《三种消毒剂对大肠杆菌抑菌效果的影响研究》10000字（论文）

三种消毒剂对大肠杆菌抑菌效果的影响研究目录TOC\o"1-3"\h\u29538摘要 第3章结果与讨论3.1病原菌最小杀菌浓度结果试验结果表明，84消毒剂在350mg/L的浓度下，菌数多不可计，在450mg/L、550mg/L浓度下，菌数为0cfu；新洁尔灭在400mg/L的浓度下，菌数多不可计，在500mg/L、600mg/L浓度下，菌数为0cfu；乙醇在65%的浓度下，菌数多不可计，在70%、75%浓度下，菌数为0cfu。如表所示。表2第1组实验菌悬液+消毒剂品类稀释浓度各组平均回收菌属（cfu/ml）第1次第2次第3次84消毒剂550mg/Laaa450mg/L000350mg/L000新洁尔灭400mg/Laaa500mg/L000600mg/L000乙醇65%aaa70%00075%000注:a表示多不可记，表3第2组实验菌悬液+LB肉汤品类各组平均回收菌数（cfu/mL）第1次第2次第3次菌悬液+LB肉汤aaa注:a表示多不可记表4第3组实验LB肉汤品类各组平均回收菌数（cfu/mL）第1次第2次第3次LB肉汤0003.2中和剂鉴定试验结果结果表明，第1组平均生长菌落数为0cfiu/mL，第2组平均生长菌落为2.56x102cfu/mL、2.34x102cfu/mL和1.98x102cfu/mL,第3、4、5组3组间误差率分别为3.86%、2.67%和3.87%，如表5所示。表5中和剂鉴定实验结果编号各组平均回收菌属（cfu/ml）123456新洁尔灭02564.5×1074.03×1074.23×10708402343.8×1073.62×1073.54×1070乙醇01983.32×1073.19×1072.98×1070注：①84消毒剂：450

mg/L84消毒剂（1:98倍稀释）；②新洁尔灭：500

mg/L新洁尔灭消毒剂（1:54倍稀释）；③乙醇：70%乙醇3.3悬液定量杀菌实验结果实验结果表明，新洁尔灭和70%乙醇对大肠杆菌杀灭效果较好，在1.5min时即可对大肠杆菌杀灭率达到100%。；84消毒剂对大肠杆菌杀灭效果最差，0.5min、1min、1.5min、2min均不能完全杀灭大肠杆菌，直至3min时才完全杀灭，总体杀菌效果比其他2种消毒剂差。如表6所示。表6菌悬液定量杀菌实验结果消毒剂品种作用不同时间菌落总数（每100µL）0.5min1min1.5min2min3min84aaa1380新洁尔灭a130000乙醇a231000注：①84消毒剂：450

mg/L84消毒剂（1:98倍稀释）；②新洁尔灭：500

mg/L新洁尔灭消毒剂（1:54倍稀释）；③乙醇：70%乙醇；a表示多不可记。3.4分析与讨论表2分析：在菌悬液为1×106cfu/mL加入84消毒剂，其最小杀菌浓度为450mg/L；加入新洁尔灭其最小的杀菌浓度为500mg/L；加入乙醇其最小的杀菌浓度为70%。由此可选取出最适宜的消毒剂浓度84消毒剂450mg/L、新洁尔灭500mg/L和70%乙醇，如表2所示。表3分析：菌悬液+LB肉汤，三组实验都长出大量的菌株。证明大肠杆菌悬液在LB培养基中能够良好的生长，如表3所示。表4分析：LB肉汤中不含有微生物，不会影响实验结果，如表4所示。表5分析，第1组平均生长菌落数为0cfiu/mL，第2组平均生长菌落为2.56x102cfu/mL、2.34x102cfu/mL和1.98x102cfu/mL,第3、4、5组3组间误差率分别为3.86%、2.67%和3.87%，因此，含3g/L卵磷脂，30g/L吐温-80的磷酸缓冲溶液(PBS)能有效的中止500mg/L新洁尔灭、70%乙醇残留毒性。