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DB21DB21/T1861.2—2010水产生物种质检验技术规程扩增片段长度多态性法AFLPproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31发布2011-02-01实施辽宁省质量技术监督局发布I1GB/T18654.15-2008养殖鱼类种质检验第15部分：2DNA酶切后经PCR进行选择性扩增，先将基因组DNA用两种限制性内切酶酶切成大小不等产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳将特异的限制性片段分离。由于不同来源DNA的酶切片段存在5.20乙二胺四乙酸（EDTA分析纯。34空白对照管；在每个离心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。毛囊裂解液用1×PCR缓冲液(50用苯酚和氯仿方法抽提DNA；用50µLTE缓冲液（10mmol/LTris-HClpH8.0，lmmol/LEDT末状；将研钵放入65℃水浴至样品粉末刚开始融化，向研钵中加入DNA提取液(10mmol/L5吸取1~3µL提取的DNA，用浓度1~2％g/mL)=[A260／(0.020×L)]×本规程统一采用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切组合反应体系。按表1配体积(µL） ————体积(µL）627循环降低退火（1）模具处理与安装：清洗用作模具的玻璃板并晾干，并分别涂上），（3）预电泳凝胶聚合后，将梳子正向插入胶顶空处，形成加样孔，连接好电泳设备，添加TBE（9）将上述胶板置于凝胶成像仪中，利用相关图像采集系8Shannon多样性指数(Shannonindex，I)、遗传距离（GeneticDistance，D）等遗传参算。并用UPGMA做基于Nei’s遗传距离的树形图，以及用邻近法（Neighborjoiningmethod，NJ）构建MseⅠ选择扩增引物：5

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