肠杆菌科的检验（临床微生物检验课件）

埃希菌属细菌鉴定1掌握大肠埃希菌主要的生物学性状23学习目标熟悉大肠埃希菌临床意义掌握大肠埃希菌微生物学检验

大肠埃希菌俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道正常菌群，在肠道合成VitB、VitK（营养作用）和拮抗腐败菌繁殖（拮抗作用）。在一定条件下，它为条件致病菌，在肠道中有少数大肠杆菌如致病性大肠杆菌对人类有致病作用。埃希菌属—大肠埃希菌大肠埃希菌革兰染色大肠埃希菌的电镜图周身鞭毛菌体荚膜一、生物学性状1.形态与染色

G-

短杆菌，多数有鞭毛，某些菌株尤其是引起肠道外感染的菌株有荚膜或微荚膜和周身菌毛。不形成芽胞。埃希菌属—大肠埃希菌埃希菌属—大肠埃希菌2.培养特性在液体培养基中呈均匀混浊生长。在血平板上为2~3mm、圆形、灰白色，光滑、湿润、的菌落。易乳化。某些菌株可形成β-溶血。在肠道选择性培养基上因可分解乳糖，形成有色菌落。大肠埃希菌在血平板上菌落埃希菌属—大肠埃希菌

中国兰：蓝色菌落

EMB：紫黑色菌落

MAC或SS平板：红色菌落3.生化反应本菌能发酵多种糖产酸产气。

A．大肠埃希菌C.对照AA+-

KIA斜面底层产气

H2S埃希菌属—大肠埃希菌MIU++-

3.生化反应葡乳甘IMRVPC苯丙U硝赖鸟氨对+++++----+++-埃希菌属—大肠埃希菌IMViC＋＋－－

4.抗原结构：（1）O抗原：是LPS，耐热，100℃不能灭活，目前已知有171种，是血清学分型的基础。

（2）H抗原：是不耐热的蛋白质，已知有56种，均为单相菌株。

（3）K抗原：是多糖荚膜抗原，在K抗原存在时能阻止O凝集。已知有100种，不是每个菌株均有K抗原。

大肠杆菌的血清型别按O：K：H顺序，以数字表示，如O111：K58：H2，O157：H7。埃希菌属—大肠埃希菌（一）致病物质——又称粘附素，由普通菌毛构成，能凝集红细胞和粘附粘膜上皮细胞。定植因子不耐热肠毒素（LT），通过激活腺苷酸环化酶，使cAMP浓度增高，导致腹泻。耐热性肠毒素（ST），通过激活鸟苷酸环化酶，使cGMP浓度增高，导致腹泻。K抗原——具有抗吞噬作用。肠毒素K

二、临床意义

埃希菌属—大肠埃希菌埃希菌属—大肠埃希菌（二）所致疾病1．机会感染大肠埃希菌常引起人类肠道外感染如泌尿系感染、胆囊炎、腹膜炎、手术切口感染等，菌血症及新生儿脑膜炎等。2．肠道感染大肠埃希菌是人和动物肠道正常菌丛的成员，但其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱样严重腹泻，并能引起致死性并发症如溶血性尿毒综合征（HUS）。

埃希菌属—大肠埃希菌菌名英文缩写所致疾病肠产毒型大肠埃希菌ETEC致婴儿和旅游者腹泻肠致病型大肠埃希菌EPEC主要致婴幼儿腹泻肠侵袭型大肠埃希菌EIEC主要侵犯较大儿童和成人，可致腹泻、里急后重和脓血便肠出血型大肠埃希菌EHEC可引起出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征肠集聚型大肠埃希菌EaggEC引起婴儿持续性腹泻、脱水、偶有血便引起腹泻的致病性大肠埃希菌种类及所致疾病三、微生物学检验1.肠道外感染埃希菌属—大肠埃希菌埃希菌属—大肠埃希菌

中国兰：蓝色菌落

EMB：紫黑色菌落

MAC或SS平板：红色菌落AA+-

KIA斜面底层产气

H2S埃希菌属—大肠埃希菌MIU++-

IMViC＋＋－－大肠埃希菌API10联诊断试剂盒埃希菌属—大肠埃希菌2.肠道感染埃希菌属—大肠埃希菌引起腹泻的致病性大肠埃希菌鉴定在肠道选择平板上为发酵乳糖的有色菌落（EIEC为无色菌落）KIA：多为＋＋＋－MIU：＋＋－IMViC：＋＋－－致病性大肠杆菌需作血清学鉴定或毒力测定埃希菌属—大肠埃希菌ETEC的鉴定方法LTST生物学方法家兔或小白鼠肠袢试验家兔或小白鼠肠袢试验皮肤毛细血管通透性试验乳鼠灌胃试验免疫学方法ELISAELISA固相放免分子生物学法基因探针基因探针ETEC鉴定：分离培养+生化反应+血清分型+肠毒素测定。ST和LT肠毒素的检测EPEC的鉴定血清学分型先用多价致病性大肠埃希菌诊断血清做玻片凝集试验，如凝集再EPEC诊断血清进行O：H分型以确定血清型。EPEC检测：分离培养+生化反应+血清分型。EIEC的鉴定EIEC生化试验与志贺菌相似：①发酵葡萄糖产酸不产气，②不发酵或迟分解乳糖，③多数菌株动力阴性，④赖氨酸脱羧酶阴性。

