露5分钟（或15分钟）后送检培养计数（37℃培养24-48小时）。5、质控标准：见表1（二）医护人员手部监测与质控1、采样时间：在清洁或消毒手部后，接触病人和从事医疗活动前进行采样。2、采样面积及方法：被检人员五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。

△若采手术室消毒液刷洗后的手时，则须用含相应中和剂的采样液进行采样。3、质控标准：见表1（三）物体表面监测

与质控1、采样时间：选择消毒处理后4小时内进行采样。

2、采样面积：被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。3、采样方法：用5×5cm2的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管中送检。

△注意：如门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。4、质控标准：见表1

表1：各类环境空气、物体表面、医护人员手细菌菌落总数卫生标准

致病性微生物:不得检出乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌及其他致病性微生物。在可疑污染情况下进行相应指标的检测。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿及儿科病房的物体表面和医护人员手上，不得检出沙门氏菌。

二、消毒药械的效能

监测与质控（一）使用中消毒剂与无菌器械保存液监测与质控1、采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。2、采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混匀，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠；对于季胺盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%吐温80和0.3%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入3%吐温80，以中和被检样液的残效作用。3、结果分析：平皿上有菌生长，证明被检液有残存活菌，若每个平板菌落数在10cfu以下，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌），若每个平板菌落数超过10cfu，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，即不宜再用。4、质控标准：①使用中消毒液细菌菌落总数应≤100cfu/ml；不得检出致病微生物。②无菌器械保存液必须无菌生长。（二）医疗用品监测与质控1、采样时间：在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。2、常规监测：采样方法：用无菌方法将拟检缝合针、针头、手术刀片等小件医疗器械各5支，分别投入5ml的无菌生理盐水中；注射器则取5副在5ml无菌肉汤中分别抽吸5次，对手术钳、镊子等大的医疗器械在无菌操作下取2份以上用沾有无菌生理盐水的棉拭子反复涂擦，并将棉拭子投入5ml无菌生理盐水中；对一些特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂擦采样，被采表面＜100cm2，取全部表面，被采表面≥100cm2，取100cm2，采样后马上送检。

3、注意事项：若消毒因子为化学消毒剂时，采样液中应加入相应中和剂。4、质控标准：①进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌生长。②接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数应≤20cfu/g或100cm2，不得检出致病微生物。③接触皮肤的医疗用品细菌菌落总数应≤200cfu/g或100cm2，不得检出致病微生物。（三）紫外线消毒效果监测1、紫外线灯管辐照度值的测定：

（1）检测方法：开灯5分钟后，将测定波长为253.7nm的紫外线强度测定仪（标定有效期内）探头置被检紫外线灯下垂直距离1m的中央处，待仪表稳定后，所示数据即为该紫外线灯管的辐照度值。紫外线灯管辐照度值的测定方法

（2）结果判断：普通30W直管型紫外线灯，新灯辐照强度≥100uw/cm2为格；使用中紫外线灯辐照强度70uw/cm2为合格；30W高强度紫外线新灯的辐照强度≥200uw/cm2为合格。2、化学指示卡法：必须使用卫生部批准生产的产品，产品生产批号明确，且在有效期内使用。

3、注意事项：（1）应保持紫外线灯表面的清洁，每2周用95%乙醇棉球擦拭1次。（2）紫外线灯对眼睛有刺激，不可直视灯管以防引起结膜炎。（3）不得使紫外线光源直接照射到人，以免引起损伤。（4）紫外线可放出臭氧，臭氧过多可使人中毒，在有人工作的环境中，臭氧浓度不得超过0.2mg/m3。（四）压力蒸气灭菌效能监测与质控1、工艺监测：又称程序监测

（1）下排气式压力蒸气灭菌：其灭菌物品包体积不得超过30×30×25cm3，重量不超过5kg，待灭菌物品填装量不得超过灭菌柜室容积的80%，市售无孔铝饭盒与顶盖必须无裂缝和变形；无排气软管或软管锈蚀的手提式压力蒸气灭菌器不得使用；卧式压力蒸气灭菌器输入蒸气的压力不宜过高，夹层的温度不能高于灭菌室的温度；装放时，将难于灭菌的大包放上层，较易灭菌的小包放在下层。

（2）预真空压力蒸气灭菌：其灭菌包体积不得超过30×30×40cm3，用于脉动真空压力蒸气灭菌的物品包，体积不得超过30×40×60cm3，待灭菌物品装填量不得超过柜室容积的90%，同时预真空和脉动真空压力蒸气灭菌器的装填量又分别不得小于柜室容积的10%和5%，以防止“小装量效应”。2、化学指示监测法：需使用卫生部批准的化学指示剂。如物品包外用化学指示胶带，标示物品是否经过灭菌处理；物品包内中心部位用化学指示剂（卡），标示物品是否灭菌，预真空蒸气灭菌器则每周进行1次B-D试验，脉动真空压力灭菌器每晨空锅做1次B-D试验，以检测灭菌器空气排除效果。3、生物学监测：使用嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953、12980）菌片或指示剂。每个灭菌试验包中心部位，分别放置2片（每片用无菌小纸袋装好），将标准试验包分别置灭菌柜室内上，中层中央和排气口处；手提式压力蒸气灭菌器用通气贮物盒（22cm×13cm×6cm）代替标准试验包。盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，56℃培养48小时，观察培养基颜色变化。若2管菌片培养基全部不变色，判为灭菌合格。若其中之一管培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌不合格。

