新教材高中生物选择性必修3课件：2 2 2 动物细胞融合技术与单克隆抗体(人教版)

第2课时

动物细胞融合技术与单克

隆抗体1.阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细

胞融合的方法。2.概述单克隆抗体的制备过程。学习目标一、动物细胞融合技术二、单克隆抗体及其应用网络构建课时对点练内容索引一、动物细胞融合技术1.概念：使

或

动物细胞结合形成

的技术。2.原理：

。教材梳理预习新知夯实基础3.诱导融合的方法PEG融合法

法

法电融合灭活病毒诱导两个多个一个细胞细胞膜的流动性4.意义：细胞融合技术突破了

的局限，使

成为可能。5.应用(1)成为研究细胞

、细胞

、肿瘤和培育

等的重要手段。(2)用于制造

。有性杂交远缘杂交遗传免疫生物新品种单克隆抗体(1)与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒(

)(2)灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构(

)(3)二倍体动物细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞(

)判断正误×√×探讨点动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较1.19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中，观察到多核细胞。如何解释这一现象？核心探讨突破重难强化素养提示病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。2.比较动物细胞融合技术和植物体细胞杂交技术(1)动物细胞融合和植物体细胞杂交技术的原理分别是什么？提示动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。(2)两者在方法上有什么异同？提示都可用聚乙二醇(PEG)融合法和电融合法诱导融合；但动物细胞还可用灭活病毒诱导法诱导细胞融合。(3)两者在最终结果上有什么不同？提示动物细胞融合最终得到的是杂交细胞，而植物体细胞杂交技术最终得到的是杂种植株。动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较核心归纳比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性步骤酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种细胞，再经植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合，形成杂交细胞方法聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2＋—高pH融合法、电融合法、离心法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法结果形成杂种植株形成杂交细胞，以生产细胞产品意义打破生殖隔离，实现远缘杂交育种突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能1.下列关于动物细胞融合的说法，不正确的是A.常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG融合法、灭活病毒诱导法、

电融合法、紫外线照射等B.动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的细

胞称为杂交细胞C.动物细胞融合就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程D.细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能典题应用及时反馈知识落实√解析常用于诱导动物细胞融合的方法有PEG融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，紫外线照射不是诱导动物细胞融合的方法，A错误。2.对比动物细胞融合和植物体细胞杂交技术，下列论述合理的是A.均可使用PEG、电融合或灭活病毒诱导细胞融合B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离C.两者都可以体现细胞的全能性D.在适宜的条件下，均可产生完整个体√解析灭活病毒是动物细胞融合特有的诱导因素，A错误；动物细胞融合和植物体细胞杂交技术都可以打破生殖隔离，B正确；植物体细胞杂交技术体现了细胞的全能性，动物细胞融合没有体现，C错误；目前，动物细胞融合技术不能产生完整个体，D错误。二、单克隆抗体及其应用教材梳理预习新知夯实基础1.传统抗体的获得(1)方法：向动物体内反复注射某种

，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需

。(2)缺陷：

、纯度低、

。2.单克隆抗体的制备(1)制备原理①B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外

(填“能”或“不能”)无限增殖。②骨髓瘤细胞特点：能大量增殖。抗原抗体产量低特异性差不能③杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能

，又能产生足够数量的

抗体。(2)制备过程大量增殖特定B淋能分泌所需杂交细胞杂交瘤巴细胞3.单克隆抗体的优点(1)能准确地识别

的细微差异。(2)与特定抗原发生

结合。(3)可以

制备。4.单克隆抗体的应用(1)作为

，如定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。(2)运载药物，如ADC。(3)治疗疾病。抗原特异性大量诊断试剂(1)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，得到的都是杂交瘤细胞(