EIEC检测：分离培养+生化反应+血清分型+毒力试验。血清学试验：先用多价致病性大肠埃希菌诊断血清做玻片凝集试验，如凝集再用EIEC诊断血清进行O：H分型以确定血清型。与志贺菌抗血清有交叉反应。

毒力测定：豚鼠眼结膜试验。EIEC与志贺菌的鉴别试验生化反应鉴别试验EIEC志贺菌粘质酸盐产酸＋－醋酸盐利用＋－赖氨酸脱羧＋－EIEC的鉴定EHEC的鉴定血清学分型：先用多价致病性大肠埃希菌诊断血清做玻片凝集试验，如凝集再用EHEC诊断血清进行O：H分型以确定血清型。EHEC检测：分离培养+血清分型+生化反应。

血便患者均应常规作O157：H7的培养。山梨醇试验-的菌株均能产生毒素。（正常菌群中的大肠杆菌约在孵育≤24h山梨醇+）。大肠杆菌O157在山梨醇平板上的菌落

EAggEC检测：用液体培养-凝集试验检测细菌对细胞的粘附性或用DNA探针技术。EAggEC鉴定引起腹泻的致病性大肠埃希菌鉴定依据在肠道选择平板上为发酵乳糖的有色菌落（EIEC为无色菌落）KIA上：多为＋＋＋－；EIEC：－＋－－IMViC：＋＋－－致病性大肠埃希菌需作血清学鉴定或毒力测定致病性大肠埃希菌鉴定志贺菌属细菌鉴定1掌握志贺菌属细菌主要的生物学性状23学习目标熟悉志贺菌属细菌临床意义掌握志贺菌属细菌微生物学检验志贺菌属概述志贺菌属是主要的肠道致病菌之一，是引起人类细菌性痢疾的病原体。在伯杰手册（1984）中将志贺菌分为4个血清群：A群为痢疾志贺菌，B群为福氏志贺菌，C群为鲍氏志贺菌，D群为宋内志贺菌。一、生物学性状：形态与染色G-

短杆菌，无鞭毛，无荚膜，有

菌毛，不形成芽胞。志贺菌属细菌鉴定福氏志贺菌纯培养镜下染色形态志贺菌属细菌鉴定2.培养特性兼性厌氧，营养要求不高，因不发酵乳糖，在肠道选择性培养基上形成无色菌落（宋内志贺菌迟缓发酵）。福氏志贺菌在SS平板上及中国蓝平板上的无色菌落3.生化反应氧化酶阴性，不分解乳糖（宋内迟缓分解），分解葡萄糖产酸不产气，A群不分解甘露醇、D群β-半乳糖苷酶+、鸟氨酸脱羧酶试验阳性。

B．宋内志贺菌C.对照KA--

KIA斜面底层产气

H2S志贺菌属细菌鉴定MIU-+-

3.生化反应葡乳甘IMRVPC苯丙U硝赖鸟氨对+-+++----+-+-志贺菌属细菌鉴定IMViC＋＋－－O抗原是分类的依据，O抗原分为群特异性抗原和型特异性抗原。志贺菌分为4个血清群，44个血清型。5.抵抗力：较弱，对酸敏感。4.抗原结构只有O、K抗原，无H抗原。志贺菌属细菌鉴定（一）致病物质——普通菌毛，黏附于肠粘膜上皮细胞，引起炎症反应定植因子内毒素外毒素（Vero毒素）毒素

二、临床意义

志贺菌属细菌鉴定肠毒素性神经毒性细胞毒性（二）所致疾病细菌性痢疾急、慢性菌痢中毒性菌痢带菌者三、微生物学检验志贺菌属细菌鉴定（一）检验程序（二）检验方法1.分离培养：SS平板和中国蓝平板。志贺菌属细菌鉴定SS平板：无色菌落；中国兰：无色菌落2.鉴定：G-杆菌无芽胞、氧化酶阴性（1）初步鉴定：用KIA和MIU。将在KIA上出现KA--，MIU上出现-+/--，进一步鉴定到属和种（生化、血清学试验）。志贺菌属细菌鉴定KA--

KIA斜面底层产气

H2SMIU-+/--

（2）最终鉴定：全面生化反应和血清学试验。2.鉴定：A群：甘露醇-;D群β-半乳糖苷酶+，鸟氨酸+。志贺菌属细菌鉴定志贺菌属细菌鉴定血清学试验生理盐水对照-志贺多价血清+宋内血清+

