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DB21DB21/T1861.3—2010水产生物种质检验技术规程简单重复序列间区扩增法ISSRproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31发布2011-02-01实施辽宁省质量技术监督局发布I1本标准规定了水产生物简单重复序列间区扩增法（ISSR）的原理、试剂和材料、仪器、采样、分2简单重复序列间区扩增法inter-simplesequencerepeat3）；4空白对照管；在每个离心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。毛囊裂解液用1×PCR缓冲液(50取-20℃下冻存的脏器0.2g，置于液氮中研成粉末；加DNA提取液(10mmol/LTris-HCl，pH8.取鲜样品50~150mg，剪成小块放入研钵中，加入液氮末状；将研钵放入65℃水浴至样品粉末刚开始融化，向研钵中加入DNA提取液(10mmol/L吸取1~3µL提取的DNA，用浓度1~2％5260nm波长下测定产物（或产物稀释液）的紫外吸收值。根据公式(1)Buffer(10)1234（1）模具处理与安装：清洗用作模具的玻璃板并晾干，并分别涂上），6（7）银染取下凝板，拆除耳板和边条，将其放入（9）向漂洗过的凝胶中加入2%的硝酸，氧化5分钟。待氧化结束，同样用超纯9.1数据统计选择电泳后清晰的扩增片断进行数据统计。在相同迁移位置，按每一个体扩增片断位基因频率、哈代-温伯格平衡检验、遗传杂合度、遗传距离、香农指数等遗

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