植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南澳洲坚果编制说明

《植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南澳洲坚果》编制说明

一、工作简况（一）任务来源品种权是国家植物新品种保护审批机关依照法律、法规的规定，授予完成新品种选育的单位或者个人生产、销售、使用该品种繁殖材料的专有权利，它是知识产权的重要组成部分。对申请保护品种进行特异性（Distinctness）、一致性（Uniformity）和稳定性（Stability）测试（简称DUS测试），是指由国家植物新品种保护审批机关委托指定的审查测试机构，运用相应植物审查测试技术与标准，将被审查测试品种与标准品种、近似品种一起栽培或室内分析，通过在试验中观察和测量其特征特性，进行数据分析处理，最终得出评价结论的过程。因此审查测试技术标准的制定和标准品种的选择是测试工作的基础。澳洲坚果（Macadamiaspp.），原产澳大利亚，为山龙眼科（Proteaceae），澳洲坚果属（Macadamia）常绿乔木果树，是世界公认的名贵食用干果和木本油料作物。澳洲坚果属有18个种，其中可食用的已被商业性栽培的只有两个种，即光壳种、粗壳种以及其杂交种，其他种因果仁小、味苦，内含氰醇甙而不能食用。随着澳洲坚果国际市场畅销经济效益持续高涨，刺激了全球适宜种植地大面积发展澳洲坚果产业。我国澳洲坚果产业发展迅速，是全球种植面积增长最快的国家之一，产区主要在云南、广西、广东、贵州。据统计，2022年我国澳洲坚果种植面积504.6万亩，居世界第一，在我国热区脱贫攻坚和乡村振兴中发挥了重要作用。澳洲坚果种质资源是当今及今后市场竞争的重点，各主要生产国都在对自己的资源进行积极的保护。我国已是澳洲坚果世界第一生产大国，创制出了许多的优良种质，急需加强新品种权保护。国际植物新品种保护联盟（简称UPOV）于1987年颁布了澳洲坚果DUS测试指南（TG/111/3），2019年颁布了新版指南（TG/111/4），澳大利亚选育的A4、A16等系列品种已申请了新品种权保护。随着我国澳洲坚果育种事业的发展，外来种质与国内环境互作后的实生变异、芽变以及我国自主杂交种质的积累，使得我国现有种质与国外种质存在较大差异。UPOV发布的指南不能充分反应我国目前澳洲坚果种质资源的特点，亦不能满足我国澳洲坚果产业育种目标。目前我国尚未发布澳洲坚果DUS测试标准，因此，急需研制符合我国国情和国际惯例的、科学的、完整的、客观的、公正的澳洲坚果测试技术标准，以便为审批机关和测试机构提供澳洲坚果新品种测试和授权技术依，对于充分调动澳洲坚果育种人积极性，促进育种水平提高，促进澳洲坚果产业绿色高质量发展具有重要意义。本标准任务根据《2024年中国热带作物学会团体标准征集通知》（中热学字〔2024〕4号），经牵头单位申请，由中国热带作物学会评审后于2024年度下达，下达文件为中热学字〔2024〕58号。（二）起草单位中国热带农业科学院南亚热带作物研究所（以下简称“中国热科院南亚所”）为项目承担单位，广西南亚热带农业科学研究所（以下简称“广西南亚所”）、贵州省亚热带作物研究所（以下简称“贵州热作所”）、云南省热带作物科学研究所（以下简称“云南热作所”）为项目参加单位。其主要成员及任务分工见表1。表1项目主要参加单位及人员分工序号姓名工作单位职称分工（三）主要工作过程1.起草阶段2024年8月，中国热带作物学会下达团体标准制修订计划项目，由中国热带农业科学院南亚热带作物研究所负责制定团体标准《植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南澳洲坚果》。中国热带农业科学院南亚热带作物研究所成立《植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南澳洲坚果》团体标准起草小组，并进行了明确的分工。对前期查阅的相关文献、国内相关标准和已采集数据进行整理。标准起草小组召开标准起草研讨会，对前期收集的资料进行筛选，完成了《植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南澳洲坚果》标准草案起草。结合我国资源和育种现状，共制定调查性状47个，其中外观形态性状36个，测量性状11个。中国热带农业科学院南亚热带作物研究所共整理了72份资源为供试材料。2021年至2024年，在广东湛江国家热带果树种质资源圃澳洲坚果分圃试验基地按拟定的性状表进行观测鉴定和评价分析；在前期数据处理分析的基础上，精选出候选材料48份，继续进行观测鉴定，筛选相关标准品种。在比较多年的调查结果及品种内部一致性的情况，即根据稳定、一致原则，初步筛选标准品种，最终筛选出标准品种24份。48份种质资源清单见表2。