《兽医免疫学》实验课件：实验一-凝集反应

实验一凝集试验一、玻片凝集试验二、试管凝集试验一、玻片凝集试验原理：颗粒性抗原（如细菌、立克次氏体、螺旋体、红细胞或细胞悬液）或表面覆盖抗原或抗体的颗粒状物质，与相应抗体或抗原结合后，在有电解质存在时，抗原（颗粒）互相凝集成肉眼可见的凝集小块，称为凝集反应。可对待检抗原或

抗体进行定性测定。目的：掌握玻片凝集试验操作方法及结果判定方法。实验材料，以鸡白痢平板凝集试验为例：

鸡白痢多价抗原；

鸡白痢阴、阳性血清；

玻片、滴管及塑料吸头等；被检鸡或血清一、玻片凝集试验（2）抗原在临用前，须摇匀，用滴管吸取抗原一滴（约0.05mL），垂直滴于波片上，然后等体积加入被检血清，随即用塑料吸头搅拌均匀，并使散开至直径2厘米左右。同时设阳性和阴性对照。注：一定要散开，否则凝集现象不明显。方法及结果判定：（1）试验应在20℃以上室温中进行。一、玻片凝集试验

混合后2分钟以内发生凝集者判为阳性反应；

2分钟以内不出现凝集；或者出现均匀一致的极微小颗粒；或在边缘处由于临干前出现絮状者判为阴性反应；其它情况可判为可疑反应。（3）结果判定：一、玻片凝集试验试验组阳性对照阴性对照示例一、玻片凝集试验二、试管凝集试验原理：与玻片凝集试验相同目的：

(1)学会倍比稀释法；

(2)掌握试管凝集操作方法及结果判定方法。布氏杆菌试管凝集抗原布氏杆菌阳性血清、阴性血清、被检血清无菌0.5%石碳酸生理盐水试管架、小试管、灭菌吸管等实验材料（以布氏杆菌为例）：二、试管凝集试验取试管７只，将待检血清稀释成4个稀释度，并设对照。加入抗原，充分震荡混合，置37℃，4-10小时，再置室温18-24小时操作方法（注意加入抗原后的血清稀释度加倍了。）二、试管凝集试验弃0.5mL明天５点３０分看结果记录结果：（1）根据反应的有无及其强度进行判断，以-、+、++、+++、++++记录结果。（2）以呈现50％凝集（++）现象的血清的最高稀释倍数，即为受检血清的凝集价。二、试管凝集试验-：细菌不被凝集，液体浑浊，管底无伞状沉淀，但由于菌体自然下沉，管底中央出现圆点状沉淀，震荡时复呈均匀浑浊沉淀；+：液体透明度不明显，25%菌体凝集，管底有少许不明显的伞状沉淀；二、试管凝集试验+++：液体几乎透明，75%菌体凝集，管底出现大片的伞状沉淀，震荡时呈小或大絮片状；++：液体中等浑浊，50%菌体凝集，管底有中等量的伞状沉淀，震荡时呈小絮片状；二、试管凝集试验++++：液体完全透明，100%菌体凝集，管底出现大片的伞状沉淀，震荡时呈大絮片状，但可打碎成小絮片状。二、试管凝集试验细菌不被凝集，管底中央出现圆点状沉淀25%菌体凝集，管底有少许不明显的伞状沉淀50%菌体凝集，管底有中等量的伞状沉淀75%菌体凝集，管底有明显的伞状沉淀100%菌体凝集，管底出现大片的伞状沉淀二、试管凝集试验（1）牛、马和骆驼的血清在1∶100稀释达++或以上时，判为阳性反应；1∶50稀释呈++时判为疑似反应。（2）绵羊、山羊和猪的血清在1∶50稀释达++或以上时，判为阳性反应；1∶25稀释呈++时判为疑似反应。

结果判定：二、试管凝集试验在判定结果时，应考虑当