3.鉴别试验：（1）志贺菌属与大肠埃希菌的鉴别，志贺菌属与大肠埃希菌之间的DNA相关性很高，尤其是与EIEC在生化特征上难以鉴别，在血清学上有交叉反应。下述特性有助于鉴定志贺菌种：①无动力，赖氨酸阴性；②发酵糖产酸不产气（福氏志贺菌6型、鲍氏志贺菌13和14型、痢疾志贺菌3型除外）；

③醋酸钠-、葡萄糖铵-、粘质酸盐-。志贺菌属细菌鉴定（2）与类志贺邻单胞菌鉴别：可用动力和氧化酶试验加以鉴别，志贺菌属均为阴性，而类志贺邻单胞菌为阳性。

（3）与伤寒沙门菌鉴别：伤寒沙门菌在KIA培养基上的表现与志贺菌相似，鉴别点是伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性，能与沙门菌属因子血清（OA-F、O9、Vi）凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。志贺菌属细菌鉴定（4）血清学鉴定：凡生化反应符合志贺菌属者均需作血清学鉴定，可先用志贺菌属4种多价血清作玻片凝集试验，凝集者再进一步作定型鉴定。我国现有的定群及定型诊断血清包括痢疾志贺菌1型和2型血清，福氏志贺菌(1～6型)血清，鲍特志贺菌(1～6型)和宋内志贺菌血清。

在国内各地报告的志贺菌属感染以（B群）福氏志贺菌为多见，约占总数的70％以上，其次为（D群）宋内志贺菌及A群2型。在B群中又以1b、2a及3型居多。志贺菌属细菌鉴定志贺菌属细菌鉴定依据在肠道选择平板上为不发酵乳糖的无色菌落（宋内志贺菌培养48~72小时为有色菌落，迟缓发酵乳糖）G-杆菌、无芽胞、散在排列KIA：多为－＋－－MIU：－＋/－－IMViC：＋/－

＋－－血清学试验：生理盐水对照阴性、志多血清凝集、群血清凝集志贺菌属细菌鉴定沙门菌属细菌鉴定1掌握沙门菌属细菌主要的生物学性状23学习目标熟悉沙门菌属细菌临床意义掌握沙门菌属细菌微生物学检验沙门菌属概述该菌属于1880年发现，是肠杆菌科中最复杂的菌属，种类繁多，血清型更为复杂，至今已发现沙门菌属有2400多个血清型。目前沙门菌属分为6个亚属，临床上分离的沙门菌株99%是亚群1中的菌种。沙门菌属致病性是有种属特异性，人类是伤寒沙门菌和甲、乙、丙三型副伤寒沙门菌的天然宿主，有些沙门菌专对动物致病，有些沙门菌对人和动物均可致病。沙门菌可致多种感染，轻者为自愈性胃肠炎、重者可引起致死性伤寒。一、生物学性状：

1.形态与染色G-杆菌，无荚膜，无芽胞，周身鞭毛，多数菌有菌毛。沙门菌属细菌鉴定周身鞭毛普通菌毛G-杆菌散在排列沙门菌属细菌鉴定2.培养特性兼性厌氧，营养要求不高，因不发酵乳糖，在肠道选择性培养基上形成无色半透明S型菌落菌落，与志贺菌菌落相似。伤寒沙门菌在SS和中国蓝平板上的无色菌落中国蓝平板、MAC平板、EMB平板－均为无色菌落。SS平板－无色菌落，产H2S菌株，菌落中心呈黑色。沙门菌属细菌鉴定沙门菌属细菌鉴定伤寒沙门菌在血平板、SS平板及MAC平板上18~24小时菌落鼠伤寒沙门菌在SS平板及MAC平板上18~24小时菌落3.生化反应氧化酶阴性，不分解乳糖，分解葡萄糖产酸产气（伤寒沙门菌不产气）。B．沙门菌属细菌C.对照KA+/-+/-

KIA斜面底层产气

H2S沙门菌属细菌鉴定MIU+--

3.生化反应葡乳甘IMRVPC苯丙U硝赖鸟氨对+-+-+-+--+++-沙门菌属细菌鉴定IMViC－＋－＋/－几种沙门菌的主要生化反应菌种KIAMIU甲基红伏普枸櫞酸盐苯丙氨酸赖氨酸鸟氨酸斜面底层气体H2S动力吲哚尿酶PAKA+-/++--+----+PBKA+++++--+--/+-++S.typhimuriunKA+++++--+-+-++PCKA+++++--+---++S.choleraeKA++/-+--+-+-++S.typhiKA-+/-+--+--/+-+-S.enteritidisKA+++++--+-+-++沙门菌属细菌鉴定O抗原是分群的依据，H抗原是分型依据。4.抗原结构有O、H和Vi抗原。沙门菌属细菌鉴定O抗原有58种，以阿拉伯数字顺序排列，现已排到第67种，其中有9种被删除，故数字是不连续的。每一个血清型可含有一种或数种OAg。凡含共同抗原成分的血清型归于一个群，2400多个血清型沙门菌分为A、B、C、D……42群，临床上分离菌株98%以上属于A~F群。沙门菌属细菌鉴定

