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DB21DB21/T2592.3—2016鸡传染性疾病检测方法第3部分：鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法DetectionmethodofchickeninfectiousdiseasePart3:Thetestingmethodofreal-timefluorescentPCRforchickenMarek'sdisease辽宁省质量技术监督局发布I 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 5——鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法——鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测方法——鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法本部分起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物1件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic实时荧光PCR：实时荧光聚合酶链式反应（real-timefluore4仪器与器材4.1.2高速离心机4.1.6微量移液器（最大量程为2μL，20μL，200μL，25.1DNAzol®Reagent：DNA抽提试剂，外观为淡绿色，于4℃~8℃保存。5.575%乙醇：用无水乙醇和灭菌双皮肤要选病变明显部分的边缘，采取少许放入1.5mL离心羽毛选病变明显部分，用刀片刮取羽毛及根部的皮屑少许，放入1.5mL离心管将产生马立克氏病毒蚀斑的细胞培养物冻融3次，转入1.5mL离心管采集的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24h；若需长期保存，应放置-70℃冰箱，但应避免送到实验室。按照《兽医实验室生物安全技术管理规范》进行样品生物3在样本处理区进行。在各设定的荧光PCR管或96孔板4Ct值>30.0，且出现扩增曲线的样本判定为可疑。可疑样本进行双孔重复试验，若任一孔或两孔重复试验结果Ct值≤30.0并出现典型扩增5A.10.02mol/LpH7.2磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）A.1.10.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H20）71.A.1.20.2mol/L磷酸二氢钠溶液：称取磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H20）31.21g，先加适量去离子水溶A.1.3

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