生化检验基础知识

生化检测常识

目录

第一章生化检测根本常识

1.1标本的获得..........................................12）

第二章常规生化检测工程简介

2.1生化工程的临床意义................................（2）

第三章生化仪参数测量原理

3.1自动生化仪的分类.......................................（3）

3.2分立式生化仪结构.......................................（5）

3.3生化检验的原理和方法..................................（6）

3.4生化分析仪测定方法的分类及应用度的计算................（9）

3.5.测定值计算方程......................................（10）

3.6定标参数和浓度的计算...................................（17）

第四章儿个重要概念

5.1试剂空白...................................................................（21）

5.2样本空白...................................................................（21）

5.3水空白...................................................................（21）

5.4样本......................................................................（21）

5.5质控物质...................................................................（21）

5.6底物控制...................................................................（21）

第一章生化检测根本常识

生化检测是医院检验科（或化验室）常用的检测手段，通常以人的血清为标本，通过测量血清中各

生化成份的含量，为临床诊断提供依据。

1.1标本的获得

一股要求病人空腹时果静脉血（全血）。全血经过离心机离心，分层为血清和血细胞，正常情况下，上

层颜色浅■透明（血清），下层颜色深且不透明（血细胞）。有的血清较为特殊，或分层不明显（融血），

或如清不透明（脂血，呈牛奶状）。

第二章常规生化检测工程简介

2.1生化工程的临床意义

♦丙氨酸氨基转移酶（ALT）：又称为谷丙转氨酶（GPT）是衡量肝功能的重要指标，许多低端医疗

机构在做体检时仅测此一项生化工程。正常人一般在40U/L以内。干粉试剂复溶后为单试剂，液体

试剂〜股为双试剂，应用动力学法可计算结果。

♦蛋白：通常测白蛋白（ALB）和总蛋白（TPJ,终点法。一般用单试剂，有的TP试剂为双试剂，

可用两点终点法测。蛋白质是血清的主要成份，大部份由肝细胞合成。通过蛋白的测定可以协助其

些疾病的诊断。

♦血糖：血液中的葡萄糖简称血胞（GLU）o常用于糖尿病的诊断。正常人空腹血糖一般为3.9〜

6.1mmol/Lo市场上单、双试剂的商品化试剂盒都有，可用终点法（单试剂）或两点终点法测量（双

试剂)。

♦门冬氨酸契基转移函(AST)：又称为谷草转获酿IGOT),主要用于心肌和肝胆疾病及骨骼肌病的

诊断。是肝功能测试的常用指标之一。正常人一般在40U/L以内。同ALT一样，无论单、双试剂,

用动力学法可计算结果0

♦碱性磷酸酶(ALP)：主要用于肝胆疾病及骨骼病的诊断。是肝功能测试的常用指标之一。正常人

一般在240U/L以内。用动力学法计算结果。

♦Y-谷氨酰转移酶(GGT)：主要用于肝胆疾病诊断。是肝功能测试的常用指标之一。正常人一般在

50U/L以内。用动力学法计算结果。

♦胆红素(BiL)：胆红素的测定，能准确反映黄疸的程度，判断黄疸的类型。一般测量总胆红素(TBil)

和直接胆红素(DBil).

♦甘油三酯(TG)：其含量测定是血脂分析的重要内容之一。

♦总胆固醇(CHOL)：是游离胆固醉和胆固醇酯的总称，其测定对高脂蛋白血症和冠心病的诊断及

发病机理的研究有一定意义。

♦高密度脂蛋白胆固醇(HDL.C)：主要在肝脏中合成，是血清中颗粒数最多的脂蛋白。其含量是冠

心病诊断的重要依据之一。

♦肌肝(CREA)：是肌酸代谢的最终产物，由肾脏排出。是肾功能的重要指标之一。

♦尿素(Urea)：是蛋白质分解代谢的终产物。血尿素测定是肾功能的最敏感指标。

♦载脂蛋白Al(APOAl):是高密度脂蛋白的主要组成成分，临床上主要用于脑血管病风险度的估计。

♦载脂蛋白B(APOB):是低密度脂蛋白的主要组成成分，临床上主要用于冠心病的风险度的估计。

♦肌酸激酶(CK)：肌酸激酶通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一

个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生行直接关系的重要激酶。可用于早期诊断急性心肌梗，

常见肌病(如进行性肌营养不良发作期、病毒性心肌炎、多发性肌炎、挤压综合征等严重肌肉损伤)