含5g/L硫代硫酸钠，10g/L吐温-80的磷酸缓冲溶液(PBS)能有效的中止450mg/L含氯消毒剂（84消毒剂）的残留毒性，中和剂及中和产物对试验菌和培养基均无不良影响，可作为本研究用于细菌定量杀菌试验的中和剂。如表5所示。表6分析，新洁尔灭和70%乙醇对大肠杆菌杀灭效果较好，在1.5min时即可对大肠杆菌杀灭率达到100%。；84消毒剂对大肠杆菌杀灭效果最差，0.5min、1min、1.5min、2min均不能完全杀灭大肠杆菌，直至3min时才完全杀灭，总体杀菌效果比其他2种消毒剂差。如表6所示。大肠杆菌是日常生活中随处可见的一种微生物，与我们的生活密切相关，它同时也对我们的生活有很大的影响，在我们的日常生活中，大肠杆菌的作用也越来越重要。但怎样消灭大肠杆菌也是非常重要的，我们在加大对它进行科学的研究，采取十分必要的防护措施，从而使它对人类及其他生物的危害减小。它与人类的活动密切相关，在人类的生产生活中充当着重要的角色，但其中不乏对人类有危害的种类。猪源肠外致病性大肠杆菌能够引起猪的肾炎、肺炎、败血症以及脑膜炎等症状[28];同时也造成对年纪非常小的孩子影响很大；从另一个角度来看，食品安全中很大一部分的负面效应是大肠杆菌这种病菌所引起的。在人们的日常饮食中，随处可以看到猪肉的影子，人们在日常饮食中几乎离不开它，但是大肠杆菌一旦侵入到猪身上会发生发一系列的疾病，如果没有经过严格处理的话，那么这些病猪就很有可能会流入市场，猪身上的疾病就会成为食品安全隐患。本次实验是在理想的环境中进行实验的，如果在现实的操作过程中可能会受到来自光照、湿度、温度、气候不可抗拒等因素的影响，建议在完全清理过污染物后进行彻底的消毒。根据不同的实验所用的微生物选择不同种类消毒剂和使用浓度、作用时间，酸碱度要稀释到适宜的浓度。在生产生活中，消毒剂的滥用会导致细菌会对相关的消毒剂和非相关性消毒剂产生抗性[29]。并且，在同一个环境或者同一个地方长期使用同一种消毒剂，细菌会产生耐药性导致消毒效果下降[30]。在进行操作时，最好消毒剂可以交替使用，避免单一的消毒剂使用过多，使菌体产生耐药性，也同时减少集中消毒剂的混合使用，成分的不一，混合之后如果发生化学反应，可能会对杀菌效果产生影响，更有甚者可能会对人体产生危害。3.4.1三种消毒剂的作用机理三种消毒剂中，84消毒剂和乙醇是我们日常生活中接触比较多的消毒剂，其中84消毒剂的主要成分是次氯酸钠，它的消毒对象多见于封闭环境和一些实实在在的物体。它的主要成分具有极强的强氧化性，这种强氧化性能够让微生物丧失繁殖和感染的功能。它可以抑制和杀灭各种疾病中的微生物,其中代谢产品不会给人类和自然环境造成任何影响其消毒剂主要应用于家庭、禽舍、饮水、畜禽等地方的消毒。其对大肠杆菌的作用不是那么明显。葡萄球菌和营养芽孢杆菌对季铵化合物类的敏感性提供了合理的解释[31]。新洁尔灭菌剂属于一种季铵硝酸盐类的化学消毒剂它主要的作用是一种阴酸阳离子和人体表面的化学活性剂,在生物消毒学的产品分类上它主要还是属于较为低效的化学消毒剂,穿透力强,作用力和速度快无任何化学物理刺激性,其中的化学杀菌作用大大地直接改变了细菌细胞壁的通透性,使得这些细菌完全丧失了摄取各种营养素的主要能力并且有效地直接抑制了进入人体细胞中的各种菌体新陈代谢和许多消化酶系统的正常生长和恢复活力。其对大肠杆菌具有明显的杀灭作用。乙醇的杀菌和灭毒功能能力的好坏及其浓度的好坏有很大程度上影响了它们的作用过高或者太低都是不行的。其70%乙醇对大肠杆菌具有很强的杀菌力。