3-综述材料-肌酐检测试剂盒(肌氨酸氧化酶法)

肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法）综述资料******生物医疗科技有限公司℃肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法)综述资料******生物医疗科技有限公司第页目录TOC\o"1-3"\h\u99991产品预期用途 395831.1预期用途 3314911.2临床适应症背景情况 34771.2.1相关的临床或实验室诊断方法及产品现状等 3106161.2.2国内外已批准上市的同品种试剂盒情况 4177612产品描述 491982.1试剂盒测定原理 4292142.2试剂盒产品的组成 520402.3主要参数与试验方法 6192872.3.1主要参数 681632.3.2测试过程 6322412.4主要原材料的来源及制备方法 6270432.4.1主要成分 626022.4.2主要原材料的来源 7241102.5主要生产工艺过程 7245873有关生物安全性的说明： 7175784产品主要研究结果的总结和评价 7277374.1主要研究结果的总结 7307494.2分析性能评价 75244.3稳定性评价 8316124.3.1稳定性验证分为实时稳定性（效期稳定性）、运输稳定性、机载稳定性。 8114244.3.2合格标准见下表 8223484.4参考区间 965784.4.1血清肌酐样本参考区间 9218094.4.2尿液肌酐样本参考区间 10319484.5临床评价 1043894.5.1原理、组成对比结果见下表 1098054.5.2储存条件及有效期对比结果见下表 10218014.5.3预期用途、适用样本对比结果见下表 1137894.5.4性能指标对比见下表 1170804.5.5离群值的剔除 11252034.5.6线性回归分析与相关性 11138084.5.7Bland-Altman图分析 12133254.5.7.1血清样本Bland-Altman分析结果 12162324.5.7.2尿液样本Bland-Altman分析结果 12322444.5.8检测结果一致性分析 1229174.5.9医学决定水平处偏倚 1217924.6校准品的量值溯源与性能评价 1227350附录1 13肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法）综述资料1产品预期用途1.1预期用途用于定量检测人血清或尿液中肌酐的浓度。1.2临床适应症背景情况临床上主要作为肾功能的评价指标之一，血液中的肌酐来源包括从食物中摄取的外源性肌酐和机体内生成的内源性肌酐两部分，血肌酐几乎全部经肾小球滤过进入原尿，并且不被肾小管重吸收；机体内肌酐每日生成量几乎保持恒定。因此，血中肌酐浓度稳定，测定血肌酐浓度可反映肾小球的滤过功能。尿液肌酐由血液中肌酐经肾小球滤出，不被肾小管重吸收。血、尿肌酐同时测定可用于计算内生肌酐清除率，以评价肾小球滤过功能。1.2.1相关的临床或实验室诊断方法及产品现状等肌酐在肌肉中从磷酸肌酸通过自发和不可逆转化而形成。正常情况下，人体内肌酐含量基本稳定，肌酐含量是反映肾脏功能的重要指标。肾病在我国乃至世界上的发病率居于前10位，我国隐形肾病患者约占人口的25%，因此肌酐含量的测定对肾脏疾病诊断具有重要意义。酶法是基于肌酐经酶促反应而建立，目前有4条反应途径分别是，肌酐酰胺水解酶法、肌酐亚氨基水解酶-GLDH法、肌酐酰胺水解酶-肌酸脒基水解酶-Trinder反应法、N-甲基乙内酰脲胺水解酶-Trinder反应法。酶法从根上解决了反应特异性的问题，适用于自动分析，是目前临床上检测Cr的主流方法，酶法试剂成本与苦味酸试剂相比较贵。化学发光法与荧光匀相法，其灵敏度高、线性范围宽、分析速度快等特点，但尚未见临床应用的报道。毛细管电泳法的研究和应用仅十余年时间，该方法简单快速，分离效果好，线性范围宽，抗干扰，但相对于分光光度法需要使用特殊设备，临床常规使用仍有不变。拉曼散射法原理与ID-MS类似，虽无质谱仪，但因使用同位素，不便于常规检测。