欧蒙抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。适用范围检验科免疫组工作人员。试剂规格名称与组成型号名称：ANA谱1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENPB，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体P蛋白 类型：IgG 基质：抗原包被的检测膜条 规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白和AMAM2共14种不同抗原IgG类抗体。5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征），原发性胆汁性肝硬化。6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在20%到100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在20%至40%之间。因此，ANA鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1,23],—局限型系统性硬化症（CREST综合征）[28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5] 7.主要组成成分：成份规格规格标识1.包被抗原的检测膜条：nRNP/Sm、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMAM2。 16条4x16条STRIPS2.阳性对照人IgG，100倍浓缩1x0.02ml4x0.02mlPOSCONTROL100x3.酶结合物碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，10倍浓缩 1x3ml4x3mlCONJUGATE10x4.样本缓冲液直接使用 1x100ml3x100mlSAMPLEBUFFER5.清洗缓冲液10倍浓缩 1x50ml1x100mlWASHBUFFER10x6.底物液NBT/BCIP（四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲哚-磷酸盐），直接使用 1×30ml 4×30ml SUBSTRATE7.温育盘 2x8槽--- 8.产品说明书1份1份LOT 试剂批号 储存温度IVD 体外检测 未开封可稳定至8.储存条件及有效期：2-8°C保存，不要冷冻。未开封前，除非特别说明，试剂盒自生产日起可稳定18个月。稀释后的酶结合物和清洗缓冲液需在一个工作日内用完。9.样本要求样本：人血清或EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。稳定性：待检患者样本于2-8°C可稳定14天，稀释后的样本应在同一个工作日内检测。样本稀释：患者样本用样本缓冲液1:101稀释，如可取15ul血清用1.5ml样本缓冲液稀释并用漩涡混匀器充分混匀。不可用加样器混匀。10.检验方法10.1试剂的准备和稳定性注意：使用前所有试剂均必须于室温（18-25°C）平衡30分钟。从第一次使用起，试剂盒如保存在2-8°C，并且在没有污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。 -包被抗原的检测膜条：直接使用。为防止膜条发生冷凝，只有当膜条平衡到室温后才可打开包装。取出膜条后应立即密封好原包装并将其保存于2-8°C。 -阳性对照：100倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需阳性对照，用样本缓冲液1:101稀释如：15ul阳性对照用1.5ml样本缓冲液稀释并充分混匀。已稀释的阳性对照应在同一个工作日用完。检测膜条上有一条质控带，如果质控带出现强的颜色反应说明实验操作正确。膜条包被抗原的位置上出现的白色条带应判为阴性。抗原及其在检测膜条上的位置：DL1590-3G欧蒙印迹法检测膜条包被有如下抗原：nRNP/Sm：小牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然U1-nRNP。Sm：牛脾脏和胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然Sm。SS-A：牛脾脏和胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然SS-A。Ro-52：重组的Ro-52（52kDa），相应的人cDNA用杆状病毒系统在昆虫细胞中表达。SS-B：小牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然SS-B。Scl-70：牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然Scl-70（DNA拓扑异构酶1）。PM-Scl：重组抗原，相应的人cDNA用杆状病毒系统在昆虫细胞中表达。Jo-1：小牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然Jo-1（组氨酰-tRNA合成酶）。CENPB：重组的着丝点蛋白B，相应的人cDNA用杆状病毒系统在昆虫细胞中表达。PCNA：重组的PCNA（36kDa），相应的人cDNA用杆状病毒系统在昆虫细胞中表达。dsDNA：从鲑鱼睾丸提取物中高度纯化的天然双链DNA。核小体：从牛胸腺提取物中纯化的天然核小体。组蛋白：从牛胸腺提取物中纯化的各种类型组蛋白的混合物。核糖体P蛋白：小牛和兔胸腺提取物，用亲和层析纯化的天然核糖体P蛋白。AMAM2：从猪心脏提取物中纯化的天然M2抗原（丙酮酸脱氢酶复合物）。根据抗原带着色的深浅，可将结果分为阴性、可疑和阳性。抗原带着色的深浅结果无色阴性着色非常弱可疑着色中到较强阳性着色与质控带强度相同强阳性根据EUROLineScan判读结果，可将结果分为阴性、可疑和阳性。等级EUROLineScan着色强度结果o0-5阴性(+)6-10可疑+11-25弱阳性++26-50阳性+++51-256强阳性用欧蒙印迹法检测自身抗体时，应同时采用间接免疫荧光法实验。这样一方面可确保结果的可靠性，排除假阳性反应；另一方面，欧蒙HEp-2细胞，特别是HEp-2细胞与灵长类肝冰冻组织切片的生物薄片马赛克的间接免疫荧光法可检测抗核抗体的范围非常广，而欧蒙印迹法检测膜条上的抗原种类非常有限，只能检测有限的抗体。13.产品性能指标13.1定标：检测膜条上各种抗原的反应性已用疾病控制中心（美国亚特兰大）提供的人参考血清 这些CDC血清的特异性已用免疫荧光模型（基质：HEp-2细胞和灵长类肝脏）、双向免疫扩散或对流免疫电泳的结果进行验证，这些血清不是单一特异性的。13.2检测范围：欧蒙印迹法为定性检测方法，没有检测范围，样本稀释度为1:101。13.3交叉反应：高质量抗原（抗原和抗原的来源）确保了检测系统的高特异性。本欧蒙印迹法检测试剂可特异检测IgG类抗nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMAM2抗体，未发现与其它自身抗体之间的交叉反应。13.4干扰：血红蛋白浓度小于5mg/ml的溶血、甘油三脂浓度小于20mg/ml的脂血和胆红素浓度小于0.4ml/ml的黄疸对检测结果没有影响。13.5批内和批间差异：通过比较同一样本在相同时间内多次检测结果的差异来研究批内差异；批批差异为用不同批号产品对同一样本进行检测所得的差异。每一次实验，抗原带着色的深浅都在额定范围内。该欧蒙印迹法试剂具有很好的批内和批间重复性。14.注意事项14.1