O抗原：化学成分为脂多糖；耐热；与相应抗体结合出现颗粒状凝集；沙门菌分群依据。

H抗原：化学成分为蛋白质；不耐热；与相应抗体结合出现絮状凝集；沙门菌分型依据。H抗原有2相，第1相为特异性，用小写英文字母表示，第2相为非特异相，用阿拉伯数字表示。

Vi抗原：位于菌体外层；抗原性强，相应抗体可作为筛选带菌者指标；不耐热；能阻止O抗原与相应抗体结合；伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌有Vi抗原。几种沙门菌的抗原组分组（群）菌名O抗原H抗原第1相第2相A甲型副伤寒沙门菌1，2，12a-B乙型副伤寒沙门菌1，4，5，12b1，2鼠伤寒沙门菌1，4，5，12i1，2C

丙型副伤寒沙门菌6，7，Vic1，5猪霍乱沙门菌6，7c1，5D伤寒沙门菌9，12，Vid-肠炎沙门菌1，9，12g.m-E鸭沙门菌3，10e、h1、6F阿伯丁沙门菌11i1、2沙门菌属细菌鉴定（一）致病物质——普通菌毛，能黏附于小肠粘膜上皮细胞。定植因子内毒素肠毒素（某些菌株产生）K抗原——具有抗吞噬作用。毒素Vi

二、临床意义

沙门菌属细菌鉴定

（二）所致疾病沙门菌主要通过污染食品和水源经口感染，引起人类和动物的沙门菌病。1．胃肠炎（食物中毒）：此型最为常见，引起轻型或暴发型腹泻，伴有低热，恶心和呕吐。2．菌血症或败血症：以猪霍乱沙门菌感染为多，无明显的胃肠炎症状；表现为高热、寒战等。常伴有局部病灶如胆囊炎、骨髓炎等。往往出现血培养阳性而粪便培养阴性的结果。沙门菌属细菌鉴定3．肠热症：即指伤寒和副伤寒。以伤寒的发病过程为例沙门菌属细菌鉴定4．携带者：伤寒沙门菌感染过后约3％患者可成为携带者。三、微生物学检验沙门菌属细菌鉴定（一）检验程序肠热症不同标本细菌培养情况阳性检除率发病周数10090807060504030201012345678血标本粪便标本尿标本沙门菌属细菌鉴定（二）检验方法2.分离培养：血平板、MAC/EMB/中国蓝或SS平板。沙门菌属细菌鉴定血平板：灰白色菌落，无溶血；SS平板：无色菌落，产H2S中心带黑点；MAC/EMB/中国蓝：无色菌落1.增菌：胆盐葡萄糖肉汤、GN或SF：混浊生长。3.鉴定：G-杆菌无芽胞、氧化酶阴性（1）初步鉴定：用KIA和MIU。将在KIA上出现KA+/-+/-，MIU上出现+--，进一步鉴定到属和种（生化、血清学试验）。沙门菌属细菌鉴定KA+/-

+/-

KIA斜面底层产气

H2SMIU+--

（2）最终鉴定：全面生化反应和血清学试验。3.鉴定：沙门菌属细菌鉴定沙门菌属细菌鉴定血清学试验①A-F-O多价血清②单价O血清：（凝集顺序）

O：O4O3、10O7、O8O9O2O11B群E群C1、C2DAF

A～FO多价血清+O9血清+生理盐水对照-沙门菌属血清学试验及生理盐水对照沙门菌属细菌鉴定

总之：先用A-F多价O血清做凝集试验，再用O因子血清确定O群后，用H因子血清检查第一相抗原，如果是双相菌，进一步用复合因子血清检查第二相抗原。首先用A-F多价O诊断血清进行初步鉴定；再用O因子血清鉴定到群（A、B、C、D、E、F）；再用H因子第1相血清辅助鉴定型；若生化反应符合沙门菌，A-F诊断血清不凝集，应考虑是否有Vi抗原，将待检菌液加热后，再进行A-F多价O血清凝集试验。A-F多价O诊断血清凝集试验凝集O因子诊断血清凝集试验H因子诊断血清凝集试验凝集初步鉴定鉴定血清群鉴定血清型沙门菌属细菌鉴定