电极法适合POCT，但具抗内源干扰物质能力较差的特点，临床应较少。高效液相层析法，该法准确度和精密度均较Jaffe法和酶法高，但样品前处理及检测过程较繁琐，用时较长，不太适合临床大批量样本检测。同位素稀释质谱法不受基质效应影响，特异性、准确度、精密度都很高，几乎无系统误差，其测定结果与真值最为接近。由于技术条件、辐射污染等问题，这类方法通常只用于产生一级参考测量程序、评价参考方法和对一级校标准品定值。我公司申请注册的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法），属于酶法。1.2.2国内外已批准上市的同品种试剂盒情况生产厂家产品名称注册证编号Creatinine(Enzymatic)肌酐测定试剂盒(肌氨酸氧化酶法)国食药监械(进)字2015第2401999号BeckmanCoulterIrelandInc.肌酐测定试剂盒(肌氨酸氧化酶法)国食药监械(进)字2013第2404371号重庆润康生物科技有限公司肌酐测定试剂盒(肌氨酸氧化酶法)渝械注准20192400064贵州康源生物科技有限公司肌酐测定试剂盒(肌氨酸氧化酶法)黔械注准201824000462产品描述2.1试剂盒测定原理产品所采用的技术是肌酐酶偶联肌氨酸氧化酶法，其偶联酶促反应为：肌酐在肌酐酶的催化下水解生成肌酸，肌酸酶催化肌酸水解产生尿素和肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化生成甘氨酸、甲醛和H2O2，最后偶联Trinder氏反应，比色测定，反应形成的色素与肌酐浓度成正比，此法灵敏度高，线性范围宽，试剂稳定性好。本试剂盒有R1、R2两种试剂，R1试剂主要作用是消除内源干扰，R2试剂主要作用是反应物检测。第一反应：消除内源物质的干扰：EQ\o\ac(○,1)试剂中的肌酸酶催化样本中的肌酸水解，产生尿素和肌氨酸；EQ\o\ac(○,2)肌氨酸与肌氨酸氧化酶反应生成甘氨酸、甲醛、过氧化氢，产生的过氧化氢在过氧化氢酶的作用下分解成水和氧气。EQ\o\ac(○,3)反应式：第二反应：正式启动反应：EQ\o\ac(○,1)样本中的肌酐与肌酐酶的催化下水解生成肌酸；EQ\o\ac(○,2)肌酸酶催化肌酸水解产生尿素和肌氨酸；EQ\o\ac(○,3)肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化生成甘氨酸、甲醛和过氧化氢，生成的过氧化氢在Trinder反应中呈色，反应形成的色素与肌酐的浓度成正比EQ\o\ac(○,4)反应式：在546nm波长处比色，计算出肌酐的浓度值。2.2试剂盒产品的组成试剂盒由R1和R2两种试剂组成。具体成分及包装规格见下表：试剂盒组成试剂中的组成成分含量包装规格试剂1（R1）肌酸酶≥80KU/LR1:5×60ml，R2:5×20ml；R1:4×60ml，R2:4×20ml；R1:3×60ml，R2:3×20ml；R1:2×60ml，R2:2×20ml；R1:1×60ml，R2:1×20ml；R1:2×72ml，R2:1×48ml；R1:3×30ml，R2:3×10ml；R1:4×45ml，R2:2×30ml；R1:2×66ml，R2:2×22ml；R1:1×15ml，R2:1×5ml；肌氨酸氧化酶≥18KU/LN-2基-N-(2羟基-3-黄炳基）-3-甲基苯胺钠盐1.4mmol/L试剂2（R2）过氧化物酶≥30KU/L4-氨基安替吡啉2.5mmol/L肌酐酶≥310KU/L校准品(可选配)肌酐重组蛋白、牛血清白蛋白详见标签1×1ml2.3主要参数与试验方法2.3.1主要参数主波长:546nm样本:6µl副波长:660nmR1:225µl反应温度:37℃R2:75µl反应类型:2点终点法反应方向:上升（+）校正类型:线性2.3.2测试过程步骤程序1仪器吸取样本6µl至样本杯内2加入R1试剂225µl至样本杯内3R1试剂与样本混匀，37℃孵育3-5分钟，读吸光度A14仪器吸取R2试剂75µl至样本杯内5混匀，37℃孵育5分钟，在测定波长下读取吸光度A26计算吸光度：△A=A2-A1；7试验结果计算：2