及脑血管疾病的诊断。

♦a-羟丁酸脱氢酶(HBDH):与肌酸激的相同，用于诊断心肌梗死。

♦a.淀粉酶(AMY)：在临床应用方面，Q-淀粉酶活力升高与急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、腹内疾

病、流行性腮腺炎及细菌性腮腺炎。

♦钙、氯、铁、钾、钠、镁、磷：这7项都属于离子组合，用于诊断人体中离子的含量。

常用检测工程表

序号工程名称缩写组合参考值

1.白蛋白ALB35〜55g/L

2.总蛋白TP60〜80g/L

3.碱性磷酸酶ALP15〜U2U/L

4.门冬氨酸氨基转移前AST(GOT)8〜37U/L

肝功能

5.丙氨酸氨基转移的ALT(GPT)0〜65U/L

6.Y-谷氨酰转移酶GGT0-50U/L

7.直接胆红素DB0〜6umol/L

8.总胆红素TB0〜18umol/L

9.肌酎CREA53〜115umol/L

10.尿酸UA肾功能210~-430umol/L

11.尿素UREA2.5〜6.4mmol/L

12.胆固醇CHOL3.6~6.5mmol/L

13.甘油三酯TG0.45—1.81mmol/L

14.高密度脂蛋白HDL0.9〜1.68mmol/L

15.低密度脂蛋白LDL血脂2.7〜3.1mmol/L

16.我脂蛋白A1APOA11.0〜1.6g/L

17.载脂蛋白BAPOB0.6〜l.lg/L

18.脂蛋白Lp(a)0〜30mg/dL

19.肌酸激酶CK21-190U/L

20.肌酸激酶同工酶CK-MB0〜25U/L

心肌酶类

21.a-羟丁酸脱氢酶HBDH70〜180U/L

22.乳酸脱乳酹LDHII4-240U/L

23.钙Ca离子2.0〜2.6mmol/L

24.氯C195〜105mmol/L

25.铁Fe9〜30pmol/L

26.钾K3.5〜5.5mmol/L

27.镁Mg0.6~l.lmmol/L

28.钠Na135〜145mmoI/L

29.磷P0.8〜1.6mmol/L

30.«-淀粉酶AMY100〜220U/L

其它

31.葡萄糖GLU3.9〜5.8mmol/L

第三章生化仪参数测量原理

3.1自动生化仪的分类

连续流动式自动化分析仪

连续流动式自动化分析仪也叫管道式分析仪，其特点是测定工程相同的各待测样本与试剂混合

后的化学反响，是在同一管道中经流动过程完成的。这类仪器一般可分为空气分段系统式和非分段

系统式。所谓空气分段系统是指在吸入管道的每一个样品、试剂以及混合后的反响液之间，均由一

小段空气间隔开：而非分段系统是靠试剂空白或缓冲液来间隔每个样品的反响液。在管道式分析仪

中，以空气分段系统式最多，且较典型，整套仪器是由样品盘、比例泵、混合管、透析器、恒温器、

比色计和记录器几个部件所组成。管道内的圆圈表示气泡，气泡可将样品及试剂分隔为许多液柱，

并起一定的搅拌作用。但气泡影响比色，必须在比色前除去。

将几个单通道管道式分析仪结合起来，对一个样品同时测定匚个工程。著名的有12通道分析仪,

命名为顺序多项自动分析仪(sequentialmultipleautoanalyzer)简称SMA12/60。同时开展为SMAC,

C为计算

机

(computer)的缩写。这类大型分析仪至今仍有使用者。它对每个样品可同时分析12个工程，每个

时可分析60个样品。后来发现不参加空气泡，更有利于结果的检测，开展为流动注射分析法(flow

injectionanalysis)。试剂的流动仍用比例泵驱动，样品用转动阀参加液流，反响后比色检测。

离心式生化分析仪

离心式分析仪是1969年以后开展起来的•种分析仪，由Anderson设计，其特点是化学反响器

装在离心机的转子位置，该圆形反响器称为转头，先将样品和试剂分别置与转头内，当离心机开动

后，圆盘内的样品和试剂受离心力的作用而相互混合发生反响，最后流入圆盘外圈的比色槽内，通

过比色计进行检测。

离

心式分

析仪主

要由两

局部经

成，一为

加样局

部，二为

分析局

部。加样

局部包

离。氏柏括样品

盘、试剂

