微生物学检验技术 课件 22项目二十二：弯曲杆菌和幽门螺杆菌鉴定

项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定学习目标1.掌握弯曲菌属和幽门螺杆菌的微生物学检验方法及鉴定依据。2.熟悉弯曲菌属和幽门螺杆菌的主要生物学特性。3.了解常见弯曲菌属和幽门螺杆菌的临床意义。4.具有正确采集和处理常见弯曲菌属和幽门螺杆菌检验标本及进行相关检测的能力。5.能正确选择试验项目对弯曲菌属和幽门螺杆菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定思维导图弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定微生物学检验生物学特性临床意义弯曲菌属的鉴定幽门螺杆菌的鉴定微生物学检验生物学特性临床意义一、弯曲菌属的鉴定项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定一、弯曲菌属的鉴定概述

弯曲菌属（Campylobacter）细菌是1973年由Veron等建议确定的一个与人类疾病有关的新菌属，属于螺菌科。该菌属细菌是一类微需氧，菌体弯曲呈逗点状、S形或螺旋状，不分解糖类、氧化酶阳性，有动力的革兰氏阴性菌。包括5个种和5个亚种。对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种。空肠弯曲菌是人类腹泻最常见的病原菌之一，胎儿弯曲菌胎儿亚种在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等。1.形态与染色：革兰氏阴性、细长、螺旋形或海鸥展翅状、S形的弯曲杆菌。陈旧培养物可呈球形或长丝状。大小为（0.5～8）μm×（0.2～0.5）μm。一端或两端具有单鞭毛，运动活泼，有时呈螺旋状运动。一、弯曲菌属的鉴定（一）生物学特性2.培养特性：微需氧菌，营养要求高，在普通培养基上不能生长，需加血液、血清。常用的选择培养基有Skirrow琼脂、Butzler培养基和Campy-BAP培养基。初次分离时，经48小时培养可形成两种菌落：一种为扁平湿润、灰白色半透明、边缘不整齐、常延接种线扩散生长的菌落；另一种为圆形凸起、半透明、针尖状、有光泽、单个细小菌落。两种菌落均不溶血。在布氏肉汤内呈均匀浑浊生长。一、弯曲菌属的鉴定（一）生物学特性3.生化反应：生化反应

该菌属生化反应不活泼。氧化酶均为阳性，大多数弯曲菌还能还原硝酸盐，触酶试验为阳性，空肠弯曲菌马尿酸水解试验阳性。不分解糖类、不液化明胶、不分解尿素，V-P和甲基红试验均阴性。4.抗原结构：有菌体（O）抗原、热不稳定抗原和鞭毛（H）抗原。根据O抗原可将空肠弯曲菌分为42个血清型。5.抵抗力：较弱，56℃5分钟即被杀死。干燥环境中仅能存活3小时。一、弯曲菌属的鉴定（一）生物学特性

主要引起人类肠道感染和各种肠道外感染。本菌属中的空肠弯曲菌是引发散发性细菌性肠炎的最常见菌种之一，胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染，其中胎儿亚种为主要的人类致病菌。对红霉素、克林霉素和四环素敏感，多数空肠弯曲菌对氨基糖甙类、氯霉素及氟喹诺酮类敏感，由于可产生β-内酰胺酶，一般对β-内酰胺类药物耐药。一、弯曲菌属的鉴定（二）临床意义1.标本采集：根据不同患者类型采集粪便或肛拭子、血液、脓汁、脑脊液、尿液等标本送检。2.检验方法（1）直接涂片检查1）悬滴标本检查：取新鲜粪便于载玻片上，加生理盐水混合后，覆盖盖玻片置显微镜下观察有无投镖式或螺旋状运动的细菌。脑脊液经3000r/min离心沉淀15min后，制成涂片做悬滴检查。2）革兰染色检查：革兰阴性逗点状、S形或螺旋状小杆菌。一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（2）分离培养：粪便和肛拭子标本直接接种于改良弯曲菌琼脂平板，如改良的Skirrow血琼脂平板和Campy-BAP平板；血液或脑脊液标本接种布氏肉汤增菌后，转种弯曲菌分离培养基，置43℃、37℃，在微需氧环境下培养(24-72)小时，观察菌落特征。一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（3）生化鉴定：单鞭毛具有投镖样或螺旋样动力，需氧环境不生长，微需氧条件下，在弯曲菌选择培养基上形成两种类型菌落，不分解葡萄糖。弯曲菌属的鉴定要点为氧化酶阳性、革兰氏阴性、菌体弯曲或呈S形。最常用的鉴定试验有生长温度（25℃、37℃、42℃）试验、过氧化氢试验、马尿酸盐水解试验、硝酸盐和亚硝酸盐还原试验、硫化氢试验等。一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验触酶25℃生长42℃生长1%甘氨酸H2S马尿酸盐3.5%NaCl胎儿弯曲菌胎儿亚种++v+---胎儿弯曲菌性病亚种v+-----空肠弯曲菌v-+/-+-vv大肠弯曲菌+-++v--唾液弯曲菌粪亚种+-+++--唾液弯曲菌唾液亚种--+++--黏膜弯曲杆菌--+v+--简明弯曲菌--vv+--弯曲菌属主要菌种的鉴别要点二、幽门螺杆菌的鉴定项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定二、幽门螺杆菌的鉴定