.4主要原材料的来源及制备方法2.4.1主要成分R1试剂主要成分≥80KU/L的肌酸酶、≥18KU/L的肌氨酸氧化酶、1.4mmol/L的N-2基-N-(2羟基-3-黄炳基）-3-甲基苯胺钠盐（TOOS)R2试剂主要成分≥30KU/L的过氧化物酶(POD)、≥310KU/L的肌酐酶、2.5mmol/L的4-氨基安替吡啉(4-AAP)2.4.2主要原材料的来源本公司生产的肌酐测定试剂盒原料均为外购原料，是经过审评的合格供应商，主要原料的生产厂家见下表：原材料名称来源生产厂家肌酸酶外购上海诺丹生物科技有限公司肌氨酸氧化酶外购上海诺丹生物科技有限公司N-2基-N-(2羟基-3-黄炳基）-3-甲基苯胺钠盐外购上海阿拉丁生化科技股份有限公司过氧化物酶外购上海诺丹生物科技有限公司肌酐酶外购上海诺丹生物科技有限公司4-氨基安替吡啉(4-AAP)外购上海阿拉丁生化科技股份有限公司2.5主要生产工艺过程见附录3有关生物安全性的说明：本产品包含的动物源及微生物来源的材料，均经过灭活处理，经生产厂家检验合格，安全无污染；不包含人源生物材料，所有材料在运输、使用过程中，对使用者和环境无生物污染的危害。4产品主要研究结果的总结和评价4.1主要研究结果的总结血清和尿中肌酐测定可为临床评价肾小球滤过功能提供客观指标,因而是临床常做的生化检验项目。我公司生产的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酸氧化酶法），经过分析性能评估、稳定性评价、参考区间、临床评价等验证，确定试剂盒性能质量均达到了研制要求，可以用于临床检测使用。4.2分析性能评价分析性能评估的验证项目，主要包括空白吸光度、分析灵敏度、准确度、精密度、线性区间、分析特异性，各验证项目达到以下要求：检验项目合格标准试剂空白吸光度A(546nm,1cm)≤0.30分析灵敏度样本浓度为100µmol/L时，△A≥0.015线性区间[30~3780]µmol/L；线性相关系数|r|≥0.990[30,70]µmol/L区间内，线性偏差不超过±7µmol/L；[70，3780]µmol/L区间内，线性偏差不超过±10%。精密度重复性CV≤5%批间差试剂盒批间相对极差R≤10%准确度相对偏差不超过±10%分析特异性肌酸交叉反应验证：加入纯品肌酸与基础样品的检测均值的相对偏差±10%。胆红素、血红蛋白、甘油三酯干扰验证：含胆红素血清样本在20mg/dl，基础样本与含有干扰物质检测结果的相对偏差±10%范围内。含血红蛋白血清样本血红蛋白在350mg/dl，基础样本与含有干扰物质检测结果的相对偏差±10%范围内。含甘油三酯血清甘油三酯血清样本在8mmol/L，基础样本与含有干扰物质检测结果的相对偏差±10%范围内。羟苯磺酸钙干扰验证：含20mg/L羟苯磺酸钙的血清样本和尿液样本，与基础样本检测结果的相对偏差±10%范围内。酚磺乙胺干扰验证：含20mg/L酚磺乙胺的血清样本和尿液样本，与基础样本检测结果的相对偏差±10%范围内。抗坏血酸干扰验证：含25mg/L抗坏血酸的血清样本和尿液样本，与基础样本检测结果的相对偏差±10%范围内。对所有适用机型进行了上述验证项目（除分析特异性）的验证，验证结果符合可接受标准，证明了我公司该试剂盒的分析性能良好。4.3稳定性评价4.3.1稳定性验证分为实时稳定性（效期稳定性）、运输稳定性、机载稳定性。4.3.2合格标准见下表，其中画“√”是该验证进行的检测项目，画“——”是该验证未进行的检测项目。检验项目合格标准实时稳定性运输稳定性使用稳定性外观R1试剂为淡黄色澄清液体；R2试剂为无色澄清液体。√√√试剂空白吸光度A(546nm,1cm)≤0.30√√√分析灵敏度样本浓度为100µmol/L时，△A≥0.015√√√线性区间[30~3780]µmol/L线性区间内，线性相关系数|r|≥0.990√√√[30,70]µmol/L区间内，线性偏差不超过±7µmol/L；[70，3780]µmol/L区间内，线性偏差不超过±10%。