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备案号：51460-2016DB32Technologyofvirus-freechrysanthemumstockproduce江苏省质量技术监督局发布I 1 1 1 1 2 2 3 3 3 3 3 5本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写1菊花脱毒种苗生产技术规程本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版DB32/T1530-2009切花菊种苗生产技术规程4脱毒处理4.1茎尖培养脱毒4.1.1无菌苗再生体系的建立升汞中洗涤3～5min，取出，用无菌水冲洗5～6次，每次不少于3min，经消毒灭菌后的菊花茎段剪成小段，每段长2-3cm，带有1～2腋芽，接种于MS培养基中，每个组培瓶4.1.2剥取茎尖4.1.3分化培养将剥取的茎尖接种于经过高温湿热灭菌的分24.1.4诱导生根4.2热处理结合茎尖培养脱毒4.2.1热处理方法将待脱毒的菊花植株放入光照培养箱中，采用变温升温的方式进行热处理，在日温/夜温分别为时间16h/天，光强为2000lx。剥取热处理过程长出的新梢顶端0.3～04.2.2热处理茎尖培养脱毒ChrysanthemumvirusBTomatoaspermyvirusTomatospottedwiltvirusCucumbermosaiccucumovirusChrysanthemumstuntviroid菊花萎黄斑驳类病毒Chrysanthemumchloroticmottleviroid(CChmvd)。3株无差异者则可确认为原种苗，有差异则淘汰整个无9建立脱毒苗母本圃4高20cm～22cm,两侧留有透气孔。装箱时种苗袋应直立排放，每箱放置500～1000株。装箱后用胶带11.2包装标识包装箱(图1)上应有明显标识，内容包括：产品名称、质量等级、包装容量、生产单位、产地、采K11.3贮运可在2～5℃冷库中贮存，贮存时间不超过7d。种苗运输时间超过3d时，则应采用控温4～6℃的冷藏车5A.1设备和材料A.2药品和试剂M-MLV反转录酶，5×M-MLV缓冲液，核糖A.2.5加样缓冲液A.3操作步骤6RNA，并加入30μL的无RNase的DEPCRNaseFreedH2O4μL上述模板RNA/引物变性溶液RNaseInhibitor(40U/nl)0RNaseFreedH2O0.85μLMg2+dNTP(2.5mMeach)7ddH2O

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