3.4.2注意事项（1）进行操作的时候要求要严格遵守无菌操作相关的规则，用到的所有仪器耗材（枪头、培养皿、移液枪、西林瓶等），所有的样液都需要经过高压灭菌方可使用，防止被污染，导致实验的失败。（2）在进行滴加液体的过程中，每次吸加样液移液枪都要换取一个新的无菌枪头，必避免发生感染。这次过程中操作步骤多，使用的仪器数量多，要认真仔细执行，保证实验的顺利进行。（3）在吸取液体时，使用移液枪的量程规格要与吸取液体的容量所匹配切记不能用大量程吸取少量的液体。（4）中和产物应充分的混匀在一起，这一步必须认真操作；最大限度地减少微生物与中和剂或中和产物的作用时间。（5）该方法的适用性取决于消毒剂、实验微生物和消毒试验是属于哪种类型、化合物中含有的成分等。条件的微小变化可能会影响中和剂的去除效率，任何消毒试验，包括更换消毒剂或微生物，必须在规定的方法内进行，可用于正式的实验。不应省略这些步骤，因为它们可能导致不正确的结果。3.4.3中和方法的改进依据2002年版《消毒技术规范》中的中和剂鉴定试验，第1组无菌或有少量菌生长;第2组有菌生长，但较第1组多，远少于第3、4、5组;第3、4、5组有相似量试验菌生长，且组间菌落数误差率不超过15%，第6组无菌生长[32]。在这之前的计划中，规定将第6组分成3部分进行，应含有中和剂、无菌水、同一部分将作为阴性对照将化繁为简，能够保持实验的进行。遵循规定，消毒剂浓度在中和剂鉴定试验中应遵循产品书中所规定的最高浓度为标准，但这带来了一些问题，使1、2组无菌生长，剩余的三组（3、4、5组）均符合菌体生长要求，这并不能表明中和剂能否使用。剩余的3组（3、4、5组）菌体生长数量相差不足15%数量基本一致，表明中和产物不会影响菌体的正常生长及繁殖，也能够证明消毒剂能够被中和剂中和，不能证明消毒剂能否抑制细菌生长。在此基础上要进一步证明消毒剂能够杀死菌体并和有效的中和剂，就需要证明出第二组有菌体能够生长。石映祥[33]发现在原来的基础上，通过对消毒剂的稀释或进行中和剂的同倍稀释，可以得出菌体数量均符合规范要求。此方法具有可行性。章迎春[34]主要是对第4组的实验方法进行调整，降低中和剂浓度同时中和产物作用时间缩短，做出的6组结果均符合要求。第4章结论最小杀菌浓度的确定，确定84消毒剂、新洁尔灭、乙醇的合适稀释浓度。含0.3%卵磷脂和3%吐温-80的磷酸缓冲溶液（PBS）能有效的中止500mg/L苯扎溴铵消毒剂（新洁尔灭）和70%乙醇的残留毒性；而含0.5%硫代硫酸钠和1%吐温-80的磷酸缓冲溶液（PBS）能有效中止450mg/L的含氯消毒剂（84消毒剂）的残留毒性。悬液定量杀菌实验结果500mg/L苯扎溴铵消毒剂（新洁尔灭）和70%乙醇杀灭效果较好，在1.5min时即可对大肠杆菌杀灭率达到100%。；而450mg/L的含氯消毒剂（84消毒剂）杀灭效果最差，0.5min、1min、1.5min、2min均不能完全杀灭大肠杆菌，直至3min时才完全杀灭，总体杀菌效果比其他2种消毒剂差。该实验为阐明常用的3种消毒剂对大肠杆菌的抑菌效果，为家庭和养殖场卫生环境提供应用参考。参考文献[1]贾良梁,罗静如,AndreaLuppi.猪肠型大肠杆菌病的发病机制[J].国外畜牧学(猪与禽),2018,38(10):1~5.[2]宣长和,马春全,陈志宝.猪病学[M].北京:中国农业大学出版社,2010:348~356.[3]侯朝利.猪大肠杆菌病的防治[J].畜牧兽医科技信息,2019,(05):1.[4]王红宁,代敏,吴祥辉,张之文,李春,柳萍.仔猪腹泻的病因及综合防治进展[J].养猪,2002,(3):32~34.[5]孙广力,孙刚,李书华,魏萍,郭昭林,杨本.