)(2)单克隆抗体制备过程中两次筛选的目的相同(

)(3)ADC的抗体具靶向运输作用、药物具有治疗作用(

)判断正误××√探讨点单克隆抗体的制备根据单克隆抗体的制备过程，回答以下问题。1.给小鼠注射特定抗原的目的是什么？核心探讨突破重难强化素养提示目的是能从该小鼠的脾中得到可以产生特定抗体的B淋巴细胞。2.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经诱导融合后，培养基中共出现几种细胞？其中融合的细胞有几种？(如融合的话，只考虑两两融合)提示共有5种细胞；其中融合的细胞有3种。3.单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是什么？方法是什么？提示目的是筛选出杂交瘤细胞；方法是用选择培养基进行筛选。4.资料：(1)细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。(2)免疫的B淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但它不能分裂增殖，其本身也不能在体外长期存活。(3)鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但它能不断分裂增殖。如果它的D途径被阻断的话，它会因不能合成DNA而死。请根据上述资料提出筛选出杂交瘤细胞的方法？提示培养基中加入氨基蝶呤。5.单克隆抗体制备过程中，第二次筛选的目的是什么？方法是什么？其原理是什么？提示目的是筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞；方法是抗体检测；其原理是抗原—抗体的特异性结合。1.单克隆抗体制备的过程核心归纳2.单克隆抗体制备过程中两次筛选的比较比较项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种融合细胞，还有未融合的细胞等由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞筛选目的筛选出杂交瘤细胞筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞筛选方法用特定的选择培养基筛选；未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞3.如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述正确的是典题应用及时反馈知识落实A.①是从已免疫的小鼠脾脏中获得

的细胞毒性T细胞B.②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤

细胞的形成C.③同时具有脾脏细胞和小鼠骨髓

瘤细胞的特性D.④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞√解析①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的B淋巴细胞，A项错误；胰蛋白酶可使组织细胞分散为单个细胞，B项错误；③为杂交细胞，若是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交细胞，才同时具有B淋巴细胞(可产生抗体)和骨髓瘤细胞(可无限增殖)的特性，C项错误。4.(2021·北京延庆区模拟)抗体—药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素与单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，过程如图所示。下列表述正确的是A.ADC可通过主动运输进入肿瘤细胞B.抗体进入细胞后激活溶酶体酶，导致细胞凋亡C.单克隆抗体携带细胞毒素与肿瘤细胞特异性结合D.肿瘤细胞凋亡是细胞主动死亡的过程，所以不会产生新的蛋白质√解析ADC可通过胞吞的方式进入肿瘤细胞，A错误；据图分析可知，抗体进入细胞后被溶酶体裂解，释放的药物导致细胞凋亡，B错误；单克隆抗体携带细胞毒素与肿瘤细胞膜上的特异性受体结合，C正确；肿瘤细胞凋亡是细胞主动死亡的过程，细胞凋亡过程中基因进行选择性表达，因此会产生新的蛋白质，D错误。网络构建课时对点练题组一动物细胞融合技术1.与植物体细胞杂交相比，动物细胞融合的原理及其特有的诱导方法分别是A.细胞膜的流动性、离心B.细胞膜的流动性、灭活病毒诱导法C.细胞的全能性、电融合法D.细胞的全能性、灭活病毒诱导法对点训练123456789101112131415161718√解析植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性、植物细胞的全能性，动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性；动物细胞融合常用的方法有PEG融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等，其中灭活病毒诱导法是其特有的诱导方法，而PEG融合法、电融合法均可用于诱导植物体细胞杂交。1234567891011121314151617182.基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞A.AAaa B.AaBb C.Aabb D.BBbb123456789101112131516171418√解析基因型为Aa与基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的病毒处理后，会有以下情况出现：Aa和Aa融合形成的细胞是AAaa，Bb和Bb融合形成的细胞是BBbb，Aa和Bb融合形成的细胞是AaBb。3.下列关于动物细胞融合与植物体细胞杂交技术的说法正确的是A.基本原理相同B.诱导细胞融合的方法相同C.细胞融合前的处理过程相同D.融合后都需要进行筛选1234567891011121315161714√18解析植物体细胞杂交技术的原理为细胞膜的流动性、植物细胞的全能性，而动物细胞融合技术利用的是细胞膜的流动性；动物细胞融合常用灭活病毒诱导法，而植物体细胞杂交不能；动物细胞融合前需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶等使细胞分散开，植物体细胞杂交常用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁；诱导融合后会形成多种融合细胞，还有未融合细胞，因此都需要进行筛选。123456789101112131516171418题组二单克隆抗体及其应用4.下面是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称分别为1234567891011121315161714A.抗体、T淋巴细胞 B.抗原、T淋巴细胞C.抗体、B淋巴细胞 D.抗原、B淋巴细胞√18解析单克隆抗体是由骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合而成的杂交瘤细胞产生的，其中B淋巴细胞必须首先经过抗原刺激后才能成为具有分泌抗体功能的细胞。1234567891011121315161714185.运用细胞工程技术获得单克隆抗体时，下列操作不必要的是A.对小动物注射抗原B.融合并筛选杂交瘤细胞C.培养杂交瘤细胞D.将胰蛋白酶注入小鼠腹腔123456789101112131516171418√解析胰蛋白酶在动物细胞培养时用到，是加到培养基中用于分离细胞的。6.关于应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤如下，其中对单克隆抗体制备的相关叙述不正确的是①将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞②从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞

③利用促细胞融合因子使两种细胞发生融合④将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中培养⑤筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞⑥从腹水中提取抗体A.实验顺序应当是①②③⑤④⑥B.④过程中产生多个杂交瘤细胞的过程也属于克隆C.③过程中获得的细胞均可无限增殖D.③到⑤过程中通常要经过两次筛选123456789101112131516171418√解析诱导动物细胞融合后，B淋巴细胞自身融合的细胞不能无限增殖。7.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是①B淋巴细胞②骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.①②③④ B.①②③⑤C.②④⑤ D.②③⑤123456789101112131516171418√8.(2021·河南西华一高高二下期中)下图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程，下列有关叙述不正确的是A.图中实验小鼠注射的甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原B.利用PEG融合法、灭活的病毒诱导法和电融合法等均可诱导细胞融合

获得乙C.用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不

能生长D.丙需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选后可获得大量能分泌

所需抗体的丁123456789101112131516171418√解析选择培养基只能让特定的符合条件的细胞存活下来，在题目给定的选择培养基上，只有杂交瘤细胞才能够存活。1234567891011121315161714189.单克隆抗体制备过程中所用的骨髓瘤细胞是一种基因缺陷型细胞，其合成核酸的途径能被氨基嘌呤阻断。现将从预先注射了某种抗原的小鼠脾脏中获得的B淋巴细胞与上述骨髓瘤细胞混合，加入PEG促融后，再加入含氨基嘌呤的培养液。若将这些混合物分装于细胞培养板的小孔中培养(如图所示)，则小孔中的培养物不可能出现的结果是123456789101112131516171418A.细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检测呈阴性B.细胞分裂繁殖，产生抗体，专一性抗体检测呈阳性C.没有活细胞，产生抗体D.没有活细胞，不产生抗体√解析单克隆抗体制备过程中与骨髓瘤细胞发生融合的B淋巴细胞种类很多，有的能够产生所需抗体，有的不能；只有活细胞才能产生抗体。12345678910111213151617141810.甘草酸是中药甘草中的主要活性成分。为了快速检测甘草酸，科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图。下列相关叙述正确的是123456789101112131516171418A.过程①注射相应抗原后应立即从小鼠脾脏中提取细胞甲B.过程②诱导细胞融合，利用了细胞膜的选择透过性C.过程③④的筛选方法相同，细胞丙、丁的遗传物质相同D.过程⑤无论在体内还是体外进行，细胞丁都可大量增殖√解析过程①注射相应抗原后，需要机体进行免疫，使B淋巴细胞增殖分化产生具有免疫能力的效应B细胞，才可以从小鼠脾脏中提取细胞甲，A错误；123456789101112131516171418过程②诱导细胞融合，利用了细胞膜的流动性，B错误；过程③是用选择性培养基筛选获得杂交瘤细胞，过程④是用抗体检测和克隆培养得到能产生特定抗体的杂交瘤细胞，C错误；杂交瘤细胞既能无限增殖又能产生特异性抗体，过程⑤无论在体内还是体外，细胞丁都可大量增殖，D正确。11.将携带抗P基因、不带抗Q基因的鼠细胞去除细胞核后，与携带抗Q基因、不带抗P基因的鼠细胞融合，获得的胞质杂种细胞具有P、Q两种抗性。该实验证明了A.抗Q基因位于细胞核中B.该胞质杂种细胞具有无限增殖能力C.抗P基因位于细胞质中D.该胞质杂种细胞具有全能性综合强化123456789101112131516171418√解析“将携带抗P基因、不带抗Q基因的鼠细胞去除细胞核后”，该细胞只留下细胞质，但胞质杂种细胞具有P、Q两种抗性，说明抗P基因位于细胞质中，抗Q基因既可能位于细胞核中，也可能位于细胞质中。12345678910111213151617141812.(2021·山东枣庄八中高二月考)如图，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶。制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选特定的杂交瘤细胞。下列关于筛选原理的叙述，正确的是A.免疫的B淋巴细胞及其相互融合细胞因