4.鉴别试验：（1）伤寒沙门菌与志贺菌鉴别：硫化氢和动力试验，前者均+，后者均-；伤寒沙门菌与A~FO多价血清凝集，志贺菌与志贺多价血清凝集。沙门菌属细菌鉴定（2）产H2S沙门菌与变形杆菌鉴别：脲酶和苯丙氨酸脱氨酶，前者均阴性，后者均阳性。在血平板上前者无迁徙现象，后者有。（三）免疫学诊断1．肥达试验测伤寒、副伤寒等抗体

2．带菌者筛检测Vi抗体效价≥10

沙门菌属细菌鉴定肥达反应（WidalTest）

用已知伤寒沙门菌O抗原和H抗原，以及甲、乙、丙三型副伤寒沙门菌H抗原作为诊断菌液与患者血清作定量凝集试验，测定血清中有无相应抗体极其效价，可辅助伤寒和副伤寒的诊断。肠热症病人血清抗体出现情况10090807060504030201012345678阳性检除率发病周数沙门菌属细菌鉴定（1）肥达反应结果判定：O效价≥80、H效价≥160、副伤寒H效价≥80。

（2）O与H抗体的诊断意义：

①O、H效价均升高：已感染伤寒；②O、H效价均低于正常值：未感染沙门菌免疫力低下；③O升高、H正常：某型沙门菌感染早期；④H升高、O正常：以往接种过疫苗或非特异性回忆反应。（3）双份血清的肥达反应：后一次较前一次抗体效价增高4倍以上，有诊断价值。沙门菌属细菌鉴定生理盐水＋待检血清＋诊断抗原伤寒O伤寒H甲型副伤寒H乙型副伤寒H反应6小时45℃观察结果1:401:801:1601:3201:6401:640沙门菌属细菌鉴定沙门菌属细菌鉴定H与O抗体的性质及其消长意义抗体类型体内出现情况体内出现情况O抗体IgM出现较早，维持时间短高低高低H抗体IgG出现较晚，维持时间长高低低高患肠热症可能性大一般可排除感染感染早期或其他沙门菌引起的交叉反应预防接种或非特异性回忆反应沙门菌属细菌鉴定依据在肠道选择平板上为不发酵乳糖的无色菌落（SS平板上菌落中心有黑点）KIA：多为KA＋＋MIU：＋－－IMViC：－

＋－＋/－血清学试验：生理盐水对照阴性、A-F多价O血清凝集、群血清凝集沙门菌属细菌鉴定变形杆菌属学习目标１掌握变形杆菌属细菌的生物学性状２熟悉变形杆菌属细菌的致病性３掌握变形杆菌属细菌的微生物检验变形杆菌属是一群动力+，H2S+，苯丙氨酸脱氨酶+，脲酶+的细菌。广泛存在于泥土、水和被粪便污染的物质中，能引起食物中毒和泌尿系感染等多种感染。变形杆菌属概述变形杆菌属普通变形杆菌奇异变形杆菌产黏变形杆菌潘氏变形杆菌四种一、生物学特性1．形态染色G-杆菌，高度多形性，呈球形或丝状。有周身鞭毛，运动活泼，无芽胞，无荚膜。普通变形杆菌纯培养镜下形态变形杆菌属细菌鉴定变形杆菌属细菌鉴定2.培养特性兼性厌氧，营养要求不高，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在普通平板和血平板上可呈波纹薄膜状生长，即迁徙生长。普通变形杆菌在普皿和血皿中的迁徙现象变形杆菌属细菌鉴定在肠道选择性培养基中因不发酵乳糖，形成无色透明或半透明菌落。产H2S菌株在SS平板上的菌落中心可呈黑色。普通变形杆菌在SS、MAC平板和中国蓝平板上的菌落

迁徙现象即细胞集群现象：细菌在一段时间生长中细胞长20～80um，鞭毛增多，产生粘液，由接种点向外移动，形成薄膜，继而细胞分裂，团聚，停止移动，形成环状；如此反复，在一个平板上可见到2～3个同心环，一部分菌呈扩展生长形成独立的菌落。变形杆菌属细菌鉴定迁徙现象（3）生化反应：变形杆菌属细菌鉴定MIU