盘、吸样臂(或管)、试剂臂(加液器)和电子控制局部(键盘和显示器等)。加样时转头置丁•加样

局部。加样完毕后将转头移至离心机上。分析局部，除安装转头的离心机外，还有温控和光学检测

系统，并有微机信息处埋和显示系统。

1.3分立式生化分析仪

所谓分立式，是指按手工操作的方式编排程序，并以有节奏的机械操作代替手工，各环节用传

送带连接起来，按顺序依次操作。分立式分析仪与管道式分析仪在结构上的主要区别为：前者各人

样品和试剂在各自的试管中起反响，而后者是在同一管道中起反响；前者采用由采样器和加液器组

成的稀释器来取样和加试剂，而不用比例泵：前者一般没有透析器，如要除蛋白质等干扰，需另行

处理。恒温器必须能容纳需保温的试管和试管架，所以比管道式分析仪的体积要大。除此以外，其

它部件与管道式的根本相似。分立式分析仪的根本结构如以下图所示。Dcpout公司还推出一种袋式

分析仪，即试管变为塑料袋，反响在袋内进行，也以袋作比色杯,这种袋只能一次性使用。

干片式分析仪

干片式分析仪是80年代问世的。首先Eastmankodak公司以其精湛的化学工艺造出了测定血清

中血糖、尿素、蛋白侦、胆固醇等的干式试剂片。当加上定量的血清后，在干片的前面产生颜色反

响，用反射光度计检测即可进行定量。这类方法完全革除了液体试剂，故称干化学法。Boehringer

Mannheim公司推出了用全血的干征试剂。即将血细胞排除于滤膜之外，而血浆与试剂发生反响后

显色检测。

-保扩网

一血长分离层

匚辆就X剂层

费帘密行

模块式自动化系列

7600系列全自动生化分析仪是U立公司于1998年开发出来的系列分析仪。它是由各种不同功

能的模块组合而成，功能模块包括有样本投入部、电解质测定的ISE模块、常规实验工程测定的D

模块、特殊实验工程测定的P模块、狂查样本缓冲部和样本收纳部。根据D模块和P模块数日组合

成不同型号的分析仪。

模块组合式实验室自动化系统包括：

样品前处理系统，样品输送系统和样品后处理系统（生化分析，电解质分析，血液分析等）。样

品前处理系统由能独立工作，不同功能的各模块以同一标准来连接，通过计兑机控制运行。由样品

投入部，离心别离部，开栓部，在线分注部，非在线分注部，贴条码部，盖栓部，样品分注收存部,

标本接收部等模块构成前处理系统，每一模块既是系统的一局部,乂是独立的单元，可根据不同需

要选择使用，具有灵活性和扩展性。

后处理系统有电解质分析系统，生化分析系统以及血液分析系统等。

1.6全实验室自幼化分析系统

从检验标本处理开始，即标本的识别、传输、处理（别离血清等）、分注、分类（按工程分类）、

检测和收费的白动化流水作业，到分析后白动储存标本，检验结果的白动分析、报告与传送，白动

提示异常值或危险值，申请检验医师随时查询检验结果的全过程实现自动化、网络化。

3.2分立式生化仪结构

全自动生化分析仪一般由以下局部构成：探针系统、搅拌和冲洗系统、恒温系统、反响盘、无

路系统构成。

2.1探针系统

/面检测技术：通过检测阻抗或电容、电流的变化，感知到空气和液面，可保证探针

的感应装置至液面时会自动停止下降，即可增加速度也可减少污染，防止堵塞。

2.2搅拌和冲洗系统

搅拌系统是让样品和试剂混合后迅速分布均匀，保障测试正常进行。常用的搅拌方法

为冲入空气、搅拌、振荡等，但是都容易产生气泡和外溢等问题。目前最好的方法是螺旋

式搅拌棒附着特富龙涂层，一方面减少气泡，另一方面减少携带和污染。

清洗系统一般包括试剂针的内外臂清洗、样本针的内外臂清洗、比色杯的清洗。

2.3恒温系统

全自动生化仪一般都设有30和37度两种温度。目前常见的有水浴、空气浴，最新的

是恒温液循环加温方式。

水浴的优点是温度均匀、稳定；缺点是升温缓慢，开机预热时间长，因水质化（微生

物、矿物质沉积）影响则定，因此要定期换水和比色杯。

空气浴的优点是升温迅速，无需保养：缺点是温度易受外界环境影响。

怛温液循环加温集干式空气浴和水浴的优点，即有冰浴温度稳定、均匀的优点，又有

空气浴升温迅速、无需维护保养的优点。

2・4反响盘

现在大多数采用硬质玻璃比色杯（石英杯），其透光性好，易清洁，不易磨损.