全合成途径被A阻断，在HAT培养基上

不能增殖B.骨髓瘤细胞及其相互融合细胞因无法进

行上述两个途径，而在HAT培养基上不能增殖C.杂交瘤细胞因为可进行上述两个途径，能在HAT培养基上大量增殖D.HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，既能大量增殖又能产生较高纯度的

目标抗体123456789101112131516171418√解析免疫的B淋巴细胞及其互相融合细胞是正常细胞，细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，但因高度分化而不能增殖，A错误；骨髓瘤细胞及其互相融合细胞因骨髓瘤细胞中缺乏转化酶，无法进行上述两个途径而在HAT培养基上不能增殖，B正确；杂交瘤细胞因为可以进行补救合成途径，能够在HAT培养基上大量增殖，C错误；HAT培养基上筛选出的杂交瘤细胞能大量增殖，但并不都能产生高纯度的目标抗体，需要进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，D错误。12345678910111213151617141813.下面为制备单克隆抗体过程示意图，下列相关叙述错误的是1234567891011121315161714A.④中的筛选是为了获得能产生多种抗体的杂交瘤细胞B.②中培养基应加入选择性抑制骨髓瘤细胞DNA分子复制的物质C.上图中有一处明显错误D.⑤可以无限增殖18√14.(2021·山东潍坊模拟)CD20是一种广泛存在于正常或恶性B淋巴细胞表面的标志性抗原，该抗原在其他正常组织细胞中不表达。1997年，第一个针对B淋巴瘤治疗的人鼠嵌合型单克隆抗体——利妥昔单抗上市，该抗体通过诱导细胞凋亡等方式来杀死肿瘤细胞；2002年，鼠源单克隆抗体——替伊莫单抗上市，该抗体除了促进细胞凋亡外，还结合了相关的放射性药物，进一步增强了对恶性B淋巴细胞的杀伤效果；2017年，人源单克隆抗体——奥美珠单抗上市，该抗体免疫原性(自身作为异物引起免疫应答的性能)更低，治疗效果更明显。分析以上材料，下列叙述正确的是A.利妥昔单抗只对恶性B淋巴细胞发挥作用B.替伊莫单抗结合的放射性药物能与CD20特异性结合C.鼠源抗体有可能作为抗原被人体免疫系统攻击D.奥美珠单抗可以治疗各种肿瘤123456789101112131516171418√12345678910111213151617解析利妥昔单抗对正常或恶性B淋巴细胞均起作用，A错误；替伊莫单抗能与CD20特异性结合，放射性药物不能与CD20特异性结合，B错误；鼠源抗体有可能作为抗原，诱发机体的免疫反应，被人体免疫系统攻击，C正确；奥美珠单抗只能用于治疗恶性B淋巴细胞引起的肿瘤，不能用于治疗其他肿瘤，D错误。141815.下列有关单克隆抗体制备的叙述，不正确的是A.小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40，其B淋巴细胞的染色体数为40，融

合后形成的杂交瘤细胞DNA分子数为80B.在单克隆抗体的制备过程中，至少涉及两次筛选C.单克隆抗体的制备需要用到动物细胞培养、动物细胞融合等技术D.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经细胞融合后有三种融合细胞类型(若仅考