√√√精密度重复性CV≤5%√√√批间差试剂盒批间相对极差R≤10%√————准确度相对偏差不超过±10%√√√实时稳定性：取3个批号的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法），该3批试剂盒均按照规在2~8℃贮存，分别在0个、3个、6个、9个、12个、15个月时各取出2盒进行检测，检测结果应符合4.3.2中的合格标准，证明了本公司生产的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法）在2-8℃、避光保存至少可以稳定12个月的有效性。运输稳定性：完整的试剂运输包装是将试剂盒放入厚度≥1.5cm的泡沫箱内，试剂周围放入冷冻冰袋，泡沫箱盖盖紧压严，四周用胶带多圈封实，泡沫箱放入厚度≥6.5mm的瓦楞纸箱内，纸箱箱盖盖紧压严，四周用胶带多圈封实后即可运输。考虑到季节变换运输环境温度的变化，为了保证运输过程中试剂盒性能的稳定性，本次验证将包装完整的试剂盒纸箱放入到恒温温度为37℃的培养箱内，分别在0天、3天、7天时各取出2盒在第7天统一生重复性条件下测试，检测结果应符合4.3.2中的合格标准，证明了本公司生产的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法）在预期的包装条件下进行运输可以稳定6天的有效性。机载稳定性：3个批号的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法）各取2盒，完成检测后，将试剂留存于仪器试剂仓内，保持试剂瓶开盖状态，并使仪器处于待机状态，确保试剂处于2-8℃的条件下，并于15天、30天后分别对试剂进行检测，检测结果应符合4.3.2中的合格标准，证明了本公司生产的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法），在开盖使用后于2-8℃的条件下避光保存，可稳定28天。4.4参考区间4.4.1血清肌酐样本参考区间通过对成年男性、女性的血清肌酐进行参考区间的检测试验，最终确定血清肌酐参考区间范围，见下表：血清肌酐参考区间统计表性别样本数量离群值（全距法）结果统计男组120例0例成年男性43~98µmol/L（5~11mg/L)女组120例0例成年女性32~80µmol/L(4~9mg/L)4.4.2尿液肌酐样本参考区间通过对成年人尿液肌酐进行参考区间的检测试验，最终确定尿液肌酐参考区间范围，见下表：尿液肌酐样本参考区间样本数量离群值（全距法）结果统计120例0例4.49~16.88mmol/24h(0.5~1.9g/24h)通过试验结果可见，参考区间范围符合研制设计要求。4.5临床评价******生物医疗科技有限公司（以下简称******）生产的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法），属于免临床试验产品，需要进行临床评价。临床评价对比试剂选择的是深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司（以下简称迈瑞），生产的肌酐测定试剂盒（肌氨酸氧化酶法)，进行对比实验，两者在同一条件下经过标准物质检测，符合标准物质靶值范围。4.5.1原理、组成对比结果见下表：厂家名称******试剂迈瑞试剂原理肌酐酶偶联肌氨酸氧化酶法，偶联Trinder氏反应，比色测定，反应形成的色素与肌酐浓度成正比肌酐酶偶联肌氨酸氧化酶法，偶联Trinder氏反应，比色测定，反应形成的色素与肌酐浓度成正比组成R1肌酸酶肌氨酸氧化酶N-2基-N-(2羟基-3-黄炳基）-3-甲基苯胺钠盐（TOOS)肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化氢酶R2过氧化物酶(POD)、肌酐酶、4-氨基安替吡啉(4-AAP)肌酐胺基水解酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林4.5.2储存条件及有效期对比结果见下表;厂家名称******试剂迈瑞试剂储存条件及有效期该试剂盒于2℃～8℃避光环境中密封保存，有效期为12个月；试剂开瓶后避光保存，在2~8℃可稳定28天。