外周血细胞检验-红细胞检验（临床检验课件）

网织红细胞计数2网织红细胞(reticulocyte，Ret)是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA)，经煌焦油蓝等活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，连缀成线，线连接成网。属于尚未完全成熟的红细胞(当嗜碱性物质消耗殆尽后才被视为成熟红细胞)，一般为8～9.5μm。34任务网织红细胞计数十PARTTEN目录检测原理1

参考范围3

质量保证2

4临床意义

检测原理

1.普通光学显微镜法

活体染色（新亚甲蓝或煌焦油蓝)的碱性着色基团网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷)RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，蓝色的点状、线状或网状结构

，显微镜下计数1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百分比或分数数表示。

流式细胞仪法2．仪器法网织红细胞计数仪血液分析仪法。荧光染料与网织红细胞中RNA结合，发出特定颜色的荧光进行RNA定量精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数(Ret％)。将网织红细胞分成高、中、低荧光强度网织红细胞比率(HFR、MFR、LFR)并计算网织红细胞其他参数。

血液分析仪法

提供与网织红细胞相关的多个参数，网织红细胞绝对值、网织红细胞百分比、网织红细胞平均体积、网织红细胞血红蛋白分布宽度、网织红细胞血红蛋白浓度、网织红细胞平均血红蛋白浓度、

LFR、MFR、HFR、网织红细胞成熟指数。11质量保证以手工计数法为重点

1．染料选择2．正确辨认网织红细胞外周血中网织红细胞主要为Ⅳ型，凡含有2个以上网织颗粒的红细胞均应计为网织红细胞。

3．网织红细胞计数方法

(1)Miller窥盘：(2)显微成像系统：计算机和细胞形态分析软件，①HFR：粗颗粒堆积成网状。②MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。③LFR：细胞内含15个以下细小颗粒

参考范围网织红细胞百分数成人和儿童:0.005～0.025新生儿:0.02～0.06网织红细胞绝对数成人和儿童:(24～84)X109／L参考值临床意义41．评价骨髓增生能力，判断贫血类型。

(1)网织红细胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，各种增生性贫血

(2)网织红细胞减少：常见于再生障碍性贫血

(3)鉴别贫血：2．评价疗效(1)观察贫血疗效：贫血随访缺铁贫或巨幼贫有效治疗后，2～3d后Ret开始上升，7～10d达到最高峰(约10％)，2周后渐降至正常。

(2)骨髓移植后监测骨髓造血恢复：骨髓移植后第21天，如Ret大于15X109／L，常表示无移植并发症；若骨髓开始恢复造血功能，首先HFR和MFR上升，其次为网织红细胞计数值上升。3．放疗和化疗的监测

指导临床适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，而后网织红细胞数值降低；停止放、化疗，骨髓功能恢复后，这些指标依次上升。

网织红细胞计数实验原理实验器材实验试剂操作步骤目

录CONTENTS计算参考值注意事项思考题实验原理

用等渗稀释液将血液按一定倍数稀释，充人计数池后显微镜下计数一定体积内红细胞数，换算求出每升血液中红细胞的数量试验器材、试剂显微镜、改良Neubauer血细胞计数板等试验器材试剂红细胞稀释液改良牛鲍氏计数板操作步骤01取中号试管1支，加红细胞稀释液2.0ml。02用清洁干燥微量吸管取末梢血10μl，擦去管外余血后加至红细胞稀释液底部，再轻吸上层清洗吸管2-3次立即混匀。03混匀后，用干净微量吸管将红细胞悬液充人计数池，不得有空泡或外溢，充池后静置2-3min后计数。04高倍镜下依次计数中央大方格内四角和正中共5个中方格内的红细胞。对压线细胞按"数上不数下、数左不数右"的原则进行计数计数原则计算红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×200×106=5个中方格内红细胞数×1010=5个中方格内红细胞数÷100×1012式中：×55个中方格换算成1个大方格；×101个大方格容积为0.1μl，换算成1.0μl；×200血液的实际稀释倍数应为201倍，按200是便于计算；×106由1μl换算成1L。男：（4.09～5.74）×1012/L女：（3.68～5.13）×1012/L新生儿：（5.2～6.4）×1012/L参考区间注意事项1采血时不能挤压过甚，因此针刺深度必须适当。。2稀释液要过滤，试管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为红细胞3参考范围数值内，两次红细胞计数相差不得超过5%4不允许以血红蛋白浓度来折算红细胞数5充池要均匀，不能有气泡混入、溢出或不满红细胞计数方法手工显微镜法1

