《茶青中三氯杀螨醇的快速检测方法 胶体金免疫层析法》

ICS65.100

CCSX04

T/FQIA

团体标准

T/FQIA015-2022

茶青中三氯杀螨醇的快速检测方法

胶体金免疫层析法

Colloidalgoldimmunochromatographicmethodforrapiddetermination

ofDicofolintealeaves

（征求意见稿）

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2023-XX-XX发布2023-XX-XX实施

福建省质量检验协会发布

T/FQIA015-2023

茶青中三氯杀螨醇的快速检测方法胶体金免疫层析法

1范围

本文件规定了三氯杀螨醇农药残留的胶体金免疫层析法的原理、试剂与设备、分析步骤、结果判定。

本文件适用于茶青中三氯杀螨醇农药残留的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

NY/T2102-2011茶叶抽样技术规范

3术语和定义

胶体金免疫层析法Colloidalgoldimmunochromatographicmethod

胶体金免疫层析法就是以胶体金为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体特异性结合原理，在层析过程

中完成这一反应，从而达到检测目的的方法。

4原理

本方法采用竞争抑制免疫层析法原理。试样中三氯杀螨醇经提取后与胶体金标记的三氯杀螨醇特异

性抗体结合，抑制抗体和检测线（T线）上偶联抗原的免疫反应，从而导致T线颜色深浅的变化。通过

T线的显色深浅及与质控线（C线）颜色深浅比较，对试样中三氯杀螨醇进行定性判定。

5试剂与材料

5.1试剂

5.1.1甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）。

5.1.2样品提取液：茶青试样胶体金免疫层析检测卡（或试纸条）专用提取液。

5.2标准品

三氯杀螨醇标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。

注：或等同可溯源物质

表1三氯杀螨醇标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量

中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量

三氯杀螨醇Dicofol115-32-2C14H9Cl5O370.486

5.3标准溶液的配制

5.3.1三氯杀螨醇标准储备液（50mg/L）：准确称取5.0mg（精确至0.01mg）三氯杀螨醇标准品

（5.2），置于50mL烧杯中，加入适量甲醇（5.1）溶解后，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容

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至刻度，摇匀，配制成浓度为50mg/L的三氯杀螨醇标准储备液。避光-18℃及以下条件保存，有效期

6个月。

5.3.2三氯杀螨醇标准工作溶液（0.2mg/L）：准确移取三氯杀螨醇标准储备液（5.3.1）0.4mL于

100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成浓度为0.2mg/L的三氯杀螨醇标准工作溶液，

临用现配。

5.4材料

三氯杀螨醇胶体金快速检测试剂盒：一般含三氯杀螨醇检测卡（或试纸条）及配套试剂。

5.5除另有规定外，所有试剂均为分析纯，所有实验用水为GB/T6682中规定的二级水。

6仪器和设备

6.1电子天平：感量分别为0.01g和0.01mg。

注：如直接使用符合规定的标准溶液时，无需配备感量为0.01mg的天平。

6.2移液器：量程为200μL、1000μL、5000μL。

6.3涡旋振荡器。

6.4离心机：4000r/min离心机。

6.5样品浓缩仪：25L/min样品浓缩仪。

7分析步骤

7.1试样制备

7.1.1按NY/T2102-2011茶叶抽样技术规范进行茶青样品抽样，将样品剪碎/切碎成小于1cm见方碎

片，备用。

7.1.2称取6g剪碎/切碎的待测样品于50mL离心管中；

7.1.3加入15mL三氯杀螨醇提取试剂1，涡旋振荡或手动上下振荡2min，提取后加入5g提取试

剂2，手动摇匀2min，离心；

7.1.4用5mL活化剂将SPE柱进行活化；

7.1.5将离心后的上清液过柱，收集流出液；

7.1.6将收集的流出液于75℃下吹干后用0.3mL复溶液复溶，即为样品待测液。

7.2试样测试

7.2.1从包装袋中取出检测卡（或试纸条），恢复至室温，启封后应在1h内立即使用；

7.2.2取样品待测液120μL（约5滴）垂直滴于检测卡中，见图1；

7.2.3在加样后开始计时，10~15min读取结果，其他时间读取无效。

图1加样示意图

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8结果判定

采用目视法，通过对比检测区（T线）和质控区（C线）色带有无和颜色深浅按照图2和如下原则

进行结果判定：

图2

8.1阴性（-）：C线显色，T线显色比C线深或两者接近，表示样品中待检物质浓度低于检测限。

8.2阳性（+）：C线显色，T线显色比C线浅或不显色，表示样品中待检物质浓度大于等于检测限。

8.3无效：C线不显色，表明不正确的操作过程或检测卡已失效。在此情况下应再次检查操作步骤，

并用新的检测卡或试纸条重新测试。

9检测指标

9.1检测限

茶青中三氯杀螨醇残留的检测限为0.2mg/kg。

9.2灵敏度

灵敏度≥98%。

9.3特异性

特异性≥95%。

9.4假阴性率

假阴性率≤2%。

9.5假阳性率

假阳性率≤5%。

注：性能指标计算方法见附录A。

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附录A

（规范性）

定性方法性能指标计算表

定性方法各个性能指标计算方法见表A.1。

表A.1定性方法性能指标计算表

检测结果b

样品情况a总数

阳性阴性

阳性N11N12N1.=N11+N12

阴性N21N22N2.=N21+N22

总数N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2

2=（N12-N21-1）2/（N12+N21），

显著性差异（2）

自由度（df）=1

灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.

特异性（p-，%）p-=N22/N2.

假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度

假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性

相对准确度，%c（N11+N22）/(N1.+N2.)

注：

N：任