T-GDPPS 010-2024 红火蚁蚁群室内饲养技术规程

ICS65.020.01GuidelineforlaboratoryculturemethodofSolenopsisinvictaBuren广东省植物保护学会发布ⅠT/GDPPS010—2024本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省植物保护学会提出并归口。本文件起草单位：华南农业大学、广东省农业有害生物预警防控中心、即扑有害生物防控技术有限公司。本文件主要起草人：王磊、陆永跃、叶钦杰、彭彬、叶钦文、许益镌、刘晨浪。1T/GDPPS010—2024红火蚁蚁群室内饲养技术规范本文件规定了红火蚁野外蚁群采集和室内饲养方法。本文件适用于红火蚁野外蚁群采集和室内饲养。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1水试管watertube在玻璃试管（直径20mm或30mm×长200mm）中加水到离管口3cm处，用密实棉花球塞进管口然后向下推移棉塞直到棉球完全被水浸湿为止。3.2人工蚁巢artificialantnest人工蚁巢由填有1/3～2/3医用石膏或建筑用石膏的培养皿(φ22cm或9cm）底部和有孔洞(φ0.5cm）的皿盖组成。可用红色塑料纸或锡箔纸覆盖培养皿盖遮避光线使人工蚁巢更接近自然蚁巢。3.3婚飞蚁后newly-matedqueen生殖雌蚁在婚飞交配后，落地褪翅，被称为婚飞蚁后。3.4蚁群colony由红火蚁工蚁、幼蚁、生殖蚁等多个品级构成的具有持续存在能力的群体。3.5水滴法waterdropmethod分离红火蚁与巢穴土壤的方法，通过向装有红火蚁巢穴的容器中持续滴水使红火蚁与土壤分离。3.6弃尸堆refusepiles由红火蚁将剩余的食物碎片、红火蚁本身的尸体搬到蚁巢外统一堆放形成。4工具及材料4.1采集工具及材料2T/GDPPS010—2024吸虫器、铁锹（铲面长30cm～35cm、铲面宽15cm～25cm）、手套（医用外科乳胶手套或橡胶手套）、滑石粉或爽身粉、16L～30L塑料桶或整理箱、雨靴、棉花、黄粉虫或蝗虫或火腿肠、塑料盘、石膏板、酒精。4.2饲养材料蚁群饲养盒宜选用透明的塑料保鲜冷藏盒。根据蚁群数量可选择40cm×30cm×10cm或30cm×25cm×10cm规格的饲养盒。高度最好10cm～15cm。蚁群饲养盒最好带有透明盖便于观察和操作。人工蚁巢由填有1/3～2/3医用石膏或建筑用石膏的培养皿(φ22cm或9cm）底部和有孔洞(φ0.5cm）的皿盖组成（附录C图C.1）。可用红色塑料纸或锡箔纸覆盖培养皿盖遮避光线使人工蚁巢更接近自然蚁巢。石膏板（长宽≥25cm、厚度≥10cm）。水、10w/w%糖水、蝗虫或黄粉虫或其他昆虫。5红火蚁野外采集技术5.1采集前准备工作在装蚁巢的容器（桶或整理箱，40L-60L）内壁距顶部边缘30cm处及以上区域涂上滑石粉或爽身粉，同样将涂抹滑石粉或爽身粉涂于铁锹手柄处。采集时需穿密闭性较好的雨靴或运动鞋配长筒袜，避免脚部皮肤裸露。在雨靴或运动鞋的鞋帮处涂抹滑石粉或爽身粉。作业人员双手戴好橡胶手套。5.2采集天气情况宜选择晴天、多云或阴天开展采集活动，采集时降雨或采集前1天～2天采集区域内有强降水、地面有积水，不宜采集。