血液分析仪法2

计数板01质量控制02方法学评价03红细胞计数测定每升血液中所含红细胞数目，用？.？X1012/L表示参考值04临床意义0301计数板PartOne40改良牛鲍计数板41421准备计数板2加稀释液2ml3加血：10μl混匀4充池5计数操作6计算：红细胞数=N/5*25*10*200*106/L1手工法误差来源：标本、操作、器材、固有误差2仪器法严格按照操作规程、定期进行室内和室间质控。质量控制①血液分析仪的校正②白细胞减少时的对照核实。③血小板计数受小红细胞干扰时的校正方法精确，且操作简便、快速，已广泛应用方法学评价成年男性（4～5.5）×1012/L女性（3.5～5.0）×1012/L新生儿（6.0～7.0）×1012/L参考值(1)年龄与性别的差异(2)精神因素(3)剧烈体力运动和劳动(4)气压降低(5)妊娠中、后期生理性变化(1)红细胞和血红蛋白量减少1）红细胞生成障碍2）造血原料缺乏3）利用障碍红细胞4）破坏过多和失血(2)红细胞增多1)原发性红细胞增多2)继发性红细胞增多3)相对性红细胞增多病理性变化①高于6.8×l012/L，应采取相应的治疗措施。②低于3.5×1012/L为诊断贫血的界限，应继续寻找原因。③低于1.5×l012／L应考虑输血医学决定水平临床意义

红细胞计数实验原理实验器材实验试剂操作步骤目

录CONTENTS计算参考值注意事项思考题实验原理

用等渗稀释液将血液按一定倍数稀释，充人计数池后显微镜下计数一定体积内红细胞数，换算求出每升血液中红细胞的数量试验器材、试剂显微镜、改良Neubauer血细胞计数板等试验器材试剂红细胞稀释液改良牛鲍氏计数板操作步骤01取中号试管1支，加红细胞稀释液2.0ml。02用清洁干燥微量吸管取末梢血10μl，擦去管外余血后加至红细胞稀释液底部，再轻吸上层清洗吸管2-3次立即混匀。03混匀后，用干净微量吸管将红细胞悬液充人计数池。04高倍镜下依次计数中央大方格内四角和正中共5个中方格内的红细胞。计数原则计算红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×200×106=5个中方格内红细胞数×1010=5个中方格内红细胞数÷100×1012式中：×55个中方格换算成1个大方格；×101个大方格容积为0.1μl，换算成1.0μl；×200血液的实际稀释倍数应为201倍，按200是便于计算；×106由1μl换算成1L。男：（4.09～5.74）×1012/L女：（3.68～5.13）×1012/L新生儿：（5.2～6.4）×1012/L参考区间注意事项1采血时不能挤压过甚。2试管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为红细胞。3参考范围数值内。4不允许以血红蛋白浓度来折算红细胞数5充池要均匀，不能有气泡混入、溢出或不满红细胞沉降率测定红细胞沉降率(erythrocytesedimentationrate，ESR)简称血沉，指在规定条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。血沉过程一般分为3期：①缗钱状红细胞形成期，一般要经过数分钟至10min。②快速沉降期，形成缗钱状红细胞以等速下降，约40min。

③细胞堆积期，又称缓慢沉积期或挤紧期，此时红细胞堆积在试管底部。目录检测原理1

质量保证3

方法学评价2

4临床意义

检测原理

1．魏氏法(Westergren法)

将离体抗凝血液置于特制刻度测定管内，垂直立于室温中，记录1h时红细胞层下沉的距离(上层血浆的高度

)，用毫米(mm)数值报告。

2．血沉仪法

血液经抗凝静置后，红细胞下降，红细胞与血浆分离，其界面随时间而下移，血沉仪用发光二极管和光电管检测此界面的透光度改变，得到血沉值并显示红细胞沉降高度H与对应时间t相关的H—t曲线。66方法学评价

1．手工法

魏氏法：为传统方法，为国内规范方法

.EDTA或枸橼酸钠抗凝血液标本充分混合后，吸入魏氏血沉管200mm刻度处，将血沉管垂直室温放置至少60min，应避免振动、风吹、阳光直射，然后读取柱中红细胞沉淀上透明血浆层约lmm处结果。ICSH方法:参考方法,用于验证其他方法的可靠性。2．仪器法血沉仪可动态记录整个血沉过程的变化，描绘出红细胞沉降的曲线，

