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DB21MethodfordetectionofEnterococcusfaecalisinfeedingmicrobialpreparations辽宁省市场监督管理局发布I本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全本标准主要起草人：李欣南、武凤娇、韩镌竹、高铎、1饲用微生物制剂中粪肠球菌的检测方法食品安全国家标准食品微生物学检验菌h进行定期检查微生物污染。25.8天平：0.00g～410.005.9冰箱：2℃~8℃。5.12L形玻璃或塑料涂布棒。5.13吸管或移液器：容量为0.1试管、广口瓶、剪子等，应为无菌器皿。样品采集后置于2℃~8℃环境内冷藏保存。采样数量和方式按在超净工作台中称取试样25g（mL），加入盛有225mL释。用灭菌吸管吸取1:10的均匀稀释液1mL，置于灭菌的9mL0.85%灭菌生理3培养后，选取典型菌落数在30个～300个之间的平板计数。典型粪肠球菌菌落呈圆形，表面光滑、隆起，菌落呈黑色或淡黑色，直径在0.5mm～2.0mm大小的将挑选纯化的菌落做革兰氏染色（3.4）镜检。粪肠球菌细胞应为球形，可顺链的方向延长，直径0.5μm～1.0μm，单个、大多数成双或短链状排列，革兰氏染色阳性，无芽孢，不染色悬滴或压滴标本挑取纯化的菌落用麦氏比浊仪调节菌浓至0.5MFC。使用生化鉴定试剂盒、生化鉴定管或者微生物++++----+-42×PCRMix缓冲液112程序设定如下：①预变性：95℃5min；②变性：95℃45s；③退火：48℃45s；④延伸：72℃45s；9检测结果9.1计算每块板上粪肠球菌菌落数计算每块平板上的粪肠球菌菌落数a，使用A——挑取平板上用于验证的菌落数；a=×100＝809.2样品中粪肠球菌菌数的计算方法及报告），N……(2)N--------样品中粪肠球菌菌落数；V--------平板的接种体积，单位为毫升（5d---------第一个稀释度的稀释因子（未经稀释的液体样品的按GB/T8170执行。将计算出的结果保留至两位有效数字，也可将样品的粪肠球菌菌落数记录为6培养基和试剂A.1粪肠球菌培养基A.2哥伦比亚琼脂培养基A.3革兰氏染色A.3.1结晶紫染色液A.3.1.1成分7A.3.1.2制法A.3.2革兰氏碘液A.3.2.1成分碘A.3.2.2制法将碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至30A.3.3沙黄复染液A.3.3.1成分A.3.3.2制法将涂片在火焰上固定，滴

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