黑龙江省规模化养猪场大肠杆菌病血清型流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医,2004,32(7):90~92.[6]王孝友,曾秀,孔路军,范守城.仔猪黄白痢大肠杆菌的分离鉴定[J].湖北畜牧兽医，2004,23(6):27~29.[7]王红宁,刘世贵,刘书亮,黄勇,谢晶,吴琦,柳萍.规模化猪场仔猪黄、白痢的防治研究[J].中国预防兽医学报,1999,21(4):264~267.[8]韩春.猪源致病性大肠杆菌的流行调查及药敏实验[J].中国畜禽种业,2014,10(01):113~115.[9]周磊,李泽伟,孙起荣,邢刚,魏建忠,孙裴,刘雪兰,李郁.54株猪源肠外致病性大肠杆菌血清型、系统进化群和基因型[J].微生物学通报,2021,48(04):1182~1194.[10]张绍斌.农村中小型猪场防疫措施[J].兽医导刊,2021,(03):57.[11]白永勤.规模化猪场疫病控制与净化[J].吉林畜牧兽医,2021,42(01):94.[12]陈秀琴,张世忠,江斌,林琳,郑敏,林甦,黄梅清.福建省禽源大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].福建畜牧兽医,2020,42(06):11~13.[13]彭海燕.家禽大肠杆菌病的诊断和治疗[J].畜牧兽医科技信息,2020,(07):150~151.[14]史晓杰.猪大肠杆菌病的流行特点、临床症状、治疗和预防[J].现代畜牧科技,2020,(03):66~67.[15]吕玉菊.夏季猪大肠杆菌病特点及防治[J].畜牧兽医科技信息.2020,(07):104~105.[16]王剑松.饮用水中大肠杆菌标准检验方法及仪器化进展[J].计量与测试技术,2019,46(10):57~59.[17]张弟强,张娟胜,王国庆.细菌对消毒剂抗性机制的研究进展[J].中国消毒学杂志.2017,34(07):675~679.[18]刘丽娟,马光强,张胜沾,王伟,王开功,周碧君,苟万里.仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析[J].中国畜牧兽医,2018,45(10):2876~2884.[19]CHAHS,SHINDH.AntibacterialcapacityofcavitydisinfectantsagainstStreptococcusmutansandtheireffectsonshearbondstrengthofaselfetchadhesive[J].DentMaterJ,2016,35(1):147~152.[20]冯秀,王爱玲,张振仓,张为民,周宏超,张彦明,郭抗抗.过硫酸氢钾复合物最佳杀菌条件的研究[J].\动物医学进展,2017,38(8):39~42.[21]马贤坤,车娟娟.消毒灭源健康养殖[J].山东畜牧兽医,2007,(5):70~72.[22]程丽丽.猪场大肠杆菌耐药性的流行病学调查[J].浙江畜牧医,2020,45(06):27~29.[23]刘晓庆.猪细菌性腹泻的防治[J].新农业,2019,(11):74~75.[24]张强.仔猪大肠杆菌病的综合防治措施[J].畜牧兽医科技信息,2020,(12):1.[25]李燕,赵玮,石海春,张孝兰.五种消毒剂杀菌效果实验[J].家禽学,2020,(09):51~53.[26]曾春晖,杨柯,林启云,赵一.广西藤茶提取物APS体外抗菌作用研究[J].中国药物应用与监测,2006,(6):36~39.[27]韦艳,李传慰,祭仲石.4种消毒剂对气单胞菌的抑菌杀菌效果研