标准试验包组成：3件平纹长袖术衣，4块小手术巾、2块中手术巾、1块大手术巾、30块10cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小。

三、细菌内毒素试验1、定义及适用范围：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中内毒素含量是否符合规定的一种方法，本法仅适用于一次性使用的输液、输血器、注射器等。2、试剂要求：（1）细菌无内毒素国家标准品：用于仲裁鲎试剂灵敏度和试验中阴性对照。（2）细菌内毒素工作标准品：用于标定鲎试剂灵敏度和试验中阳性对照。（3）鲎试剂：灵敏度为0.5Eu/ml，规格为0.5ml。（4）无热原水：内毒素含量小于0.05Eu/ml（0.05内毒素单位/毫升）。3、试验前准备：（1）器具除热原：与试验液接触的所有器具均应除热原，玻璃器具置电热干燥箱内180℃干烤2h或250℃干烤30min；塑料器具30%双氧水或3%双氧水或3%盐酸溶液中浸泡4h，每用无热原水冲洗后于60℃烘干备用。（2）鲎试剂灵敏度测定：试验前应核对使用批号鲎试剂的灵敏度，应符合规定要求。4、试验方法：（1）供试品数量：同一批号至少3个单位供试品（2）浸提介质：无热原水。（3）供试液制备：在无菌条件下，每套输液器内腔注入10ml、注射器内腔注入5ml、输血器内腔注入15ml浸提介质，反复荡洗5次后两端密封，置37±1℃恒温箱中保温2h，取出后将供试液汇集至一无菌无热原有塞玻璃容器。供试液贮存应不超过2h。

（4）试验步骤：将鲎试剂和细菌内毒素工作标准品分别按标量加入无热原水溶解。细菌内毒素工作标准品逐次稀释至0.5Eu/ml，供作阳性对照。取10×75mm试管6支，其中供试品管2支各加入0.1ml供试液，阴性对照管2支各加入0.1ml无热原水，阳性对照管2支各加入0.1ml内毒素工作标准品稀释液。每逐一加入0.1ml鲎试剂溶解液。轻轻混均试管内容物，封闭管口，垂直放入（37±1）℃水浴中保温（60±2）min，轻轻取出，观察结果。

5、结果判定：（1）将试管缓慢倒转180℃，管内容物呈坚实凝胶者为阳性，记录为（+），不呈凝胶状或虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴性、记录为（—）。

（2）供试品2管均为（—）性时，判定产品符合本法规定，不再进行热原试验。

（3）供试品2管匀为（+）或有1管为（+）时，用无热原水将供试液对倍`稀释按上述方法重试，供试品操作4管。如4管均为（—），判定产品符合本法规定，不再进行热原试验。

（4）重试供试品4管中有1管为（+）时，判定产品不符合本法规定，应进行热原试验，并根据试验结果判定。

（5）供试品细菌内毒素含量应不超过0.5Eu/ml。

（6）阳性对照2管应均为（+），阴性对照2管应均为（—），否则试验无效。四、血液透析液的监测

透析液因含有适合细菌生长的电解质，在病人进行透析时，含氯的代谢废物从透析器的血液侧不断地弥散到透析液中，可做为细菌生长的营养物质，为细菌的生长提供一个很好的培养基。透析液从制备到使用有相当长的储存时间，在透析液循环管道中有一些停滞不动的死腔，为细菌生长繁殖提供时间的场所。透析液须加温至37℃为细菌生长提供了条件，因此，细菌可在透析液中大量繁殖，在透析结束时细菌数达高峰。为了减少病人透析时热原反应和菌血症的危险性，应定期为透析液进行监测，监测方法如下：1、标本采集：采样点为透析用水出口，即自来水经过过滤、软化、活性碳吸附，去离子逆渗透等步骤处理后的出口；透析液出口，即透析结束时透析液离开透析器的出口。疑有透析液污染或严重感染病例时应增加采样点，如原水口，透析液配比机、反渗水出口、贮水罐出口、透析液出口等。2、测定时间：每月1次。若检查结果超过参考标准，须再复查。怀疑或确定病人在治疗中有热原反应和菌血症时，应随时检测。3、质量标准：透析用水细菌数不得超过200cfu/ml。透析结果时，透析液中细菌不得超过2000cfu/ml，并且无致热原物质存在。五、常用几种化学消毒剂的浓度测定方法含氯消毒剂浓度测定方法含氯消毒剂浓度测定方法（2）戊二醛浓度测定方法戊二醛浓度监测方法（3）酒精（乙醇）浓度测定方法乙醇浓度测定