表2供试材料清单代号种质名称种质类型1‘A4’M.integrifolia×M.tetraphyllaHybrids2‘A16’M.integrifolia×M.tetraphyllaHybrids3A38M.integrifolia4A203M.integrifolia5B3/74M.integrifolia6DADM.integrifolia7HAES246M.integrifolia8HAES294M.integrifolia9HAES333M.integrifolia10HAES344M.integrifolia11HAES508M.integrifolia12HAES660M.integrifolia13HAES695M.integrifolia×M.tetraphyllaHybrids14HAES741M.integrifolia15HAES780M.integrifolia16HAES783M.integrifolia17HAES788M.integrifolia18HAES800M.integrifolia19HAES812M.integrifolia20HAES814M.integrifolia21HAES819M.integrifolia22HAES826M.integrifolia23HAES842M.integrifolia24HAES847M.integrifolia25HAES849M.integrifolia26HAES854M.integrifolia27HAES861M.integrifolia28HAES900M.integrifolia×M.tetraphyllaHybrids29H2M.integrifolia30OCM.integrifolia31OwnventureM.integrifolia32WinksM.integrifolia33NG18M.integrifolia34YonikM.integrifolia35南亚1号M.integrifolia36南亚2号M.integrifolia37南亚3号M.integrifolia38南亚12号M.integrifolia39南亚116号M.integrifolia40桂热1号M.integrifolia41SSCRI-粗1M.tetraphylla42SSCRI-粗5M.tetraphylla43SSCRI-60M.integrifolia44昌宁1号M.integrifolia45盈357M.integrifolia46盈6M.integrifolia47盈8M.integrifolia48特殊种M.integrifolia根据GB/T19557.1-2004的原则和要求，2024年9月份完成了指南征求意见稿的编制，指南包含42个性状，其中有36个基本性状和6个选测性状。标准起草小组再次组织研讨，对标准的讨论稿进一步修改和完善，形成了本标准的征求意见稿。2.征求意见阶段标准起草小组计划于2024年11月定向征集11位专家的意见。专家来自华南农业大学、西南林业大学、广西大学、中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、中国林业科学研究院高原林业研究所、广西农业科学院、贵州省农业科学院、临沧市林业科学院、云南省林木种苗工作总站、普洱果尚农业科技有限公司等单位。同时将在中国热作学会网站和全国标准信息服务平台等公开征求意见，公开征求意见时间不少于30天。二、标准编制原则和确定标准主要内容的依据（一）编制原则标准的编写格式按GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规划进行起草。（二）主要内容以及确定依据1、主要参考资料GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则GB/T5512粮油检验粮食中粗脂肪含量测定NY/T454澳洲坚果种苗UPOVTG/111/4“GuidelinesfortheconductoftestsforDistinctness,UniformityandStabilityMACADAMIA”（特异性、一致性和稳定性测试指南澳洲坚果）UPOVTG/1“GENERALINTRODUCTIONTOTHEEXAMINATIONOFDISTINCTNESS,UNIFORMITYANDSTABILITYANDTHEDEVELOPMENTOFHARMONIZEDDESCRIPTIONSOFNEWVARIETIESOFPLANTS”（植物新品种特异性、一致性和稳定性审查及性状统一描述总则）UPOVTGP/7“DEVELOPMENTOFTESTGUIDELINES”（测试指南的研制）UPOVTGP/8“TRIALDESIGNANDTECHNIQUESUSEDINTHEEXAMINATIONOFDISTINCTNESS,UNIFORMITYANDSTABILITY”（DUS审查中应用的试验设计和技术方法）UPOVTGP/9“EXAMININGDISTINCTNESS”（特异性审查）UPOVTGP/10“EXAMININGUNIFORMITY”（一致性审查）UPOVTGP/11“EXAMININGSTABILITY”（稳定性审查）2、根据GB/T19557.1-2004的原则和要求，指南包含42个性状，其中有36个基本性状和6个选测性状。