保健食品原料 螺旋藻 征求意见稿

2GB/TXXXX.2—XXXX保健食品原料螺旋藻本文件规定了保健食品用原料螺旋藻的质量要求，包括技术要求、试验方法、检验规则和标志、标签、包装、运输、贮存。本文件适用于以钝顶螺旋藻（Arthrospiraplatensis）或极大螺旋藻（Arthrospiramaxima）经人工培养、采收、清洗的藻泥，再经干燥及杀菌获得的干粉状保健食品用原料螺旋藻的生产、检验和销售。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.7食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定GB5009.5食品安全国家标准食品中蛋白质的测定GB5009.11食品安全国家标准食品中总砷及无机砷的测定GB5009.12食品安全国家标准食品中铅的测定GB5009.15食品安全国家标准食品中镉的测定GB5009.17食品安全国家标准食品中总汞及有机汞的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB7718食品安全国家标准预包装食品标签通则3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4技术要求GB/TXXXX.2—XXXX34.1鉴别取少量样品于水中，充分震荡搅拌使藻粉颗粒分散，显微镜视野中应呈分散、绿色的S形、L形、C形或螺旋形的藻丝体，不得有明显异物（螺旋藻显微鉴别参考图见附录C图C.1和图C.2）。4.2感官要求应符合表1的规定。表1感官要求4.3理化指标应符合表2的规定。表2理化指标4.4微生物指标应符合表3的规定。表3微生物指标金黄色葡萄球菌≤4采样a量为25gncmM514.5标志性成分指标应符合表4的规定。表4标志性成分指标藻蓝蛋白/%5试验方法5.1感官要求取适量样品，置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光下观察色泽和状态。嗅其气味，用温开水漱口，品其滋味。5.2蛋白质按GB5009.5规定的方法测定。5.3水分按GB5009.3中“第一法直接干燥法”测定。5.4总灰分按GB5009.4规定的方法测定。5.5铅（以Pb计）按GB5009.12规定的方法测定。5.6砷（以As计）按GB5009.11规定的方法测定。5.7汞（以Hg计）按GB5009.17规定的方法测定。5.8镉（以Cd计）按GB5009.15规定的方法测定。5.9菌落总数5按GB4789.2规定的方法测定。5.10霉菌和酵母按GB4789.15规定的方法测定。5.11大肠菌群按GB4789.3中“MPN计数法”测定。5.12沙门氏菌按GB4789.4规定的方法测定。5.13金黄色葡萄球菌按GB4789.10规定的方法测定。5.14副溶血性弧菌按GB4789.7规定的方法测定。按附录A中A.2规定的方法测定。5.16藻蓝蛋白按附录A中A.3规定的方法测定。6检验规则6.1组批同一批原料、相同生产工艺、连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批。6.2抽样6.2.1按表5的规定随机抽取样本。表5螺旋藻原料抽样表<5024>10066.2.2将抽取的样品平均分装2份置于两个洁净、干燥的容器中，密封，注明产品名称、批号、取样时间及地点、取样人姓名等，其中1份供检测用，另1份封存后保存以备复查。6.3出厂检验6.3.1产品出厂前，应按本文件规定逐批进行检验。检验符合本文件要求后方可出厂。GB/TXXXX.2—XXXX66.3.2出厂检验项目为：感官、β-胡萝卜素含量、藻蓝蛋白含量、蛋白质、水分、总灰分。6.4型式检验检验项目为本文件要求中规定的全部项目，一般情况下，型式检验半年进行一次。有下列情况之一时，亦应进行型式检验：a)原辅材料有较大变化时；b)更改关键工艺或设备时；c)新试制的产品或正常生产的产品停产三个月后，重新恢复生产时；d)出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时；e)生产场所发生变化时；f)国家行政主管机构提出型式检验要求时。6.5判定规则6.5.1所检验项目全部合格，判定该批次产品合格。6.5.2检验结果中有任何指标不符合本文件规定时，可自同批产品中重新加倍取样进行复检。若复检结果仍不符合本文件规定,则判定该批产品不合格。微生物指标不应复检。7标志、标签、包装、运输、贮存7.1标志7.1.1标签或说明书中应标示产品分类。7.1.2包装储运图示标志应符合GB/T191的要求。7.1标签7.1.1标签标示内容应符合GB7718的要求。