2.5光路系统

光源：光源分为卤素灯和高压闪烁枇灯。相对而言卤素灯寿命长，价格低，是大局部三

化仪的首先。

3.3生化检验的原理和方法

临床生化检验，主要在技术方面的应用方面上探讨生化检验新技术以及新的标记物的选择和

评价，用于帮助诊断，又称“珍断生化”。主要应用于以下技术：光谱技术、电化学分析技术、层

析技术、电泳技术、离心技术、抗原抗体特异性反响和标记技术、核酸扩增、朵交及序列分析技

术等，其中生化分析仪主要运用了光谱技术中的吸收光谱法和比浊法。分别介绍如下：

3.1吸收光谱法

3.1.1光谱范围和电子跃迁

波长从200nm—400nm的电磁辐射，称为紫外光，波长从400nm—760nm的电磁辐射，称为订

见光。

3.1.2吸收曲线

以波长（X）为横坐标，以吸光度为纵坐标而绘制出的一条山线称为吸收曲线。

在一段波长范围内，有最大吸收波长心的和最小吸收波长机汕在最大吸收波长处测定可获得最

大的测定灵敏度。

3.1.3吸光度的定义

一束强度为IQ的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸光物质、厚度为L的吸收池时，如上图，

一些光子被吸收，光强从Io衰减为I”那么该溶液的吸光度A等于：

3.1.4Lamber-Beer定律

A=cCL

其中€为吸光系数，有两种表示方法摩尔吸光系数和比吸光系数，摩尔吸光系数的意义为1摩尔波

度的溶液在厚度为1cm时的吸光度，比吸光系数的意义为浓度为1%（w/u）的溶液在厚度为1cm时的

吸光度；C为溶液的浓度；L为吸收池的厚度（单位为cm,亦称光径）。

Lamber-Beer定律的意义为：某溶液的吸光度等于该物质的吸光系数£、浓度C和光径L（cm）的

乘积，当光径不变时，浓度和吸光度成正比，这是生化分析仪利用吸收光谱法进行定量测定的根底，见

以下图：

Lamber-Beer定律成立的前提条件是：（1）被吸收光为单色平行光，（2）待测定溶液为稀溶液。

除特种蛋白外的大局部临床生亿工程，配以相应的试剂，均可利用吸收光谱法在生化分析仪上进行

测定。如:

函类：包括ALT、AST、ALP、ACP、r-GT、a-HBDH、LDH、CK、CK-MB、a-AMY、等。

底物/代谢产物类:包括TG、TC、HDL-C、LDL-C、UA>UREA、Cr、Glu、TP、Alb、T-BikD-Bik

NHJ、CO2等。

无机离子类：包括Ca、P、Mg、Cl等。

3.2比浊法

3.2.1

比浊法分两类：透射比浊法和散射比浊法。

带有小粒的悬浮液和胶体溶液都具有向四面八方散射入射光的性质，当一束平行光通过含有悬浮质

点的悬浮液或胶体溶液时，同时受到散射和吸收两个因素的影响，使光的强度减弱。在光源的光路方向

上测量透射光（实际上还包括散射光）强度与入射光强度比值，并通过该比值测定出悬浮液或胶体溶液

中质点的溶度，称为投射比浊法：在光路的其他方向上.测量散射光强度，从而测定出悬浮液或胶体溶液

中旗点的浓度，称为散射比浊法。

3.2.2测定原理

透射比浊法

超融券辘鹫质点（颗粒大个

一束强度为Io的平行10

与光源波长接近）的悬浮一液或胶体溶液时，如上图，其透射光强度

I可用下式表示：

TL

I=Ioe'L

式中,L为悬浮液或胶◄---------体溶液在光前进方向上的长度，访浊度系

数，与悬浮质点的浓度C成线性关系。令尸2.3KC,那么：

该式与Lamber-Beer定律相似，这是生化分析仪利用投射比浊法进行定量测定的根底，该法可以与

吸攻光谱法共用一个检测器，所以生化分析仪，不需增加任何部件，均可利用此法进行测定。大局部特

种蛋白，如载脂蛋白类（apoALapoB等）、补体类（C3,C4等）免疫球蛋白类（IgGJgM等）等，配以

相应的试剂，可利用此法在生化分析仪上进行测定。

散射比浊法

一束强度为L平行单色光通过一个含有悬浮质点（颗粒大小远小于无

源波长）的悬浮液或胶体溶液时，如上图，与入射光垂直方向上，其

散时光强度I可用下式表示：

式中，nl,n2分别表示质点与介质的折射率.，V表示单位体积内

的质点数，r表示质点半颗粒大在端叱栅唾独度与悬浮质点的浓度成正

比，这是利用散射比浊法进行定量测定的根底，因另需在光路垂直方

向上增加一检测器，目前只有极少数生化分析仪可利用散射比浊法

进行定量测定，而几乎所有的特种蛋白分析仪、免疫分析仪等都能利用散射比浊法进行定量测定。

3.2.3方法学分析

（1）散射比浊法与透射比浊法：

散射比浊法灵敏度高，线性范困宽，但干扰因素多。

（2）比浊法与吸收光谱法：

比浊法特异性差，灵敏度低。

3.4生化分析仪测定方法的分类及应用度的计算

终点法

概述

指经过一段时间（一般为io分钟左右）的反响，整个反响到达平衡，由于反响的平衡常数很大，

可认为所有的被测定物已转变为产物，反响液的吸光度不在增加（或降低），吸光度的增加（或降低）

程度与被测定物的浓度成正比。如以下图：

如卜・图：r时刻参加试剂（体枳为v）,t2时刻参加样本（体枳为s）,然后搅拌并反响，之后测量

反响液的吸光度,在t3时刻反响到达终点。T2-t3为测定时间。

4.4.2反响度R（Response）的计算

结果的计算包括三个局部：反响度R（Response）的计算、定标参数的计算和浓度（或活性）的计

算,这里仅介绍R的计算，定标参数的计算和浓度（或活性）的计算在后面专门讨论。

1）单试剂单波长终点法

反响度R=t3时刻吸光度-t2前-时刻吸光度x（体积校正因子）

或R=t3时刻吸光度一单试剂空白吸光度。

2）双试剂单波长终点法

tl时刻参加第一试剂（体积为VI）,t2时刻参加样本（体积为S）,之后搅拌，t3时刻参加第二试

剂（体积为V2）并立即搅拌，t4时刻反响打到终点。13r2为孵育时间,14r3为测定时间。

反响度R=t4时刻吸光度-双试剂空白吸光度

一级动力学

概述

一级动力学是指在被测物参与反响的条件下，在一定的反响时间内，反响速度与反响物浓度的一次

方成正比，由于反响物在不断的消耗，因此整个反响速度在不断的减小，表现为吸光度的增加〔或降低〕

速度越来越小，由于这类反响到达平衡的时间很长，且平衡常数不算很大，必需在特定时间段内进行监

测，该段时间内吸光度的增加（或）降低与被测定物的浓度成正比，见以下图。一级动力学法又被称为

初速率法、固定时间法、二点动力学等。

如下图：tl时刻参加试剂（体积为V）,之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻参加样本（体积为S）,

13时刻反响稳定，14时刻停止对反响进行监测：12-13为延迟时间，t3-t4为测定时间。

反响度R的计算（单、双试剂相同）

反响度R=t4时刻吸光度一t3时刻吸光度

零级动力学法

概述

指反响速度与被测定物浓度的零次方成正比，也就是与被测定物浓度无关，因此，在整个反响过程

中，反响物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或

增加的速度（AA/min）与被测物的活性或浓度成正比。零级动力学法即通常所说的动力学法，也被称

为连续监测法，主要用于酶活性的测定。

实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反响的进行:底物消耗到一定的程度后，反响速度不再

与酶活性成正比，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定，

见以下图中的t3-tn:

tl时刻参加试剂（体积为V）,t2时刻加如样本（体积为S）,t3时刻反响稳定，tn时刻停止对反

响进行监测；13到tn之间的时间内，吸光度匀速变化，变化的速率和反响物的浓度成线性关系。t3-t2

为延迟时间，tn-t3为测定时间。

4.3.2反响度R的计算（单、双试剂相同）

其中n=l3到in间的数据个数

Ti=M间

A尸某一时间的吸光度

3.5.测定值计算方程

以下为各种方法学的测定值计算方程及监察参数定

三种根本方法的应用如下：

终点法

-两点法

-动力法

终点法-单试剂，单波长及样本空白扣除

测定值X单位因子-截距

最接辍告结果=

斜率

Ti-ir

延时时间

反响控制

是用来监察在终点法中反响是否己到终点.