指南具体内容包括：范围、规范性引用文件、术语和定义、符号、繁殖材料需满足的条件、测试方法、特异性、一致性和稳定性结果的判定、性状表、分组性状、技术问卷等，见表3。表3澳洲坚果标准征求意见稿内容标准征求意见稿1.范围本文件规定了澳洲坚果属（Macadamia）光壳种（MacadamiaintegrifoliaMaidenetBetche）、粗壳种（MacadamiatetraphyllaL.A.S.Johnson）及其杂交种（M.integrifoliaxM.tetraphylla）特异性、一致性和稳定性测试的技术要求和结果判定的一般原则。本文件适用于澳洲坚果品种特异性、一致性和稳定性测试和结果判定。2.规范性引用文件GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则GB/T5512粮油检验粮食中粗脂肪含量测定NY/T454澳洲坚果种苗NY/T693澳洲坚果果仁3.术语和定义GB/T19557.1界定的术语和定义适用于本文件。群体测量groupmeasurement对一批植株或植株的某器官或部位进行测量，获得一个群体记录。个体测量singlemeasurement对一批植株或植株的某器官或部位进行逐个测量，获得一组个体记录。群体目测groupvisualobservation对一批植株或植株的某器官或部位进行目测，获得一个群体记录。4.符号下列符号适用于本标准：MG：群体测量。MS：个体测量。VG：群体目测。QL：质量性状。QN：数量性状。PQ：假质量性状。*：国际植物新品种保护联盟（UPOV）用于统一品种描述所需要的重要性状，除非受环境条件限制性状的表达状态无法测试，所有UPOV成员都应使用这些性状。(a)～(e)：标注内容在B.2中进行了详细解释。(+)：标注内容在B.3中进行了详细解释。5.繁殖材料需求满足的条件繁殖材料以嫁接苗或扦插苗形式提供。提交的种苗数量不少于10株。提交的繁殖材料外观健康，无病虫侵害。繁殖材料应符合NY/T454规定的一级苗的要求。提交的种苗一般不进行任何影响品种性状正常表达的处理。如果已处理，应提供处理的详细说明。提交的种苗应符合中国植物检疫的有关规定。6.测试方法测试周期：测试周期至少为2个独立的生长周期。澳洲坚果完整生长周期是指从果实采收后的枝梢生长、开花至果实成熟的全过程。测试地点：测试通常在同一个地点进行。如果某些性状在该地点不能充分表达，可在其他符合条件的地点对其进行观测。田间管理：申请品种和近似品种相邻种植。每个小区≥5株，株距3～5m，行距4～6m。按当地大田生产管理方式进行。性状观测：性状观测应按照表A.1和表A.2列出的生育阶段进行。附录B.1对这些生育阶段进行了解释。性状观测应按照表A.1和表A.2规定的观测方法（VG、MS、MG）进行。部分性状观测方法见附录B.3。除非另有说明，个体观测性状（MS）植株取样数量不少于5个，在观测植株的器官或部位时，每个植株取样数量应为2个。群体观测性状（VG、MG）应观测整个小区或规定大小的混合样本。必要时，可选用本文件未列出的性状进行附加测试。7.特异性、一致性和稳定性结果的判定特异性（可区别性）、一致性和稳定性的判定按照GB/T19557.1确定的原则进行。待测品种应明显区别于所有已知品种。在测试中，当待测品种至少在一个性状上与最为近似的品种具有明显且可重现的差异时，即可判定待测品种具备特异性（可区别性）。采用1%的群体标准和至少95%的接受概率。当样本大小为5株时，不允许有异型株。如果一个品种具备一致性，则可认为该品种具备稳定性。一般不对稳定性进行测试。必要时，可以种植该品种的另一批繁殖材料，与以前提供的繁殖材料相比，若性状表达无明显变化，则判定该品种具备稳定性。8.性状表根据测试需要，将性状分为基本性状、选测性状，基本性状是测试中必须使用的性状，选测性状是测试中可以选择使用的性状。表A.1列出了澳洲坚果基本性状，表A.2列出了澳洲坚果选测性状。性状表列出了性状名称、表达类型、表达状态及相应的代码和标准品种、观测时期和方法等内容。根据性状表达方式，性状分为质量性状、假质量性状和数量性状3种类型。每个性状划分为一系列表达状态，以便于定义性状和规范描述；每个表达状态赋予一个相应的数字代码，以便于数据记录、处理和品种描述的建立与交流。性状表中列出了部分性状有关表达状态可参考的标准品种，以助于确定相关性状的不同表达状态和校正年份、环境因素引起的差异。附录B对性状表中的观测时期、部分性状观测方法进行了补充解释。9.分组性状本文件中，品种分组性状如下：a)枝条：每轮叶片数量（A.1性状5）。b)叶：叶柄（A.1性状8）。c)叶：叶缘刺（A.1性状16）。d)花序：颜色（A.1性状21）。e)果壳：表面质地（A.1性状32）。10.技术问卷申请人需按附录C填写澳洲坚果品种特异性、一致性和稳定性测试技术问卷。三、主要试验或验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果（一）主要试验或验证的分析、综述报告标准起草小组参考UPOVTG/111/4测试指南、2008年中国农业出版社出版的《澳洲坚果种质资源描述规范和数据标准》、澳洲坚果种质资源鉴定技术规范（NY/T1687-2009），结合我国澳洲坚果资源与育种现状，选择候选性状42个，包括33个UPOV指南性状及新增9个性状（图1、图2），提出本标准的征求意见稿。