ESR测定在30min或lmin内得到检测结果，大大缩短了临床等候报告的时间。

72质量保证

红细胞数量、表面积、厚度、直径、血红蛋白量和血浆中各种蛋白比例。影响红细胞缗钱状形成的主要因素有：

1.血浆中各种蛋白的比例，与总蛋白浓度无关。清蛋白带负电荷，球蛋白与纤维蛋白原带正电荷，红细胞因唾液酸而带负电荷，彼此排斥。促缗钱状聚集的物质：纤维蛋白原＞γ球蛋白＞αβ球蛋白、胆固醇、甘油三酯等；清蛋白及卵磷脂则抑制红细胞缗钱状的形成。影响因素

2．红细胞数量和形状

①红细胞数量：一般情况下，红细胞沉降率和血浆逆阻力保持一定的平衡状态，如红细胞数量减少，其总面积减少，所承受的血浆逆阻力也减少，因此血沉加快；但如红细胞数量太少，则影响红细胞缗钱状形成，血沉也减慢；反之，红细胞增多时，血沉减慢。②红细胞直径和形状：直径愈大血沉愈快，球形红细胞、镰形红细胞不易聚集，因而血沉减慢。影响因素3．血沉管与血沉架

血沉管与血沉架规格必须符合标准。血沉管置血沉架上应完全垂直，倾斜时，会加速沉降。4.血标本

避免脂肪血；抗凝剂浓度增加使血沉减慢，每周配制1次，置冰箱血与抗凝剂比例要准确。抽血应在30s内完成，不得混入消毒剂，避免形成凝块。影响因素5．温度

18～25~C的室温下测定。室温过高时血沉加快，可以按温度系数校正。6．其他注射器、试管、血沉管要干燥洁净，以避免溶血。7．及时测定采血后应尽快进行测定，室温下，标本置放时间不应超过4h，置4℃冰箱时枸橼酸钠抗凝血可6h,EDTA抗凝血可24h。影响因素参考范围4

<50岁男性<15mm／h女性<20mm／h>50岁男性<20mm／h女性<30mm／h参考值>85岁男性<30mm／h女性<42mm／h儿童<10mm／h临床意义501血沉增快PartOne生理性女性高于男性。妇女月经期由于子宫内膜破损及出血，血沉略有增快；妊娠3个月以上可因生理性贫血及血浆纤维蛋白原增加使血沉增快；老年人，特别是70岁以上的高龄者，多因纤维蛋白原增高而血沉增快。1各种炎症感染是血沉加快最常见原因。急性细菌性炎症时，由于血中急性时相反应蛋白增多，包括α1胰蛋白酶、α2巨球蛋白、C反应蛋白、转铁蛋白、纤维蛋白原等。在炎症发生后2～3d可出现血沉增快；慢性炎症，如结核病、结缔组织炎症、风湿热等，于活动期常见血沉增快，病情好转时血沉减慢，非活动期血沉可正常。2组织损伤及坏死范围较大的组织损伤或手术创伤常致血沉增快，若无合并症，一般2～3周内恢复正常；心肌梗死时，于发病后3～4d可见血沉增快(急性时相反应蛋白)，并持续1～3周，而心绞痛时血沉多正常。3恶性肿瘤

血沉可作为恶性肿瘤的普查筛选的辅助指标，通常迅速增长的恶性肿瘤血沉均增快，良性肿瘤血沉多正常。恶性肿瘤手术切除后或治疗较彻底，血沉可趋于正常，复发或转移时又可增快。4高球蛋白血症多种因素导致的免疫球蛋白增高可见血沉增快，如系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、亚急性感染性心内膜炎、肝硬化、慢性肾炎等。高粘滞性综合征时，血沉可不增快甚至减慢。5贫血及高胆固醇血症贫血患者血红蛋白低于90g／L时，血沉可轻度增快，并随贫血加增快。高胆固醇血症：如动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综合征、粘液性水肿、原发性家族性高胆固醇血症等，血沉常常增快。病理性02血沉减慢PartTwo

一般临床意义较小，主要见于真红、低纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形态异常(如异形红细胞、球形红细胞、镰形红细胞)。

血沉减慢

红细胞沉降率实验原理实验目的标本采集实验器材实验试剂操作步骤目

录CONTENTS注意事项思考题实验目的红细胞沉降率是指红细胞于一定的条件下沉降的速度，简称血沉（ESR）。ESR的检查属非特异性试验，在许多病理情况下，ESR均可增快，将ESR结果结合临床资料及其他检查结果进行分析时，对判断机体有无炎症、病变有无活动性以及治疗效果的好坏有重要的参考价值，故ESR检查临床上仍在广泛应用实验原理在血液中，由于红细胞膜表面的唾