KIA斜面底层产气

H2SKA+++++奇异变形杆菌在API-10联诊断试验剂盒上生化现象（3）生化反应：变形杆菌属细菌鉴定葡乳甘IMRVPC

U苯丙硝赖鸟氨对+

--++--+

++---几种变形杆菌的生化反应变形杆菌属细菌鉴定（4）抗原构造：本属细菌中的某些菌株如X19、X2、XK的O抗原与某些立克次体有共同抗原，能出现交叉凝集反应，临床上用这些变形杆菌代替立克次体与患者的血清作凝集反应，可作为立克次体病的辅助诊断试验，称为外-斐试验或外-斐反应。外斐试验（OX19）（滴度1：20~1：1280）变形杆菌属细菌鉴定二、临床意义变形杆菌属细菌鉴定奇异变形杆菌和普通变形杆菌引起人的原发性和继发性感染，是泌尿道感染的主要病原菌之一（仅次于大肠埃希菌），可由此产生菌血症，还常引起伤口、呼吸道等多种感染，由变形杆菌造成的新生儿脐带感染可导致高度致死性菌血症和脑膜炎。奇异变形杆菌亦是婴儿肠炎的病原菌之一。潘氏变形杆菌，是引起医院感染的病原菌。（二）临床意义变形杆菌属广泛存在于自然界、人和动物的肠道中，是条件致病菌和医院感染的常见菌。本属菌中由普通变形杆菌和奇异变形杆菌引起的感染最为常见，发病率仅次于大肠埃希菌，是引起医院感染的主要病原菌原发感染——食物中毒继发感染——尿路感染（仅次于大肠埃希菌）、创伤、腹膜炎、败血症等变形杆菌属细菌鉴定变形杆菌属细菌鉴定三、微生物学检验（一）检验程序（二）检验方法1.分离培养：血平板、SS平板和中国蓝平板。

血平板：灰白色菌落、迁徙现象、β-溶血；SS平板和中国兰：无色菌落变形杆菌属细菌鉴定2.鉴定：G-杆菌无芽胞、氧化酶阴性（1）初步鉴定：用KIA和MIU。将在KIA上出现KA++，MIU上出现++/-+，进一步鉴定到属和种（生化、血清学试验）。KA++

KIA斜面底层产气

H2SMIU++/-+

变形杆菌属细菌鉴定（2）最终鉴定：全面生化反应。2.鉴定：变形杆菌属细菌鉴定变形杆菌与相似菌属的鉴别试验名称变形杆菌属普罗维登斯菌属摩根菌属迁徙生长+--H2S+--明胶液化+--枸櫞酸盐V+-鸟氨酸脱羧V-+共性：不发酵乳糖、葡萄糖酸盐-，苯丙氨酸脱氨酶+。变形杆菌属细菌鉴定依据在血平板上为灰白色菌落，迁徙现象肠道选择平板上为不发酵乳糖的无色菌落，产H2SKIA：多为KA＋＋MIU：＋＋/－＋IMViC：＋/－

＋－－苯丙氨酸脱氨酶＋脲酶（4~6h)＋变形杆菌属细菌鉴定变形杆菌属种间鉴别要点试验名称普通变形杆菌奇异变形杆菌产粘变形杆菌潘氏变形杆菌靛基质+---鸟氨酸脱羧-+--麦芽糖+-++木糖++-+H2S++--/+对氯霉素敏感性SSSR肺炎克雷伯菌、变形杆菌的鉴定（一）细菌在选择性培养基和肉汤中的生长现象菌种血皿中国蓝EMB普皿肉汤肺炎克雷伯菌变形杆菌结果与讨论（二）革兰染色镜检结果菌种形态排列染色性肺炎克雷伯菌变形杆菌结果与讨论（三）细菌生化鉴定结果记录1菌名氧化酶触酶硝还O/F苯KIAMIU斜面底面产气H2SMIU肺克变形备注：A，产酸（黄）；K，产碱（红）。结果与讨论菌名葡萄糖乳糖甘露醇IMRVPC赖鸟氨对肺克变形（三）细菌生化鉴定结果记录2结果与讨论课堂讨论1.请指出血皿上肺克的菌落形态特点。2.请指出血皿上变形的生长现象。3.什么是苯丙氨酸脱氨酶试验，并指出两株试验菌的实验结果。4.请指出KIA的主要成分有哪些？5.分别指出肺克和变形的KIA结果，并解释原因。6.请指出我们试验所用的变形杆菌是属于哪一种？肠杆菌属学习目标１熟悉肠杆菌属细菌的生物学性状２熟悉肠杆菌属细菌的致病性３掌握变形杆菌属细菌的微生物检验掌握葡萄球菌属种间鉴定与鉴别试验4熟悉肠杆菌属细菌的微生物检验熟悉肠杆菌属种间鉴定与鉴别试验肠杆菌属1．生物学特性：

G-

粗杆菌，动力+，部分菌株有荚膜，无芽胞。肠杆菌属在血平板上可形成灰白色大而粘的菌落，不溶血。在肠道的选择性培养基上呈有色菌落。血平板上灰色菌落MAC平板上红色菌落中国蓝平板上蓝色菌落1．生物学特性：

