项目5谷氨酸发酵代谢曲线测定

制药微生物发酵技术----课件项目1项目2项目3项目4项目5制药微生物发酵技术1-3谷氨酸发酵工艺过程控制

制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

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噬菌体的分离检查

告知：

制药微生物发酵技术①掌握灭菌与空气的净化知识。②掌握发酵工艺过程控制知识。③掌握发酵生产染菌及其防治知识。④掌握发酵罐及其相关设备操作维护知识1.了解种子培养基与发酵培养基的区别。2.了解发酵工业的生产流程。3.掌握5L发酵罐的操作及谷氨酸发酵的条件控制。4.掌握分光光度计法测定菌浓及残糖、谷氨酸产量测定。5.掌握分批发酵过程中菌体代谢曲线的绘制和菌体生长四期的特点。引入（任务项目）

？制药微生物发酵技术谷氨酸的产量发酵分析是通过？曲线操练

制药微生物发酵技术提出生长曲线概念→提出代谢曲线的概念→曲线的绘制制药微生物发酵技术训练项目11谷氨酸发酵的代谢曲线测定

由于发酵的目的不同，发酵培养基与种子培养基有所不同。发酵工业的生产流程一般是：保藏斜面→活化斜面→摇瓶种子→种子罐→发酵罐，小型实验可以略去种子罐一步。发酵罐的条件控制优于摇瓶，产物产量更高。一、项目指导制药微生物发酵技术训练项目11谷氨酸发酵的代谢曲线测定

通用式发酵罐训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

通用式发酵罐训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

小型发酵罐训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

5L发酵罐训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

发酵生产过程中要随时观察菌体生长情况。从培养液外观变化和镜检两方面着手，及时发现并处理染菌事故；定时取样检测相应的参数，尤其是菌浓、残糖及产物产量，反馈调节发酵罐控制条件，如搅拌转数、碱液、消泡剂流加速度等。训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

5L罐延迟期（4h）

5L罐对数期（32h）

5L罐稳定期（48h）5L罐衰亡期（68h）

摇瓶衰亡期（72h）

分批发酵条件下，黄色短杆菌TK0303的菌体形态变化

训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

菌浓的测定方法有分光光度计法和干重法，生产中一般采用前者。残糖及谷氨酸产量一般采用SBA-40C多功能葡萄糖-谷氨酸分析仪测定。亦可用葡萄糖试剂盒测定残糖，纸层析法测定谷氨酸产量。训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

1.菌种黄色短杆菌2.器材恒温摇床、培养箱、5L发酵罐、SBA-40C多功能葡萄糖-谷氨酸分析仪、分光光度计、250mL三角瓶、吸管（10mL、1mL）、洗瓶、吸水纸、接种环、显微镜、载玻片、盖玻片3.培养基和试剂5mol/LNaOH溶液、泡敌、保藏培养基、活化培养基、种子培养基、发酵培养基一、材料和器材训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

1.菌种活化取保藏斜面菌种划线接种于活化斜面，32℃培养24h。2.种子培养接一环生长良好的的活化斜面种子至装有30mL种子培养基的250mL摇瓶中，8层纱布封口，32℃、100rpm的恒温摇床上培养至对数生长中后期。3.发酵培养种子液镜检无杂菌。加大发酵罐的通气量，以10％接种量接至装有3L发酵培养基的5L发酵罐中。二、内容训练项目1制药微生物发酵技术1谷氨酸发酵的代谢曲线测定

接种完毕，5L发酵罐各项参数设置如下：通气量3L/min，转速250rpm，温度32℃，pH值7.0，培养30～40h。发酵期间，流加尿素以补充氮源，每隔4h取样测定OD620nm值（将发酵液稀释20倍后，用分光光度计于吸光度620nm处测定）、谷氨酸产量和残糖量。2噬菌体的分离检查训练项目2制药微生物发酵技术认识噬菌体，学习并掌握噬菌体的分离技术。2噬菌体的分离检查训练项目2制药微生物发酵技术噬菌体的存在，往往给发酵生产带来危害，但从分子遗传学研究方面,噬菌体确是一个很好的工具。因此认识和掌握噬菌体的习性，使之造福于人类是十分重要的。噬菌体在自然界的广泛分布，往往造成微生物发酵工业的严重损失与困难。如果生产菌株被一个噬菌体侵染，那么它会很快地在菌体内得到增殖，并迅速裂解释放出100个左右的子代噬菌体，其后果是严重的。因此，充分了解噬菌体的特性，对于防止生产中的噬菌体污染具有一定的实际意义。2噬菌体的分离检查训练项目2制药微生物发酵技术1．样品味精厂土样，黄色短杆菌。2．培养基肉汤固体培养基，肉汤半固体培养基3．器皿平皿，试管，三角瓶等。实训材料2噬菌体的分离检查训练项目2制药微生物发酵技术1．噬菌体的繁殖(1)首先将黄色短杆菌接入装有20毫升肉汤培养基的三角瓶中，32℃培养12小时，使细胞生长至对数中期，(2)加入土样1克、碳酸钙0.3克摇匀继续培养24小时，培养液经4000转/分离心10分钟，取上清液至无菌瓶中，作为第一次噬菌体增殖液。实训步骤2噬菌体的分离检查训练项目2制药微生物发酵技术2．噬菌体增殖液的稀释离心第二次增殖液，取上清液用肉汤液体培养基以10倍稀释法适当稀释，取后三个稀释度的稀释液用以分离。3．噬菌体的分离融化固体、半固体培养基，先倒底层固体培养基平板，凝固后，分别取上述三个浓度的稀释液0.5毫升于底层培养基上，然后在融化后并冷却至50℃的半固体培养基中加入5毫升黄色短杆菌菌液，摇匀，倾注于上述平板上，与其中的噬菌体增殖液混匀放置。待凝固后于32℃保温箱中培养24小时。

2噬菌体的分离检查训练项目2制药微生物发酵技术4．噬菌体的选择观察平板中噬菌斑的形成，用接种针在噬菌斑中刺几下，接入有肉汤培养液的试管中，适当稀释，再次以上述双层平板法分离。如此反复进行大约5次，就可得到形态大小基本一致的噬菌斑。该噬菌斑便可作为一个噬菌体的纯株应用。归纳总结制药微生物发酵技术菌体代谢曲线的绘制和菌体生长四期的特点；噬菌体的分离技术应知应会

制药微生物发酵技术代谢（metabolism）噬菌体（phage）问题与讨论制药微生物发酵技术1．详细描述分离过程中噬菌斑的形态及变化2．如果经多次分离纯化仍得不到形态一致的噬菌斑，如何解释?制药微生物发酵技术以时间为横坐标，OD6