太行菊组织培养技术规程DB41-T 1103-2015

ICS65.020

B62

DB41

河南省地方标准

DB41/T1103—2015

太行菊组织培养技术规程

2015-08-13发布2015-11-13实施

河南省质量技术监督局发布

DB41/T1103—2015

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由河南省林业标准化技术委员会提出并归口。

本标准起草单位：郑州大学、河南省绿洲园林有限公司。

本标准主要起草人：史屹峰、黄进勇、张建波、刘彬、赵志营、王景玉、李娇。

本标准参加起草人：崔青艳、韩玉霞、乔林、张献计、王俊、复鹏、田小娟、李幸红、岳彩鹏、朱

世新。

I

DB41/T1103—2015

太行菊组织培养技术规程

1范围

本标准规定了太行菊组织培养的术语和定义、培养基的配制、组织培养、炼苗移栽。

本标准适用于太行菊组织培养。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

太行菊

太行菊(Opisthopapustaihangensis)，菊科菊蒿亚族太行菊属多年生宿根草本植物，中国太行山区特

有珍稀物种。

3培养基的配制

3.1培养基选择

选择MS培养基为基本培养基（MS培养基参见附录A）。

3.2母液与激素的配制

3.2.1大量元素母液的配制

大量元素母液按50倍配制。使用时再稀释50倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。

3.2.2微量元素母液的配制

微量元素母液按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备

用。

3.2.3有机母液的配制

有机母液按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。

3.2.4铁盐母液的配制

分别溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加热并不断搅拌，使完全溶解，冷却后，将2种溶液混合，再

用蒸溜水加至所需容积，按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱

中备用。

3.2.56-苄氨基腺嘌呤配制

称取100mg6-苄氨基腺嘌呤（6-BA），用少量0.1mol/LHCL加热溶解，再用蒸馏水定容至100mL,

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浓度为1.0mg/L。

3.2.6萘乙酸配制

称取10mg萘乙酸（NAA），用1mL无水乙醇溶解，再用蒸馏水定容至100mL，浓度为0.1mg/L。

3.3培养基配方

3.3.11/2MS基本培养基：1/2MS+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；

3.3.2丛生芽诱导培养基：MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；

3.3.3生根培养基：1/2MS+0.2mg/LNAA+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；

3.3.4无激素基本培养基：MS+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条。

3.4配制

以配制10L培养基为例，按顺序进行如下操作：

a)MS为基本培养基，取少量蒸馏水倒入容器内，除了大量元素母液取200mL外，其余母液均取

100mL倒入容器内；1/2MS为基本培养基时；取少量蒸馏水倒入容器内，除了大量元素母液取

100mL外，其余母液均取50mL倒入容器内；

b)称取300g蔗糖倒入容器，搅拌溶解；

c)加蒸馏水定容至10L；

d)按照培养基配方，加入NAA和6-BA。丛生芽诱导培养基加10mLNAA和100mL6-BA；生根培养

基加20mLNAA；

e)称取100g琼脂条，倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂条熔化；

f)稍微冷却后，用精密试纸或酸度计调整pH至5.7～5.8，分装；

2

g)对分装好的培养基用高温高压蒸汽消毒，压力1.1kg/cm、温度121℃条件下保持25min，待灭

菌完成好，压力为0的时候取出培养基，平放在地面上冷却凝固。

4组织培养

4.1培养材料及消毒

4.1.1培养材料的选择和确定

10月底至11月初，采集当年饱满太行菊的种子作为培养材料，存放于4℃冰箱。

4.1.2消毒灭菌

将种子用自来水冲洗2h后，在超净工作台内用75%酒精漂洗15s，后用2%的次氯酸钠浸泡8min（加2

滴聚山梨酯），蒸馏水冲洗2～3次。

4.2无菌播种

用无菌滤纸把种子表面附着的水分吸干净，然后在在超净工作台内用镊子将种子接种到1/2MS培养

基上，置入温度为20℃～25℃光照培养室内诱导种子萌发，待种子发芽长出2片真叶，进行光照处理，

光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养30d～35d。

4.3诱导及分化

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切除长出来的无菌幼苗根部部分，把得到的无菌苗茎接种到丛生芽诱导培养基上，放到光照培养室

培养30d。

4.4增殖继代培养

将诱导出来的丛生芽分割成含2～3个小芽的芽丛，切去死叶和基部黄褐色疏松组织，继续接种到丛

生芽诱导培养基上，放置于光照培养室进行增殖继代培养，30d为一个周期，如此循环。

4.5培养环境

温度为25℃±1℃，光照时间14h/d，光照强度2500lx,相对湿度70%～80%。

4.6生根培养

4.6.1生根苗的选择

从组培苗中切取生长健壮、叶色正常、叶片舒展的无根苗。

4.6.2诱导生根

在超净工作台内，将无根苗上长至4cm以上的再生芽从基部切下，接种到生根培养基上，诱导根原

基的形成，黑暗培养3d～5d。后将其接种到无激素MS培养基诱导根的伸长，光照培养20d～25d。

5炼苗移栽

5.1炼苗

待根长至3cm时开始炼苗，将培养瓶放置温室自然散射光下，温度控制在25℃±1℃，闭口炼苗2d～

3d，再打开瓶盖，加入3mL800倍多菌灵溶液，炼苗3d～5d。

5.2移栽

用镊子将生根苗从培养瓶中取出，洗去基部培养基，在800倍多菌灵溶液中浸泡30min后移栽到基质

中。基质采用草炭土、蛭石、珍珠岩比例为3:1:1。温度25℃±1℃，前3d～4d相对湿度保持在80%～90%，

后逐渐降低湿度，每天叶面喷水2～3次，当试管苗根系发达、形成侧须根后，可移栽到花盆中。

3

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A

附录A

（资料性附录）

MS培养基成分表

MS培养基成分见表A.1。

表A.1

单位为毫克每升

成分含量

硝酸钾（KNO3)1900

硝酸铵（NH4NO3)1650

大量元素磷酸二氢钾（KH2PO4)170

硫酸镁（MgSO4·7H2O)370

氯化钙（CaCl2·2H2O)440

碘化钾（KI)0.83

硼酸（H3BO3)6.2

硫酸锰（MnSO4·4H2O)22.3

微量元素硫酸锌（ZnSO4·7H2O)8.6

钼酸钠（Na2MoO4·2H2O)0.25

硫酸铜（CuSO4·5H2O)0.025

氯化钴（CoCl2·6H2O)0.025

乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA)37.25

铁盐

硫酸亚铁（FeSO4·7H2O)27.85

肌醇100

甘氨酸2

有机盐酸硫胺素（VB1)0.1

盐酸吡哆醇（VB6)0.5

烟酸（VB5)0.5

B

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前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由河南省林业标准化技术委员会提出并归口。

本标准起草单位：郑州大学、河南省绿洲园林有限公司。

本标准主要起草人：史屹峰、黄进勇、张建波、刘彬、赵志营、王景玉、李娇。

本标准参加起草人：崔青艳、韩玉霞、乔林、张献计、王俊、复鹏、田小娟、李幸红、岳彩鹏、朱

世新。

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