气温在20℃~32°C之间。5.3采集过程选择蚂蚁活跃且蚁丘直径在20cm以上的红火蚁蚁巢进行采集。采集前，作业人员双手应戴好橡胶手套并涂抹滑石粉，以防止红火蚁直接爬至手臂。先将蚁巢周围荒草、石块等有碍挖掘的东西作适当清理，以方便后续操作，清理过程应避免惊扰蚁巢。使用铁锹将整个蚁巢的地上部分及地下部分分多铲挖出来，迅速放到放到16L～30L桶或整理箱内。挖取的巢土顶部距离桶或整理箱的上缘距离不低于20cm，导致蚂蚁逃逸。采集时尽可能采集到有翅蚁和蚁后。挖好后，将巢坑处进行简单回土处理。5.4采集后运输采集后，装蚁巢的容器应在封口处留出些缝隙或不封口，以免容器内壁的滑石粉失效，造成红火蚁逃逸。在将采集到的蚁巢运输回室内过程中，应每隔1小时～2小时观察容器内壁是否需要补充涂抹滑石粉，防止红火蚁逃逸。同时降低运输车辆内部温度至24°C及以下。观察注意是否会出现婚飞行为。5.5室内静置3T/GDPPS010—2024将采集回来的蚁群放在室内静置2天～3天，装有红火蚁蚁群的容器不要覆盖容器盖。期间每隔1天淋100mL～200mL清水，以保持蚁巢土壤部分湿润，放入水试管为蚁群提供水分来源，并提供黄粉虫或蝗虫或火腿肠为蚁群提供蛋白质来源。5.6蚁群分离使用水滴法将蚁群从土中分离出来，操作流程如下：（1）准备1个饲养盒，并在其内壁均匀涂抹滑石粉，作为容纳蚁群的容器。（2）在饲养盒内部两端分别置入1个人工蚁巢和1块石膏板。（3）取出盛有蚁巢的容器，并以约100mL/min的流速将水滴入容器中央，待水面没过土壤表面后，蚁群会漂浮在水面。（4）使用漏勺将漂浮的蚁群捞出并转移至步骤1准备的饲养盒中的石膏板表面。（5）待蚁群自主转移至人工暗室后，取出石膏板及其它杂物，完成分离工作。6红火蚁婚飞新蚁后的野外采集及饲养6.1蚁后的采集使用吸虫器采集新蚁后。采集过程中尽量避免对蚁后造成伤害，降低其存活。采集时间：红火蚁婚飞高峰期，即春夏季，大雨过后，天气闷热，气温26℃左右时的午后。采集地点：红火蚁发生密度较高（一般三级以上区域）、向阳背风的位置，较容易获得刚刚婚飞交配完落地脱翅准备建巢的新蚁后。6.2采后室内饲养将采集到的新蚁后带回室内后，放置于新蚁后饲养装置中进行饲养直至首批工蚁羽化。装置由一个15mL玻璃管组成，在玻璃管内倒入1/2～2/3的纯水，使用棉花塞塞紧，以棉花塞湿润但没有水渗出为宜（附录图C.2）。蚁后放入后，使用棉花塞将试管口封闭，使得空气可以进入但是新蚁后无法出去。待第一批工蚁羽化后，在棉花塞中加一经裁剪的移液枪头，这样可以保证空气流通，保证工蚁进出觅食，但是新蚁后无法出去。7红火蚁蚁群的室内饲养7.1饲养室条件红火蚁饲养室温度需要保持在26±2oC，相对湿度60%-80%。可使用空调和加湿器或培养箱控制饲养环境的温湿度。7.2饲养食物及水红火蚁蚁群的存活需要水、糖类和蛋白质类。水源：将“水试管”用透明胶或铁丝支架固定平放在饲养盒中，为红火蚁持续供水，5天～7天更换新的水试管。4T/GDPPS010—2024蜂蜜水。每天供给蚁群5mL蜂蜜水。将蜂蜜水盛放在一个小容器（培养皿或瓶盖）中，然后平放在饲养盒中；也可用浸蜂蜜水的脱脂棉饲喂蚂蚁以免粘住蚂蚁。（2）10w/w%蔗糖溶液。