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文档简介

凯氏定氮法的测定原理食品中蛋白质的测定第一法凯氏定氮法（包括自动凯氏定氮仪法）第二法分光光度法第三法燃烧法第一法凯氏定氮法一、实验原理

样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。

用H3BO3吸收后，再以标准HCl溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。消化蒸馏吸收滴定然后加碱蒸馏，使氨蒸出。二、实验步骤1、消化

2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4（NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O

要用浓硫酸（98%）（脱水性、氧化性）（1）总反应式：（2）消化分解条件a加硫酸钾作为增温剂，纯硫酸沸点340℃可以提高至400℃以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。b加硫酸铜作为催化剂。还可以作消化终点指示剂、做蒸馏时碱性指示剂。c加氧化剂如双氧水、次氯酸钾等加速有机物氧化速度。2、蒸馏与吸收

2NaOH＋(NH4)2SO4＝2NH3↑

＋Na2SO4

＋2H2O（观察：若所加碱量不足，分解液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，需再增加氢氧化钠用量）2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O吸收蒸馏绿色紫红色3、滴定(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

绿色终点pH为5（紫灰）4、说明消化时不要用强火，应保持和缓沸腾，以免粘贴在凯氏瓶内壁上消化不完全。样品中若含脂肪较多时，消化过程中易产生大量泡沫，在开始消化时应用小火加热，并时时摇动；或者加入少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂，并同时注意控制热源强度。当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，加入30％过氧化氢2～3mL后再继续加热消化。一般消化至呈透明后，继续消化30分钟即可，消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，

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