图1性状分布情况图2性状构成情况（1）观测性状筛选通过对48份澳洲坚果材料的田间调查，运用统计学方法将观测性状进行数据分析和验证（表4），确定了本标准的42个性状及相应的观测时期、性状描述、分级和代码。观测时期为性状表达最充分时期或时间段；性状描述符合国家标准编写要求，符合我国澳洲坚果产学研规范用语；分级与代码的确定充分考虑品种间的差异、观测准确度以及未来育种品种的变化，本标准性状分级已经囊括参试品种的不同表达状态，且易于掌握确定品种性状的表达状态。结合当前育种目标及育种家建议，对文字、概念、性状、标准品种、图版等进行了完善、充实。表4观测性状代号性状性状来源代号性状性状来源Chr1*植株：树姿1Chr22果皮：膨大期颜色变化新增Chr2*植株：主枝分枝角度3Chr23果皮：膨大期颜色新增Chr3植株：叶密度4Chr24果皮：表面被毛新增Chr4*茎干：表面纹理5Chr25果皮：果颈22Chr5枝条：每轮叶片数量6Chr26果皮：果顶23Chr6枝条：成花枝龄新增Chr27果皮：厚度24Chr7嫩叶：颜色7Chr28种子：大小25Chr8叶：叶柄8Chr29*种子：形状26Chr9叶柄：长度9Chr30种子：萌发孔31Chr10叶：长度10Chr31种子：种脐新增Chr11叶：宽度11Chr32果壳：表面质地27Chr12*叶：形状12Chr33果壳：表面斑纹新增Chr13叶：先端形态13Chr34果壳：腹缝线29Chr14*叶：叶缘波幅14Chr35果壳：厚度28Chr15叶：叶缘切口深度15Chr36果仁：大小30Chr16*叶：叶缘刺16Chr37*植株：株高2Chr17叶：侧脉显著程度17Chr38果仁：纵径32Chr18叶：绿色浓度18Chr39果仁：横径33Chr19花序：长度19Chr40果仁：出仁率新增Chr20花序：密度20Chr41果仁：一级果仁率新增Chr21*花序：颜色21Chr42果仁：含油率新增（2）数量性状分级：采用SPSSStatistics22.0软件进行数据统计分析，计算各数量性状的最小值、最大值、平均值、中值、标准差、变异系数（表5）。以测量数据的平均值为中心，按照2倍标准差的级差向两侧进行分级，并将结果根据实际情况进行微调，得到澳洲坚果DUS主要数量性状分级标准（表6）。表511个数量性状的数据性状characteristic最小值Min最大值Max平均值Mean中值Middle标准差SD变异系数CV（%）级差Range叶柄：长度/mm1.7318.4511.1611.223.6332.537.26叶：长度/cm11.1822.7416.8716.942.3914.174.78叶：宽度/cm2.406.854.484.460.8218.301.64花序：长度/cm11.6526.2718.5617.524.1922.588.38果皮：厚度/mm2.434.953.383.360.5817.161.16果皮：厚度/mm1.563.102.312.290.3615.580.72果仁：纵径/mm11.5918.0715.1215.171.449.522.88果仁：横径/mm13.0422.5019.2219.471.9610.203.92果仁：出仁率/%27.6341.7534.4233.773.229.366.44果仁：一级果仁率/%60.9099.6990.5693.749.1810.149.18果仁：含油率/%71.8381.6175.9376.071.932.543.86表611个数量性状的分级性状characteristic分级Grade(cm)123456789叶柄：长度≤7.527.53-14.79≥14.80叶：长度≤9.699.70-14.4714.48-19.2519.26-24.03≥24.04叶：宽度≤2.002.01-3.653.66-5.305.31-6.95≥6.96花序：长度≤5.975.98-14.3614.37-22.7522.76-31.14≥31.15果皮：厚度≤1.631.64-2.792.80-3.953.96-5.11≥5.12果壳：厚度≤1.231.24-1.951.96-2.672.68-3.39≥3.40果仁：纵径≤10.7910.80-13.6713.68-16.5516.56-19.43≥19.44果仁：横径≤13.3313.34-17.2517.26-21.1821.19-25.10≥25.11果仁：出仁率≤24.7624.77-31.2031.21-37.6437.65-44.08≥44.09果仁：一级果仁率≤67.6167.62-76.7976.80-85.9785.98-95.15≥95.16果仁：含油率≤70.1370.14-73.9974.00-77.8577.86-81.71≥81.72通过对48份品种资源性状的观测与分析，在UPOV文件基础上新增9个性状，性状在品种间差异显著，易于区分品种。这9个性状覆盖了植株、果实与种子的性状。（二）技术经济论证、预期的经济效果本标准发布实施后，可以规范对澳洲坚