实训中药制剂的含量测定UVVis法讲解

实训中药制剂的含量测定——UV-Vis法【实训目标】1.熟练掌握排石颗粒中总黄酮含量的测定方法；2.学会紫外-可见分光光度计的使用与保养方法。【仪器、材料与试剂】1.仪器紫外-可见分光光度计；分析天平；恒温干燥箱；超声处理仪；量瓶（100ml、50ml、10ml）；容量瓶（10ml）；具塞锥形瓶等。【仪器、材料与试剂】2.材料排石颗粒（市售品）；芦丁（对照品）3.试剂乙醇；5%亚硝酸钠溶液；50%甲醇；10%硝酸铝溶液；1%氢氧化钠溶液等。【实训原理】紫外-可见分光光度法是通过测定被测物质在紫外-可见光区(190～800nm)对光的吸光度或发光强度，进行物质定性定量分析的方法，主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。【实训原理】排石颗粒系由连钱草、车前子（盐炒）、木通、徐长卿、石韦、瞿麦、忍冬藤、滑石、苘麻子、甘草制成的颗粒剂。本实训利用排石颗粒中含有的黄酮类成分在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物（λmax＝510nm），用可见分光光度法（比色法）测定排石颗粒中总黄酮的含量。【实训内容与步骤】1.对照品溶液的制备取无水芦丁对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁0.2mg）。【实训内容与步骤】2.标准曲线的制备

精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50%甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法（通则0401），在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程和相关系数。【实训内容与步骤】3.供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品，研细，取约5g或约1g（无蔗糖），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，密塞，称定重量，加热回流提取20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。【实训内容与步骤】3.供试品溶液的制备

精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为空白对照。另精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50%甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。4.测定分别取供试品溶液和空白溶液，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》通则0401）测定吸光度并记录5.含量计算由回归方程A=a+b*C→C供(mg/ml)=(A供-a)/b，将测得的A供代入公式计算出供试品溶液中总黄酮的浓度C供总黄酮含量计算公式：

【实训提示】由于中药制剂成分复杂，不同组分的紫外吸收光谱彼此重叠，干扰测定，因此在测定前必须经过适当的提取、净化或采用专属的显色反应等步骤，排除干扰。【实训报告】记录测定结果，并将其与药品标准相比较