肠道致病菌的微生物学检查

试验五

肠道致病菌微生物学检验

结核分枝杆菌培养及形态观察

医学微生物学试验

1/29试验内容：1.肠道致病菌微生物学检验2.结核分枝杆菌培养及形态观察

（抗酸染色）2/291.肠道致病菌微生物学检验（1）试验目标Aaaaaaaaaaaaaaaa示教：常见肠道细菌3/29（2）惯用培养基介绍主要包含：麦康克培养基、伊红美蓝培养基、中国蓝琼脂平板、SS琼脂平板、双糖铁培养基示教：伊红美蓝培养基双糖铁培养基4/29SS平板－分离肠道病原菌强选择培养基成份和作用：基础培养基：提供氮源和碳源胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄）：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色病原菌:小,无色非致病菌:大,红色5/296/29病原菌:透明,无色，小菌落

非致病菌:紫黑色EMB（EosinMethylBlue)平板——分离肠道病原菌弱选择培养基7/298/29克氏双糖培养基接种方法怎样观察上层含乳糖部分乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色H2S然后观察下层发酵葡萄糖（产酸产气）动力乳糖硫酸亚铁固体葡萄糖半固体指示剂:酚红9/2910/29（3）肠道致病菌分离判定①标本搜集②分离培养③初步判定④血清学判定⑤生化反应11/29标本选择判别培养基

SS平板生化反应血清学判定双糖管等已知Ab检测未知Ag

(玻片凝集试验)37℃24h？和球菌不一样粪便标本肠道致病菌分离判别流程12/29

乳糖葡萄糖动力硫化氢大肠杆菌黄色

+-痢疾杆菌红色+--伤寒杆菌红色+++/-13/29判别肠道致病菌生化反应糖发酵试验甲基红试验VP试验枸橼酸盐利用试验硫化物（硫化氢）生成试验吲哚生成试验尿素水解试验示教：生化反应举例14/29糖发酵试验(fermentatontest)示教：单糖发酵管

15/29

甲基红试验（methylredtest）-+16/29

-+VP（Voges-Proskauer）试验17/29

－++-18/29

UreaseTest

尿素酶试验：H2SProduction硫化氢试验19/29

-+20/29IMViC试验(IndoleTest;MethylRed(MR)Test;Voges-Proskauer(VP)Test;CitrateUtilizationTest)

大肠埃希菌＋＋－－产气杆菌－－＋＋21/292.结核分枝杆菌培养及形态观察发病趋势和临床意义：aaaaaaaaa22/29结核分枝杆菌形态：细长，略弯曲杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。染色性：不易着色，齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其它物质蓝色。培养特征：专性需氧，最适37℃，营养要求高，生长迟缓，18h分裂一代。罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔雀绿，2~6周可见菌落生长，菜花、颗粒或结节状菌落，乳白色或黄色，不透明。在液体培养基，生长于表面，有皱褶。23/29结核分枝杆菌培养方法1．痰标本培养前处理（1）酸处理法：痰标本加入4％硫酸稀释2～4倍，置室温下30min，期间振荡2～3次，使痰液化后即可接种。（2）碱处理法：痰标本加入2％氢氧化钠溶液稀释2～4倍，置37℃温箱内30min，期间振荡2～3次，痰液化后即可接种。2．接种培养法

取上述处理过痰液0.1ml均匀接种于改良罗氏培养基斜面，37℃孵育3～4周后观察菌落特点。24/29菌落为乳白色或米黄色，表面粗糙呈颗粒状或菜花状25/29

抗酸染色结核杆菌对苯胺染料普通不易着色，但经加温或延长染色时间后能抵抗3％盐酸乙醇脱色作用。经此法染色后，结核杆菌及其它分枝杆菌呈红色，非抗酸菌呈蓝色。示教：结核分枝杆菌抗酸染色26/29试验步骤：1．用竹签挑取开放性肺结核病人晨痰标本中干酪样小粒或脓性部分，或用取菌环挑取经酸、碱处理后痰标本，置载玻片中央，均匀涂布成1.5×2.0cm卵圆形痰膜，干燥，固定。2．滴加石炭酸复红液于涂片上，玻片置于酒精灯火焰缓缓加热，至有蒸汽冒出，约维持5min（切勿沸腾或使染液干涸于玻片上）。如有染液干涸趋势，应补加染液。然后自然冷却，用流水漂去多于染液。3．滴加3％盐酸乙醇脱色，至涂片较厚处无颜色脱出为止，约30s，水洗。