虑细胞两两融合的情况)123456789101112131516171418√解析小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40，其B淋巴细胞的染色体数为40，融合后形成的杂交瘤细胞染色体数为80，由于细胞质中也有DNA，所以DNA数大于80，A错误；B淋巴细胞与骨髓瘤细胞经细胞融合后有三种两两融合的细胞类型，即杂交瘤细胞、B淋巴细胞—B淋巴细胞、骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞，D正确。12345678910111213151617141816.将人、鼠细胞悬液混合并诱导细胞融合(只考虑细胞两两融合)后，在HAT培养基上，同时含有T、H基因(独立遗传)的细胞才能存活和增殖。增殖过程中，细胞内人染色体随机丢失，只残留一条或几条。对处于分裂中期的细胞进行镜检，结果如表所示。已知人、鼠细胞的基因型分别为ttHH和TThh，下列叙述正确的是123456789101112131516171418融合细胞细胞样编号残留人染色体①17②10、17③17、XA.在HAT培养基上，融合细胞均能存活和增殖B.可以确定①的基因组成为TTTTHHhhhhC.可以确定①②③的相关基因组成相同D.可以将T(t)基因定位于人第17号染色体123456789101112131516171418√融合细胞细胞样编号残留人染色体①17②10、17③17、X解析在HAT培养基上，同时含有T、H基因(独立遗传)的细胞才能存活和增殖，融合细胞中若携带有H基因或T基因的染色体丢失，该融合细胞就不能在HAT培养基上存活和增殖，A错误；①含有鼠的全部基因及人的第17号染色体上的基因，②含有鼠的全部基因及人的第10号和第17号染色体上的基因，③含有鼠的全部基因及人的第17号和X染色体上的基因，在细胞融合过程中鼠的染色体不丢失，①②③都含有鼠的全部基因，即一定都含有TThh，而①只含有人的第17号染色体上的基因，且可以在HAT培养基上存活，所以人的第17号染色体上一定携带H基因，故可以将H(h)基因定位于人第17号染色体，处于分裂中期的细胞由于DNA在间期已完成复制，基因已加倍，故①的基因组成为TTTTHHhhhh，B正确，C、D错误。12345678910111213151617141817.下图表示用生物工程制备人抗A抗体的过程。请回答下列问题：123456789101112131516171418(1)人的红细胞膜表面具有识别作用的凝集原，其化学本质是_______；从免疫学角度看，这种凝集原是_____。123456789101112131516171418糖蛋白抗原解析人红细胞膜表面的凝集原具有特异性，化学本质是糖蛋白，从免疫学角度看，它是抗原。(2)图中细胞1是小鼠体内注入人A型血红细胞后获得的________________________细胞，这种细胞具有___________________________________________的特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞2是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，这种细胞在体外培养时能_________，但不会产生抗体。123456789101112131516171418B淋巴(或免疫后的B淋巴)产生单一的抗A抗体(或产生单一的特异性抗体)大量增殖(3)为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的细胞3，这种细胞称为___________。123456789101112131516171418杂交瘤细胞解析免疫后的B淋巴细胞能分泌特异性抗体，小鼠骨髓瘤细胞则可在体外培养条件下大量增殖，在选择培养基中，只有免疫后的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞(细胞3)才同时具备分泌抗体的功能和保持细胞大量增殖两种特征。(4)过程①的主要目的是_____________________________________。通过过程②或③的培养方法能产生大量___________抗体。123456789101112131516171418筛选出能产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞抗A单克隆解析过程①的主要目的是筛选出能产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞，过程②或③分别是体内培养和体外培养，以产生大量抗A单克隆抗体。18.(2021·山东临沂月考)神经纤毛蛋白－1(NRP－1)是一种多功能糖蛋白，在多种肿瘤组织中容易大量合成，可与血管内皮生长因子结合促进肿瘤血管的形成，使肿瘤体积增大。研究人员利用动物细胞工程技术制备抗NRP－1的单克隆抗体(NRP－1mAb)，并开展该药物对人乳腺癌进行靶向治疗的研究。请分析回答下列问题：(1)取人乳腺癌组织切块，用_______________________进行分散处理后，利用_____________技术培养获得人乳腺癌细胞(M