7.2包装7.2.1包装应密封、牢固、防潮、不易破损。7.3运输7.3.1运输工具应清洁。7.3.2不得与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品混装、混运，应避免受潮、受压、曝晒。装卸时，应轻拿轻放，不得直接钩扎包装。7.4贮存7.4.1贮藏在遮荫、干燥、通风的库房内。7.4.2不得与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品混放。GB/TXXXX.2—XXXX1（规范性附录）螺旋藻标志性成分测定方法A.1一般规定本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GB/T6682中水的规格，所用试剂，在未注明其他规格时，均指分析纯。分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其它要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。A.2.1原理试样经皂化使胡萝卜素释放为游离态,用石油醚萃取二氯甲烷定容后,采用反相色谱法分离,外标法定量。A.2.2试剂和材料A.2.2.1氢氧化钾溶液：称取固体氢氧化钾500g，加入500mL水溶解，临用前配制。A.2.2.2无水硫酸钠（Na2SO4）。A.2.2.3抗坏血酸（C6H8O6）。A.2.2.4石油醚：沸程30℃~60℃。A.2.2.5甲醇（CH4O）：色谱纯。A.2.2.6乙腈（C2H3N）：色谱纯。A.2.2.7甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]：色谱纯。A.2.2.8二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。A.2.2.9无水乙醇（C2H6O）：优级纯。A.2.2.10碘溶液（I20.5mol/L。A.2.2.112,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（C15H24O，BHT）。A.2.2.12碘乙醇溶液（0.05mol/L）：吸取5mL碘溶液,用乙醇稀释至50mL，混匀。A.2.2.13β-胡萝卜素标准品（C40H56，CAS号：7235-40-7）：纯度≥95%。A.2.3仪器和设备A.2.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或性能相当者。A.2.3.2氮吹仪。A.2.3.3恒温振荡水浴箱：控温精度±1℃。GB/TXXXX.2—XXXX2A.2.3.4旋转蒸发器。A.2.3.5电子天平：感量1mg和0.1mg。A.2.4色谱参考条件色谱参考条件如下：a）色谱柱：C30柱（粒径5.0μm，4.6mm×150mm），或等效色谱柱；b）流动相：A相为甲醇乙腈水溶液（甲醇：乙腈：水=73.5:24.5:2，体积比）；B相为甲基叔丁基醚；梯度洗脱程序：见表A.1；c）柱温：30℃±1℃;d）流速：1.0mL/min；e）进样量：20µL；f）检测波长：450nm。表A.1梯度洗脱程序000A.2.5标准品溶液的制备A.2.5.1β-胡萝卜素标准储备液（500μg/mL准确称取β-胡萝卜素标准品（A.2.2.13）25mg（精确到0.1mg），加入0.125gBHT，用二氯甲烷溶解，转移至50mL棕色容量瓶中，加水定容并混匀。A.2.5.2β-胡萝卜素标准中间液（100μg/mL）：从β-胡萝卜素标准储备液（A.2.5.1）中准确移取10.0mL溶液于50mL棕色容量瓶中，加二氯甲烷定容并混匀。A.2.5.3β-胡萝卜素标准工作液：从β-胡萝卜素标准中间液（A.2.5.2）中分别准确移取0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6个100mL棕色容量瓶。用二氯甲烷定容至刻度，得到浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10μg/mL的系列标准工作液。A.2.5.4异构化β-胡萝卜素溶液：取10mLβ-胡萝卜素标准储备液（A.2.5.1）于烧杯中，加入20μL碘乙醇溶液，摇匀后于日光下或距离40W日光灯30cm处照射15min，用二氯甲烷稀释至50mL。摇匀后过0.45μm滤膜，待测。A.2.6试样溶液的制备A.2.6.1预处理GB/TXXXX.2—XXXX3精确称取1g~5g（精确至0.001g）螺旋藻粉，转移至250mL锥形瓶中，加入1g抗坏血酸、75mL无水乙醇，于60℃±1℃水浴振荡30min。