KIA：AA＋－MIU：＋－＋/－

（与肺克区别）

IMViC：－

－

＋

＋（与大肠区别），鸟氨酸＋（与肺克区别）

肠杆菌属

2．临床意义：为正常菌群，一般引起泌尿系感染、呼吸道感染、伤口感染、败血症和脑膜炎等。阴沟肠杆菌API10联诊断试剂盒微生物检验

1.标本采集根据疾病不同采集不同标本，血液、尿液、痰、穿刺液等。检验程序尿、穿刺液、痰等血平板可疑菌落KIAMIU肠道选择平板菌落涂片染色鉴定血液增菌粪便其他生化反应细菌计数检验方法涂片染色镜检：待检标本直接涂片革兰染色镜检，可见革兰阴性杆菌。分离培养：标本接种血平板和肠道选择平板，经18～24小时培养，挑取发酵乳糖的有色菌落进一步鉴定。初步鉴定：根据菌落特征、KIA、MIU进行初步筛选。最终鉴定：通过系统生化反应做种间鉴定。鉴定依据革兰阴性杆菌在肠道选择性培养基上呈有色菌落KIA（AA+-）、MIU(+--/+）、IMViC（--++）、鸟氨酸(+)耶尔森菌属临床微生物检验技术网络资源共享课程医学技术系学习目标１熟悉耶尔森菌属细菌的生物学性状２熟悉耶尔森菌属细菌的致病性３掌握变形杆菌属细菌的微生物检验掌握葡萄球菌属种间鉴定与鉴别试验4熟悉耶尔森菌属细菌的微生物检验熟悉耶尔森菌属种间鉴定与鉴别试验耶尔森菌属

鼠疫耶尔森菌属肠杆菌科耶尔森菌属，俗称鼠疫杆菌，是我国法定甲类传染病鼠疫的病原体。历史：三次世界性大流行目前：仍有散在及爆发（死亡率10~30%）监控：是我国重点监控的自然疫源性传染病（一）生物学性状形态染色：G—球杆菌，两极浓染，有荚膜，无鞭毛，无芽胞，慢性病灶，陈旧培养物，高盐培养基上呈多形性。抗原构造：复杂F1抗原——荚膜抗原V/W抗原——毒力抗原外膜蛋白——突破防御、增强致病性鼠毒素（外毒素）——对鼠类有剧烈毒性内毒素——发热、休克、DIC等抵抗力：对理化因素抵抗力弱，但在自然环境中存活时间长鼠疫耶尔森菌（二）致病性与免疫性致病物质F1、V/W、外膜抗原、鼠毒素、内毒素等，实质器官出血性炎症、组织坏死及全身中毒症状。该菌毒力强，少量细菌即可致病所致疾病烈性传染病——鼠疫（黑死病）流行环节传播媒介:鼠蚤传播途径:叮咬伤口、呼吸道临床类型腺鼠疫肺鼠疫败血症鼠疫鼠疫耶尔森菌（三）微生物学检验及防治专用实验室检测警惕生物武器检测动物鼠疫动态灭鼠灭蚤接种疫苗抗菌素治疗一旦疑为本菌，应立即向本地区疾病控制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专业实验室作进一步鉴定。诊断确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有关人员须采取有效的预防隔离措施，防止疫情扩散。鼠疫耶尔森菌（一）生物学特征：G-杆菌，无芽胞、无荚膜。

小肠结肠炎耶尔森菌（一）生物学特征：1．嗜冷性4～40℃，动力、VP在20～28℃，++；37℃--。动力试验25℃37℃VP在25℃+小肠结肠炎耶尔森菌2．MAC：不发酵乳糖，无色、半透明、扁平、较小的菌落。SS平板生长差。尿素48小时阳性3．KIA：KA--

MIU：25℃+-/++

赖氨酸-37℃--/++

鸟氨酸+小肠结肠炎耶尔森菌4．抗原构造与分型：感染人有O3、O5、O8、O9欧洲、非洲、日本：O3、O9中国：O3美国：O8（二）临床意义：可产生毒素，引起小肠结肠炎。小肠结肠炎耶尔森菌鼠疫耶氏菌与小肠结肠炎耶氏菌鉴别甲基红（+），甘露醇（+），苯丙氨酸（-），丙二酸盐（-），H2S（-），37℃培养动力（-）。鼠疫耶氏菌液体培养基中钟乳石样。小肠结肠炎耶氏菌25℃动力（+），嗜冷性，4℃生长，25℃VP（+），37°C（-）。均不发酵乳糖。小肠结肠炎耶氏菌4～40℃均能生长，20～

28℃才能表现其特征。临床微生物检验技术网络资源共享课程其他肠杆菌科细菌微生物鉴定技术医学技术系学习目标１了解其他肠杆菌科细菌的生物学性状２了解其他肠杆菌科细菌的致病性３掌握变形杆菌属细菌的微生物检验掌握葡萄球菌属种间鉴定与鉴别试验4了解其他肠杆菌科细菌的微生物检验了解其他肠杆菌科种间鉴定与鉴别试验