用1份蔗糖和9份水配制10w/w%蔗糖水，然后制作成蔗糖溶液试管放入红火蚁饲养盒内。根据蚁群消耗情况及时更换水试管和10%w/w蔗糖溶液试管，至少保证1周更换1次。蛋白质：黄粉虫幼虫、蛹或成虫、冷冻东亚飞蝗及猪肝粉等。及时添加蛋白质类食物，每天30g左7.3蚁群日常管理红火蚁作为社会性生物，具有将工蚁尸体、食物残渣等搬到蚁巢外形成弃尸堆的习性，故饲养过程中每隔5天～7天清理饲养盒内的弃尸堆，防止弃尸堆中的病原菌对蚁群产生不利影响。及时更换水源和糖类食物。及时提供黄粉虫幼虫、蛹或成虫、冷冻东亚飞蝗及猪肝粉等蛋白质食物。使用水滴法分离获得并在室内养殖7天后的蚁群，才能挑取其中的蚂蚁开展试验研究。8人员防护带上厚橡胶手套并涂上滑石粉保持手臂垂直防止蚂蚁攀爬。当观察和试验操作时注意衣服、头发和装饰不要掉入蚁群盘中。9饲养后蚁群处理对于还存活或者不再需要的蚁群，可将其连同饲养盒一起放置于-20oC环境下连续处理24小时进行灭杀。10生物安全管理红火蚁是一种植物检疫性有害生物，不能在非疫区饲养。因科研等需要在非疫区饲养的，需要向当地植物检疫部门提出申请并得到批准后方能饲养。在红火蚁疫区开展红火蚁饲养时是主要对于还存活或者不再需要的蚁群，可将其连同饲养盒一起放置于-20oC环境下连续处理24小时进行灭杀。5T/GDPPS010—2024附录A红火蚁生物学信息A.1生物学特性婚飞蚁后一般独立建巢，在建巢后1天～2天内产卵，26oC±2oC条件下，卵期6天-7天，幼虫期10天左右，蛹期10天。从卵到工蚁羽化历期在26天左右。A.2红火蚁工蚁特征工蚁形态特征（图A.1），各部位特征可参考以下信息进行识别：a）工蚁体长2.5mm～7.0mm。体色红褐色，腹部呈黑褐色体表略光滑；b）复眼黑色。触角10节，鞭节端部两节膨大呈棒状；a）额下方连接唇基明显，两侧各有齿1个，唇基内缘中央具三角形小齿1个，齿基部上方着生1根刚毛；b）前胸背板前端隆起，前、中胸背板的节间缝不明显，中、后胸背板的节间缝则明显；胸腹连接处有2个腹柄结；腹部卵圆形，可见4个体节，腹部末端有螯刺伸出。图A.1红火蚁工蚁（RyanWhitehouse和JoeA.MacGown拍摄）A.3雄性生殖蚁6T/GDPPS010—2024雄性生殖蚁体长7mm～8mm，体黑色，着生翅2对，头部细小，触角呈丝状，胸部发达，前胸背板显著隆起。A.4雌性生殖蚁有翅型雌蚁体长8mm～10mm，头及胸部棕褐色，腹部黑褐色，着生翅2对。头部细小，触角呈膝状，胸部发达，前胸背板显著隆起。图A.2红火蚁生殖蚁（从右至左分别为雌性生殖蚁、雄性生殖蚁）A.5蚁后蚁后（图A.3）无翅，其他特征与生殖雌蚁相同。其体型，特别是腹部可随寿命的增长不断增大。图A.3红火蚁蚁后与红火蚁幼蚁7T/GDPPS010—2024A.6红火蚁蚁巢特征红火蚁为完全地栖性蚁巢的蚂蚁种类，成熟蚁巢（图A.4）是以土壤堆成高10cm～30cm，直径30cm～50cm的蚁丘；蚁丘表面土壤疏松，内部结构呈蜂窝状。图A.4成熟的红火蚁蚁巢8T/GDPPS010—2024附录B被采集蚁巢信息记录文件被采集蚁巢信息记录文件表见表B.1。表B.1被采集蚁巢信息记录表9T/GDPPS010—2024红火蚁室内饲养装置图C.1蚁群饲养人工蚁巢图C.2红火蚁新蚁后饲养装置T/GDPPS01