A.2.6.2皂化加入25mL氢氧化钾溶液，盖上瓶塞。置于已预热至53℃±2℃恒温振荡水浴箱中，皂化30min。取出，静置，冷却到室温。A.2.6.3试样萃取将皂化液转入500mL分液漏斗中，加入100mL石油醚，轻轻摇动，排气，盖好瓶塞，室温下振荡，10min后静置分层，将水相转入另一分液漏斗中按上述方法进行第二次提取。合并有机相，用水洗至近中性。弃水相，有机相通过无水硫酸钠过滤脱水。滤液收入500mL蒸发瓶中，于旋转蒸发器上40℃±2℃减压浓缩，近干。用氮气吹干，用移液管准确加入5.0mL二氯甲烷，盖上瓶塞，充分溶解提取物。经0.45μm膜过滤后，弃出初始约1mL滤液后收集至进样瓶中，备用。A.2.7测定分别取β-胡萝卜素标准中间液（100μg/mL）和异构化β-胡萝卜素溶液,按照色谱条件注入高效液相色谱仪进行色谱分析。根据β-胡萝卜素标准中间液的色谱图确认全反式β-胡萝卜素的保留时间；对比β-胡萝卜素标准中间液和异构化β-胡萝卜素溶液色谱图中各峰面积变化，以及与全反式β-胡萝卜素的位置关系确认顺式β-胡萝卜素异构体的保留时间：全反式β-胡萝卜素前较大的色谱峰为13-顺式-β-胡萝卜素，紧邻全反式β-胡萝卜素后较大的色谱峰为9-顺式-β-胡萝卜素，13-素，另外可能还有其他较小的顺式结构色谱峰，色谱图见附录B图B.1。A.2.7.2全反式β-反胡萝卜素标准溶液色谱纯度测定取β-胡萝卜素标准工作液（3μg/mL按照色谱条件进行测定，重复6次。计算全反式β-胡萝卜素色谱峰的峰面积、全反式与A.2.7.1中各顺式结构的峰面积总和。将β-胡萝卜素混合标准工作液注入高效液相色谱仪中（色谱图见图B.1根据保留时间定性，测在相同色谱条件下，将待测液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，根据峰面积采用外标法定量。A.2.8结果计算标准溶液中全反式β-胡萝卜素色谱纯度（CP）按式（A.1）计算：CP=式中：CP——全反式β-胡萝卜素色谱纯度，单位为%；GB/TXXXX.2—XXXX4Iall-E——全反式阝-胡萝卜素色谱峰峰面积平均值，单位为峰面积(AU)；Isum——全反式阝-胡萝卜素及各顺式结构峰面积总和平均值，单位为峰面积(AU)。式中:RF——全反式阝-胡萝卜素响应因子，单位为峰面积毫升每微克(AU·mL/μg)；Iall-E——标准工作液中全反式阝-胡萝卜素色谱峰峰面积平均值，单位为峰面积(AU)；ρ——阝-胡萝卜素标准工作液标定浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；CP——同式（A.1）。式中:Xβ——试样中阝-胡萝卜素的含量，单位为微克每百克(μg/100g)；Aall-E——试样待测液中全反式阝-胡萝卜素峰面积，单位为峰面积(AU)；A9Z——试样待测液中9-顺式-阝-胡萝卜素的峰面积，单位为峰面积(AU)；A13Z——试样待测液中13-顺式-阝-胡萝卜素的峰面积，单位为峰面积(AU)；A15Z——试样待测液中15-顺式-阝-胡萝卜素的峰面积，单位为峰面积(AU)；AxZ——试样待测液中其他顺式阝-胡萝卜素的峰面积，单位为峰面积(AU)；V——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；RF——全反式阝-胡萝卜素响应因子，单位为峰面积毫升每微克(AU·mL/μg)；m——试样质量，单位为克(g)；100——单位换算系数。GB/TXXXX.2—XXXX5计算结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过其算术平均值的10%。A.3藻蓝蛋白A.3.1原理样品用磷酸盐缓冲液溶解,置冰箱中冷冻、融解，使色素蛋白析出，分离后的提取液用分光光度法测定。A.3.2试剂和材料A.3.2.1磷酸盐缓冲溶液：将0.1mol/L磷酸二氢钾溶液与0.1mol/L磷酸氢二钾溶液(45:55，体积比)混合，溶液pH值为7.0。A.3.2.2离心管（50mL）。A.3.3仪器和设备A.3.3.1分光光度计。A.3.3.2超声波振荡器。A.3.3.3离心机（3000r/min）。A.3.3.4低温冰箱（-20℃)。A.3.3.5电子天平：感量0.1mg。A.3.4分析步骤A.3.4.1试样溶液制备称取试样0.25g~0.5g（精确至0.1mg）。用磷酸盐缓冲溶液溶解，超声振荡5min，定容至250mL，摇匀。将溶液转入250mL广口塑料瓶，置于-20℃冰箱内冷冻12h（或放置过夜）。取出解冻，摇匀。A.3.4.2测定取部分溶液于离心管中，于3000r/min转速下离心15min，取上清液，置于1cm比色皿，在分光光度计上分别测定620nm、652nm、562