血液检验基本技术-血涂片制备与染色（临床检验课件）

血涂片的制备推片将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑动。图1-3血涂片制备示意图（上：侧面观，下：正面观）

血涂片制备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾鲜明涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B123血涂片制备实验原理实验目的实验器材实验试剂操作步骤注意事项目

录CONTENTS实验目的掌握血涂片制备的操作步骤实验原理使用推片将血液在载玻片上制成血膜试验器材一次性采血针、酒精棉球、镊子、脱脂洗净的载玻片、推片试验器材操作步骤器具选择1

质量控制3

血涂片的制备过程（常用手工推片法）2

器具选择01载玻片要求国内1.0mm×26mm×（76±0.5）mm，制备血涂片所用的载玻片必须是洁净、干燥、中性的、无油腻。

02推玻片要求推片两端边缘整齐、平滑。也可选用大小、厚度与玻片相同、两端边缘光滑的有机玻璃。03标本要求可用抗凝血和非抗凝血。最好用非抗凝血，但随着血细胞分析仪的普及，血标本多为EDTA抗凝血，可引起红细胞皱缩及白细胞丛集，故推制血涂片应尽早进行（最迟在1～2h内进行）血涂片的制备过程（常用手工推片法）

01取血皮肤采血法采集血标本，取一滴绿豆大小的血标本在载玻片的一端，离端点约1.5cm处。

02推片左手拿载玻片，右手拿推玻片放在血滴前并接触血滴，使血滴沿推片散开成一线。03干燥将制备好的血膜，立即在空中挥动，使其迅速干燥，以避免血细胞皱缩变形。04标记涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号质量控制一张良好的血涂片要求血膜外观厚薄适宜，头、体、尾分明，细胞分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。血涂片制备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾鲜明涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B123注意事项（一）玻片1载玻片应洁净、干燥、中性、无油腻。推片2推片时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀，初学者可把玻片放在桌上操作。注意事项（二）推片后3推好的血涂片应立即在空气中挥动使其尽快干燥，天气寒冷或潮湿时，应将涂片置于37℃恒温箱中保温促干，以免细胞变性缩小。时间要求4血涂片应在1h之内染色或在1h之内用无水甲醇（含水量<3%)固定后染色。血涂片染色目录染色1

观察2

染色瑞氏染色法01姬姆萨染色法02瑞氏-吉姆萨染色03染色方法01瑞氏染色法PartOne1碱性染料为阳离子染料，能接受质子，细胞核的染料。如亚甲蓝、天青。能结合酸性物质并染色，如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞染成蓝色2酸性染料为阴离子染料，能释放质子。如伊红。能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等染成红色。染料组成毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等物理作用a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其它活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。c.周围环境的酸碱度：如环境pH＜pI，则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH＞pI，则结合碱性染料。化学作用原理

图1-4瑞氏染色原理示意图

嗜碱性粒细胞试剂01瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0mlWright染液02

有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态。增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。甲醇：03

（PBS，pH6.4-6.8）：磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到1000ml。磷酸盐缓冲液用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。A加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。B滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。C用清水冲洗，待干后镜检。。D染色方法质量控制血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。染液不能过少，以防蒸发沉淀。冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防止染料沉着。冲洗时间也不能长。染色过淡，可复染。染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色.中性杆状核粒细胞

嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞02姬姆萨染色法PartTwo原

理

吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。吉姆萨染料1.0g甘油66.0ml甲醇（AR）66.0ml[染色方法]1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.将血膜在染液中浸染10-30min3.流水冲洗,待干后镜检试剂03瑞氏-吉姆萨染色PartThree试

剂瑞特染料1.0g吉姆萨染料0.3g甲醇（AR)加至500ml先将瑞特染料和吉姆萨染料充分研磨混匀，甲醇溶解倒入容器中，未溶解完的继续加入甲醇研磨，重复多次，最后把染液加至500ml。染色方法

血片加滴加染液5滴，并立即将染液盖满血膜，2min后加入pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液）10滴，10min后用流水冲洗干净，待干后镜检。

方法学评价

瑞氏染液和吉姆萨染液对细胞进行染色时有各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色较好，后者对细胞核结构显示清晰。因此将二者结合，能取长补短、集中优势，用该混合染液对血细胞进行染色，其细胞核、细胞质和细胞内颗粒均着色鲜艳，对比鲜明。瑞氏-吉姆萨混合染色法是临床上广泛使用的方法。04巴氏染色法PartFour是脱落细胞染色法中较好的染色方法。观察1.染色情况(满意、偏酸、偏碱）2.细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李四123低倍镜观察适宜不适宜不适宜血涂片染色实验原理实验目的实验器材实验试剂操作步骤注意事项目

录CONTENTS实验目的掌握血涂片瑞氏染色的原理和操作步骤，熟悉瑞氏染液的组成和配制实验原理细胞的染色既有物理吸附作用，又有化学的亲和作用，各种血细胞及细胞的不同成分对酸性染料和碱性染料的亲和力不同，因而经瑞氏染液染色后各种血细胞呈现各自的染色特征。试验器材、试剂载玻片、吸耳球、染色架、显微镜实验器材试剂Wright’s染液pH6.8磷酸盐缓冲液操作步骤（一）01制片血涂片制备

02标记待血涂片干透后，用蜡笔在血膜的两端划线并编号。03染色加瑞氏染液3~5滴，覆盖整个血膜，固定细胞约0.5～1min。滴加等量或稍多的缓冲液，用洗耳球对准涂片吹气，使染液充分混匀。操作步骤（二）05镜检血膜外观呈紫红色。显微镜下，红细胞呈粉红色，细胞核呈紫红色，嗜酸性颗粒呈橘红色，嗜碱