1．生物学特性：G-小杆菌，动力+，有些菌种有荚膜，无芽胞。部分菌株可产生色素（红色）：灵红色素为脂溶性，吡羧酸为水溶性。

沙雷菌属该属有10种，与临床有关的是粘质沙雷菌与液化沙雷菌。

1．生物学特性：KIA：K/AA＋/－

－

MIU：＋－－赖＋鸟＋沙雷菌属粘质沙雷菌液化沙雷菌阿拉伯糖－＋棉子糖－＋／－木糖－＋粘质沙雷菌API10联诊断试剂盒2．临床意义：粘质沙雷菌是致病菌，可引起泌尿系及呼吸道感染。液化沙雷菌是人的条件致病菌，主要引起呼吸道感染。沙雷菌属1．生物学性状：G-杆菌，动力+，无芽胞、无荚膜。枸橼酸杆菌属枸橼酸杆菌镜下为G-直杆菌1．生物学性状：在血平板上为灰白色湿润的不溶血的菌落。在肠道选择性培养上为乳糖发酵的菌落，较混浊。弗劳地枸橼酸杆菌在SS或HE平板上可形成中心为黑点的菌落。

枸橼酸杆菌属血平板上的菌落1．生物学性状：氧化酶－，触酶＋KIA：A/KA＋＋MIU：＋－－枸橼酸杆菌属弗劳地氏枸橼酸杆菌API10联诊断试剂盒

2．临床意义：为条件致病菌，与腹泻和某些肠道外感染有关。弗劳地枸橼酸杆菌引起胃肠道感染，亦可致败血症及许多组织感染；异型枸橼酸杆菌引起新生儿脑膜炎和败血症；无丙二酸盐枸橼酸杆菌可引起腹泻。枸橼酸杆菌属普罗威登斯菌属及摩根菌属

这是一群同变形杆菌一样，形态呈多形性、有鞭毛，不发酵乳糖，脲酶+、苯丙氨酸脱氨酶+的细菌（肠杆菌科唯一），属肠道的正常菌群，在周围环境中广泛存在，并在一定条件下引起各种感染，是引起医源性感染的重要条件致病菌。普罗威登斯菌属包括产碱普罗威登斯菌、斯氏普罗威登斯菌和雷氏普罗威登斯菌，均为G-杆菌普罗威登斯菌属普罗威登斯菌属普罗威登斯菌属API10联诊断试剂盒普罗威登斯菌属与变形杆菌属一样，有碱化尿液的作用，有可能促使尿结晶形成，与泌尿系结石有关。雷极普罗威登斯菌和斯图普罗威登斯菌可引起尿道感染和其他肠道外感染（菌血症等），并引起许多医院感染暴发流行。普罗威登斯菌属普罗威登斯菌属3.检验方法涂片染色镜检：待检标本直接涂片革兰染色镜检，可见革兰阴性杆菌，菌体边缘有明显荚膜。分离培养：标本接种血平板和肠道选择平板，经18～24小时培养，挑取不发酵乳糖的无色菌落进一步鉴定。初步鉴定：根据菌落特征、KIA、MIU、苯丙氨酸脱氨酶进行初步筛选。最终鉴定：通过系统生化反应做种间鉴定。摩根菌属：仅有摩根菌，G-杆菌，鸟氨酸+摩根菌属是医源性感染的重要病原菌之一。它可致泌尿道感染，并与腹泻有关。摩根菌属摩根菌在血平板上的菌落摩根菌属苯丙氨酸脱胺酶阳性的菌属鉴别肠杆菌科概述1、形态与染色

G—

中小杆菌，无芽胞，多数有周鞭毛（志贺菌无鞭毛）；致病菌都有菌毛。肠杆菌科的共同特性※乳糖发酵试验2、活泼的生化反应※初步鉴别肠道致病菌和非致病菌肠道致病菌肠道非致病菌不发酵乳糖发酵乳糖活跃，常用于鉴别肠道杆菌。发酵葡萄糖产酸或产酸产气，氧化酶（-），触酶（+），硝酸盐还原（+）,O/F试验为发酵型。3.培养特性需氧或兼性厌氧营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似，形成灰白色中等大小,S型菌落，液体培养基中浑浊生长，常用肠道选择培养基培养肠杆菌科的共同特性选择性平板的特点均含有乳糖和酸碱指示剂：细菌分解乳糖产酸，使培养基pH降低，指示剂呈酸性变色；指示剂不同，菌落呈现不同的颜色。

分解乳糖的细菌呈有色菌落，不分解乳糖的细菌为无色菌落。含有不同的抑制剂：对G+菌和非致病菌有不同程度的抑制作用，因此可以选择性的培养肠道致病菌。常用培养基选择性培养基：SS平板：含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿、硫代硫酸钠等Mac平板：含乳糖、中性红指示剂、胆盐等中国蓝平板：含乳糖、中国蓝和玫瑰红酸指示剂EMB平板：含乳糖、伊红和美蓝指示剂共同特征培养特性肠道杆菌选择性培养基：

SS培养基：强选择性

MAC（麦康凯）

EMB（伊红美