第12章 高效液相色谱法课件

HPLC仪器1第12章高效液相色谱法HPLC仪器2第4节HPLC仪器构造HPLC仪器3HPLC仪器4一、仪器构造贮液瓶泵进样器色谱柱检测器记录器柱温箱废液瓶HPLC仪器5二、输液系统溶剂储液器（储液瓶）作用：储存流动相材质：玻璃或塑料瓶HPLC仪器62.流动相处理1）溶剂应经过0.45μm微孔滤膜过滤2）溶剂脱气气泡的影响：泵的工作、色谱柱的分离效果、检测器的灵敏度、基线稳定性HPLC仪器7脱气方法（1）离线脱气法

a抽真空脱气适用：单一溶剂的脱气；对于多无溶剂体系，每种溶剂应先脱气后混合。HPLC仪器8

b超声波振荡脱气用超声波振荡10-30min即可。优点：方便，快捷缺点：脱气效率不高HPLC仪器9c吹氦脱气适用：所有的溶剂优点：脱气效果好缺点：影响混合溶剂的比例、昂贵HPLC仪器10（2）在线脱气法优点：脱气效果好，适用于多元溶剂系统。HPLC仪器11（1）输液泵应具备如下性能①流量稳定②流量范围宽③输出压力高④液缸容积小，适于梯度洗脱⑤密封性好，耐腐蚀。3.高压输液泵HPLC仪器12（2）柱塞往复泵HPLC仪器13柱塞往复泵缺点：输液脉动性大HPLC仪器14（3）泵的使用和维护①防止固体微粒进入泵体，因此应过滤流动相。防止空泵运转工作压力不超过规定的最高压力流动相应脱气，以免泵压不稳分析结束后，应清洗泵。HPLC仪器154.梯度洗脱装置梯度洗脱有两种方式低压梯度（外梯度）、高压梯度（内梯度）低压梯度：先预混合后，再加压缺点：易产生气泡优点：成本低廉适用:两种或多种溶剂体系HPLC仪器16高压梯度：先加压后，再混合优点：混合精度高缺点：需两个高压泵，价格较昂贵适用:二元体系HPLC仪器17♫六通阀手动进样器三、进样系统123456泵色谱柱色谱柱123456泵定量管LoadInjectHPLC仪器18进样体积：5、10、20、50μl，等进样针：用HPLC专用平头微量注射器HPLC仪器19♫自动进样装置自动完成定量取样、洗针、进样、复位等过程。自动化操作，适合大量样品的分析HPLC仪器201．色谱柱：是样品分离好坏的关键部件。组成：固定相、柱管等四、分离系统分析型柱：内径2-4.6mm，柱长10-30cm制备型柱：内径20-40mm，柱长10-30cmHPLC仪器211）流动相的流动方向应与箭头所指方向一致2）避免压力、温度和流动相的组成比例急剧变化及震动3）及时清除柱内杂质色谱柱的使用HPLC仪器222.保护柱（预柱）特点：接在分析柱前端固定相与分析柱相同短柱（5~20mm）可经常、方便更换作用：保护、延长分析柱寿命HPLC仪器233.柱温箱使色谱柱恒温的装置，温度控制一般在20~40℃HPLC仪器24柱效评价：

R，n，T（拖尾因子）4.色谱柱的评价05版药典规定：在建立分析方法时，需进行“色谱条件与系统适用性实验”新购买的柱，也需检验柱性能HPLC仪器25五、检测器紫外检测器（UV）蒸发光散射检测器（ELSD）荧光检测器（FD）电化学检测器（ECD）示差折光检测器（RID）HPLC仪器26HPLC仪器27原理：Uv-vis分光光度计定量关系：

Lambert-Beer定律

A=kc1、紫外检测器（Ultravioletdetector,UVD）流通池HPLC仪器28类型：可变波长型紫外检测器二极管阵列检测器HPLC仪器29（1）可变波长紫外检测器（variablewavelengthdetector）,VWDHPLC仪器30特点：1）波长可调2）某一时刻只能采集某一波长的吸收信号HPLC仪器31二极管阵列检测器（diodearraydetector，DAD）HPLC仪器32特点：在任一时间内，均可同时得到物质在不同波长下的吸收情况，即三维图谱HPLC仪器33多组分混合物的三维图谱HPLC仪器34缺点：①只能检测有紫外吸收的样品 ②流动相的选择受截止波长的限制特点：浓度型紫外可见外光光度计优点：①样品不被破坏②灵敏度高，线性范围宽，对流动相流速变化不敏感，可用于递度洗脱HPLC仪器352、蒸发光散射检测器（Evaporativelightscatteringdetector，ELSD）散射光（丁铎尔光效应）蒸发漂移管光电倍增管HPLC仪器36定量关系：散射光强只与溶质颗粒大小和数量有关适用范围：任何挥发性小于流动相的组分，通用型和质量型检测器。特点：消除了因溶剂和温度变化而引起基线漂移，适于梯度洗脱HPLC仪器37荧光检测器（fluorescencedetector,FD）原理：利用物质吸收紫外光后，能发射荧光的性质进行检测。特点：高灵敏度、浓度型检测器适用范围：能发出荧光的组分HPLC仪器384.示差折光检测器（refractiveindexdetector,RID）原理：测定组分折射率而实现组分浓度的检测适用范围：任何物质，通用型检测器特点：灵敏度较低，对温度、压力、流动相变化敏感HPLC仪器39检测器检测器分类通用型检测器专用型检测器示差折光检测器蒸发光散射检测器紫外检测器荧光检测器检测器的选择：应根据物质性质而定HPLC仪器405、检测器性能1、噪声与漂移2、灵敏度3、检测限4、线性范围HPLC仪器41高效液相色谱仪HPLC仪器42HPLC仪器43第5节分析方法一、定性分析方法利用标准品对照定性

a利用保留时间一致定性

b利用加入