幽门螺旋杆菌是一类革兰氏阴性杆菌，菌体细长，呈弧形、S型和螺旋状，陈旧培养物可呈球杆型。一端多根带鞘鞭毛，运动活泼，无芽胞。微需氧，在含5%O2、10%CO2、和85%N2气体环境中生长良好，在大气中和绝对厌氧条件下不生长。最适温度37℃，最适PH7.0，生长时需要一定湿度，以相对湿度98%为宜。营养要求高，一般需含血液或血清才能生长。生化反应不活泼，不能利用糖类，氧化酶阳性，触酶阳性，尿素酶试验强阳性。主要分布在猕猴、大鼠、猪、犬等动物的胃粘膜组织中，67%-80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺旋杆菌引起的。（一）生物学特性

人群中感染幽门螺杆菌非常普遍，胃窦为其定植的最佳部位。幽门螺杆菌的感染与萎缩性胃炎或慢性浅表性胃炎之间的病因关系已确立，流行病学资料表明本菌的感染与胃窦和胃体部位的胃腺癌密切相关。此外，幽门螺杆菌还和胃黏膜相关B细胞淋巴瘤密切关联，针对本菌的治疗可以使淋巴瘤得到缓解。本菌具体发病机制尚不清楚，是多种因素，如细菌的鞭毛、黏附素、尿素酶、蛋白酶、空泡毒素、内毒素等协同作用的结果。（二）临床意义二、幽门螺杆菌的鉴定1.标本采集

通过胃镜用活检钳从近幽门部、胃窦部或病变的邻近处采取多位点样品，置运送培养基中送检，注意防止干燥。如不能及时送检，可置4℃冰箱保存，时间不超过5小时。受检者需术前停服铋剂或抗菌药物一周。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（1）直接显微镜检查1）将活检的组织切碎并研磨均匀，涂片或悬滴，置暗视野或相差显微镜下观察，幽门螺杆菌形态典型，呈典型“投镖样”运动。2）革兰染色检查：将活检的粘膜组织涂片后，革兰染色镜检，发现典型形态的幽门螺杆菌即可诊断。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（1）直接显微镜检查3）组织切片染色镜检：组织块经固定、切片后W-S银染色、吉姆萨染色、HE染色和荧光染色等染色后镜检幽门螺杆菌。4）免疫组化检查：可检出胃黏膜组织切片中完整的幽门螺杆菌及破碎的菌体或抗原成分。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（2）分离培养

应选用新鲜配制的培养基，非选择性培养基可用巧克力琼脂和含5%羊血的Brucella琼脂，选择培养基可用Skirrow琼脂和改良的Thayer-Martin琼脂。将研磨均匀的标本接种培养基后在微需氧、湿润的环境中培养(72-96)小时，方可见细小、圆形、光滑、半透明的菌落。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（3）生化鉴定本菌生化反应不活泼，不能利用糖类，氧化酶阳性，触酶阳性，尿素酶试验强阳性，含尿素酶丰富，可迅速分解尿素释放氨，将标本种入尿素培养基，阳性者培养基由黄变红，可作为鉴定该菌的主要依据。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（4）尿素呼吸试验尿素呼吸试验是临床用于检测幽门螺杆菌感染的一种方法。被检者空腹，口服含同位素13C或14C的尿素，幽门螺杆菌产生的丰富脲酶可以使尿素分解产生标有同位素的CO2，后试验方法。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法(5)粪便抗原检测可采用酶免方法直接测定粪便标本中的抗原。适用于不能进行胃镜检查和13C或14C标记尿素呼吸试验患者。（6）PCR检查从克隆的幽门螺杆菌染色体DNA的特异性片段中构建引物或从Hp脲酶A基因序列中构建引物，用PCR扩增并结合限制性酶切多态性分析技术鉴别幽门螺杆菌，可检测出不能分离培养的幽门螺杆菌。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验螺杆菌属主要菌种的特异性二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验菌种触酶硝酸盐还原碱性磷酸酶脲酶醋酸吲哚酚水解γ-谷氨酰转移酶42℃生长1%甘氨酸萘啶酸头孢噻吩毕氏螺杆菌+++++++-RS犬螺杆菌--+-+++-SI加拿大螺杆菌++/---+-++RR同性恋螺杆菌++-----+SI菲氏螺杆菌+-+-+--+SS幼禽螺杆菌++---ND+-RS幽门螺杆菌+-++-+--RS螺杆菌中“曲挠”菌株+/---+-++-RR温哈门螺杆菌----+ND-+RR

弯曲菌属细菌是一类微需氧菌，不分解糖类、氧化酶阳性，菌体弯曲，有动力的革兰氏阴性菌。包括5个种和5个亚种。对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种。主要引起人类肠道感染和各种肠道外感染。该菌属中的空肠弯曲菌是引发散发性细菌性肠炎的最常见菌种之一，胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染，其中胎儿亚种为主要的人类致病菌。该菌属常对红霉素、克林霉素和四环素敏感。幽门螺杆菌是