未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。试剂开瓶后应避光保存了，在2℃~8℃可稳定28天。试剂不可冰冻。4.5.3预期用途、适用样本对比结果见下表：厂家名称******试剂迈瑞试剂预期用途用于体外定量测定人血清、或尿液中肌酐的含量用于体外定量测定人血清、血浆或尿液中肌酐的含量适用样本血清、尿液血清、血浆、尿液4.5.4性能指标对比见下表：厂家名称******试剂迈瑞试剂性能指标线性30~3780µmo/L；线性相关系数|r|≥0.990；[30,70]µmo/L区间内，线性绝对偏差不超过±7µmo/L；[70，3780]µmo/L区间内，线性相对偏差不超过±10%10~7000µmo/L；线性相关系数|r|≥0.990；[30,70]µmo/L区间内，线性绝对偏差不超过±7µmo/L；[70，3780]µmo/L区间内，线性相对偏差不超过±10%空白吸光度A(546nm,1cm)≤0.30试剂以水为空白在37℃±1℃，546nm波长条件下，吸光度<0.2A分析灵敏度样本浓度为100µmol/L时，样本浓度为60µmol/L时，吸光度变化≥0.016A重复性试剂批内重复性CV≤5.0%试剂批内重复性变异系数≤3.0%批间差试剂盒批间差R≤10.0%试剂盒相对偏差≤5%准确度采用相对偏差，B±≤10.0%——4.5.5离群值的剔除采用统计学中的4倍法进行离群点检查，两者试剂的检测结果均没有离群值。4.5.6线性回归分析与相关性4.5.6.1血清肌酐数据：Pearson相关系数r=0.9976，如图。进行回归分析，计算得截距（a）：0.1029（-10.7104，10.5046），斜率（b）∶1.0004（0.9844，1.0165），回归方程为：Y=1.0004x-0.1029，决定系数r'=0.9952。Pearson相关系数接近于1，说明两种试剂的相关关系密切。回归方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）95%CI包括1，说明两种试剂的一致性比较好。4.5.6.2尿液肌酐数据：Pearson相关系数r=0.9927，如图。进行回归分析，计算得截距（a）：1.191（-179.4220，181.8040），斜率（b）∶1.0108（0.9826，1.0389），回归方程为：Y=1.0108x+1.191，决定系数r'=0.9855。Pearson相关系数r接近1，说明两种试剂的相关关系密切。回归方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）95%CI包括1，说明两种试剂的一致性比较好。4.5.7Bland-Altman图分析4.5.7.1血清样本Bland-Altman分析结果******试剂与迈瑞试剂血清样本肌酐检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.8997到1.1368之间。超出置信区间的百分比为；0.00%。两种试剂检测浓度差值百分比在±SD之间均匀分布。4.5.7.2尿液样本Bland-Altman分析结果******试剂与迈瑞试剂尿液样本肌酐两种试剂检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.8981到1.0824之间。超出置信区间的百分比为；0.00%。两种试剂检测浓度差值百分比在±SD之间均匀分布。4.5.8检测结果一致性分析血清肌酐组内相关系数（ICC)法进行一致性分析，ICC等于0.998，p值小于0.05.两者一致性良好，ICC等于0.993，p值小于0.05.两者一致性良好。尿液肌酐组内相关系数（ICC)法进行一致性分析，ICC等于0.993，p值小于0.05两者一致性良好。4.5.9医学决定水平处偏倚4.5.6.1血清肌酐医学决定水平可接受的偏倚限值-7.0500至7.0500，决定水平处偏倚是0.5232在可接受偏倚限值范围内。4.5.6.2尿液肌酐医学决定水平可接受的偏倚限值是-125.0000至125.0000，决定水平处偏