Abs(Ti)-Abs(D(反响控制

吸光度一+一参加洋本I

婶般嘀S，币―A快71")=0.3336-0.3319=0.0017〈反响控制|

终点法时：沟命喻井前六戒：的吸光度差值要少于仪器给出小阐螺4

两测的吸光

如达线而止会坤终点本稳定；；/C度差值.

固地此问法：判断参与诂算的町点线性，例9I

T1

试剂白波动

试剂白波动是试剂本身在测读时间内的吸光度变化值.

吸光度

(Ah........................TfRGT波动

RBL............\*

---------------------------------------------------J------------畤周

两点法(I.R.)-单试剂Tn,

测定值x单位因子-截距

最后报告结果=----------------------------------

斜率

测定值：好康［Abs样本-RGT波动］

(Abs)

Abs样本=Abs样时(T,)-Abs样本(T)

Abs(Ti)样本或..........…….................

RGT波动=标彻)s试剂空白:Abs试剂(T)-Abs试剂(T。)

标准浓度

Abs(To)村

勰嘱IF

Ab媒瑞啾剂产白AAbs

测定篇.曾半xI—勒工挂本dGI.滋动1T2读数时间样本/标本

标注浓原

因子"s⑴)

Ti

H2O/STD;RGT漂移

Abs标准土RGT波凄本

起时极限

Afp=Abs(T.)-\bs(T(l-18”)

Asp=Abs(T)-tbs18")

假设比值瑜合乂下条件:

Afp-覆性E才子IASD＜起始极限

测结果会有报警反响不符合线性.时间

参加R2延迟时间Ti延迟时间

吸光度

线性困忘)

Afp

比值一=线性区数

AspAAlp

底物消耗值

正反响

=消光系数

1000=单位转换-由ml转换为ul

测定值=因数XAbs/分.=因配x[Abs(T(1)-Abs(T,)]x60/[(TJ-(Ts)]

3.6定标参数和浓度的计算

定标参数的计兜

定标方法分为两大类，即线性定标和非线性定标，其中线性定标又包括单点线性定标

（乂称因数法）、两点线性定标（乂称线性法）和多点（大于3点）线性定标（乂称线性回

归法），主要适用于比色法测定的工程；非线性定标主要适用于比浊法测定的工程，下面分

别予于介绍。

几点说明

（1）三种测定方法（终点法、固定时间法和动力学法）可以和上述的定标方法任意对

应。

（2）后面的定标公式中：

R表示反响度（详见上文“R的计算”）

C表示标准液的浓度（或活性）。

K、R）.a、b、c、d表示定标参数。

标准液亦称基准溶液，是浓度已经准确测知的溶液。

线性定标

（1）单点线性定标

定标公式：R=KC,只有1个定标参数K,K=也安

定标曲线如以下图：0标

只需提供1个标准品。大多数酶学工程可以不定标而直接输入因数（输入值

F=l/K）

(2)两点线性定标

定标公式：R=DC+b,有2个定标参数，K和b

其中

要求提供两个标准品，CLC2为标准品1和2的浓度，RI、R2为标准品1和2的反响

度。定标曲线如以下图：

(3)多点线性定标

定标公式：R=KC+b,有两个定标参数，K和b,其中：

要求提供n(n>3)个标准品，Ci为标准品i的浓度，Ri为标准品i的反响度。

3.1.3非线性定标

(1)Legistic-Log4P

定标公式：有4个参数，即电、K、a和b。

要求提供至少4个标准品，其中第一个标准品的浓度(活性)为零，其对应的R就等

于电，用最速下降法+拟牛顿法求解。适用于随着浓度增加，其反响度增加越来越小的定标

曲线，如图：

(2)Logistic-Log5P

定标公式：有5个定标参数即电、K、a、

b和c。要求提供至少5