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DB21DB21/T2591—2016口蹄疫病毒非结构蛋白单抗阻断ELISA检测方法MonoclonalantibodyblockingELISAdetectionmethodoffoot-and-mouthdiseasevirusnonstructuralproteinantibody辽宁省质量技术监督局发布I 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 3 41本标准规定了口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）的检测方法、判定标件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用GB/T6682分析实验室用水规格和试GB16548－2006病害动物和病害动物产品生物安全处ELISA酶联免疫吸附试验（EnzymOD450nm值450nm波长4检测方法包被有口蹄疫病毒非结构蛋白抗原的96孔ELISA板；辣根过氧化物酶标记的抗口蹄疫病毒抗原的单克隆抗体；含有0.05%（体积分数）Tween-20的磷酸盐缓冲液（PBS－T），0.01mol/L，pH7.4,配制方法见附录A.1章；含有0.1%（质量浓度）牛血清白蛋白的PBS-T，使用当日配制；含有TMB及过氧化氢尿素的柠檬酸-磷酸盐缓冲液，配制方法见附录A.2章；2mol/L硫酸溶液，配制方法见附录A.3章；本标准所用化学试剂除另有特殊规定外，均为分析纯。试剂配制用水需满足GB/T6682的要求。取动物全血，24.3.2在记录表上记录阳性对照、阴性对照和样品的位置。分别在相应孔中加入阳性对照（2孔）和阻断率（Inh%）=（阴性对照孔OD450均值-样品孔OD450——被检样品阻断率（Inh%20%，判为FMDV-NS抗体阴性。——被检样品阻断率（Inh%25%，判为FMDV-NS抗体阴性。检测过程中的废弃物，应收集后按CB16548－2003主要试剂配方A.2底物溶液A液：水柠檬酸（C6H8O7•H2O）2.10gNa2HPO42.82g75%过氧化氢尿素A.3终止液4B.1血样采集及处理过程，应进行无菌操作，防止样本因污染发生变质。存放血样的容器应无菌，或B.2血液自然凝固后无菌分离血清装入灭菌离心管或小瓶中，加盖密封后冷藏保存。每份血清样品贴标签并写明编号、采集地点、免疫背景、时间等，以便通过抗体检测，做出B.4血样处理及检测过程中产生的废弃物应放入专门的废弃物容器，废弃

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