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DB21DB21/T1861.4—2010水产生物种质检验技术规程简单重复序列扩增法Simplesequencerepeatproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31发布2011-02-01实施辽宁省质量技术监督局发布I1本标准规定了水产生物简单重复序列扩增法的术语定义、原理、试剂、仪器、取样、DNA提简单重复序列(simplesequenc2平均遗传杂合度（averageheteroz3邻近结合法聚类分析（Neighborjoi析，通过碱基的变化和差异计算相互之间的进微卫星侧翼的DNA片段克隆、测序，然后根据微卫星的侧翼序列设计引物将微卫星位点扩增出来。由5.710×Tris硼酸(10×TBE)电泳缓冲液按附录A配制5.86上样缓冲液45.18N,N,N,N—四甲基乙二胺（TEMED）5.25乙二胺四乙酸(EDTA)5空白对照管；在每个离心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。毛囊裂解液用1×PCR缓冲液(50取-20℃下冻存的脏器0.2g，置于液氮中研成粉末；加DNA提取液(10mmol/LTris-HCl，pH8.末状；将研钵放入65℃水浴至样品粉末刚开始融化，向研钵中加入DNA提取液(10mmol/L吸取1~3µL提取的DNA，用浓度1~2％6260nm波长下测定产物（或产物稀释液）的紫外吸收值，根据公式(1)PCRBuffer(10)17234），89并用UPGMA做基于Nei’s遗传距离的树形图小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料12将氯仿和异戊醇按24:1体积比N,N-亚甲叉

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