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文档简介

分子生物学检验技术基因测序技术生物化学检验教研室学习目标掌握：DNA测序技术的基本原理、主要步骤熟悉：第一代DNA测序技术的体系组成了解：自动化测序的方法目录双脱氧链末端终止法01化学降解法02自动化测序03CONTENTS分子生物学检验技术CONTENTS一、概述DNA测序技术/DNAsequencingtechnology测序，即核酸序列分析；核酸一级结构的测定。一、概述PATCGPOHOH5’3’OOH3’5’DNA测序的发展1977年，Sanger首创双脱氧末端终止法；美国科学家建立了化学降解法。二代测序：illumina高通量，低成本。三代测序：单分子读取技术。双脱氧链末端终止法PART01BRAF突变驱动肿瘤细胞的增殖、生长和分化（尤其在结直肠癌，甲状腺乳头状癌，黑色素瘤中占比突出）。30多种，最常见（80%）为,V600E。有60%黑色素瘤患者携带此突变。肿瘤靶向药物具有高度的选择性，只作用于含有药物特定靶点的肿瘤细胞，对那些不含有药物特定靶点的细胞和组织没有作用。Vemurafenib威罗菲尼，是一种BRAF酶的小分子抑制剂，能选择性抑制含有V600E突变的BRAF蛋白。思考如何确定黑色素瘤患者是否含有威罗菲尼的药物靶点呢？基因突变检测与基因诊断遗传咨询选择检测项目样本采集样本运输黑色素瘤检验BRAF基因是否含有V600E突变基因突变检测与基因诊断指导用药样本处理与检测出具检测报告测序结果解读基因突变检测结果不含V600E数据整理与分析基因突变检测---DNA测序技术双脱氧链终止法Sanger测序法原理：在体外DNA复制的过程中，由DNA聚合酶将双脱氧核糖核苷酸，随机插入到DNA中，引起DNA链的合成将被终止，一种DNA测序方法。Sanger测序法反应体系DNA模板DNA聚合酶引物dNTPddNTPSanger测序法

POHdNTPddNTP

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POHOHSanger测序法Sanger测序法反应过程Sanger测序法测序结果自动测序仪的改进同位素平板电泳单色荧光平板电泳多色荧光毛细管电泳自动测序仪的改进自动测序仪的改进自动测序仪的改进自动测序仪的改进自动测序仪的改进应用疾病分型01肿瘤用药02药物代谢

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