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35DB35/T2132—2023实验用秀丽隐杆线虫饲育技术ExperimentalCaenorhabditiselegans—Rearingtechnique2023-10-25发布2024-01-25实施福建省市场监督管理局发布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草1GB/T6682—2008分析实验室用水大肠埃希氏菌OP50EscherichiacoliOP50（E.coliOP50）2DB35/T2132—20235环境与设施5.3.1布局5.4环境3 温度低于-80℃。——冻存液选用S缓冲液1和含有30%甘油的S缓冲液2,详细配方见附录B; ——冻存液中收集的线虫密度宜为每1ml冻存液中包含600～1000只线——冻存管在-80℃冰箱的临时保存区梯度降温至-80℃; 在-80℃冰箱能保存10年：4——雄虫和雌雄同体的比例按为1:1或2:1; 5）；——生长温度在15℃~25℃之间，最常使用的培养温度是2——相对湿度在40％～80%;6 7A.1.1恒温培养箱A.1.2体视显微镜摇床材质无毒、无害、无放射性。配有温度控制系统，能够在10℃~60℃温度范围内调节箱内温A.1.5移液器A.1.6酒精灯A.1.7挑虫器A.1.8洁净工作台A.1.10液氮罐A.2.1培养皿8无毒、无害、无放射性、耐腐蚀、无菌。常用规格有96A.2.4梯度降温盒A.2.5冻存管91g胰蛋白胨，0.5g酵母粉，1g氯化钠（NaCl），加入双蒸水定容至100mL，121°C、0.107MPa1g胰蛋白胨，0.5g酵母粉，1gNaCl，2g琼脂，加入双蒸水定容至100mL，用1M氢氧化钠（NaOH）2.5g酪蛋白胨，17g琼脂粉，3gNaCl，加入975mL的双冷却至55℃后，加入下列溶液（胆固醇溶液过滤除菌，其余溶液在121°C、0.107MPa灭菌20——25mL1M磷酸盐溶液（108.3g磷6g磷酸氢二钠（Na2HPO43gK2HPO4，5gNaCl，0.25g七水硫1.86g乙二胺四乙酸二钠（EDTA•Na2），0.69g七水硫酸亚铁（FeSO4•7H2O），0.2g四水氯化锰（MnCl2•4H2O0.29g七水硫酸锌（ZnSO4•7H2O0.雄虫的形态结构如图C.1所示。(资料性)雄虫及雌雄同体虫的形态结构图图C.1秀丽隐杆线虫雄虫(成虫)形态结构A.A.标引序号说明：A——用相差干涉显微镜拍摄的雌雄同体虫；B雌雄同体虫解剖模式图。在子宫外发育线虫是以OP50为食，OP50具有尿嘧啶缺陷，在NGM培养皿上不可无限生长。LB液白杆菌LeucobacterVerde2微孢子虫Nematocidaparisii较小的体型、生长缓慢、子代数明显减少、注：被感染的线虫在显微镜下会呈现出特定的表型，能以此来判断线虫

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