2025年高考生物三轮复习之细胞工程

第48页（共48页）2025年高考生物三轮复习之细胞工程一．选择题（共15小题）1．（2025•苏州校级模拟）科学家培养神经管组织干细胞（NSC）时发现有新的神经元形成。下列叙述错误的是（）A．NSC需放置于95%空气和5%二氧化碳的恒温培养箱中培养 B．定期更换培养液的目的是使NSC处于无菌环境，此外还需调节pH和温度 C．利用96孔板筛选神经元时，尽量保证每孔中只接种单个细胞 D．一般认为NSC具有组织特异性，只能分化成特定的组织或细胞2．（2025•榆林模拟）下列有关体外受精和胚胎移植培育动物过程的相关叙述，正确的是（）A．体外受精过程涉及体细胞核移植、动物细胞培养等过程 B．胚胎移植之前，可取囊胚期的内细胞团细胞进行性别鉴定 C．胚胎移植中受体对来自供体的胚胎基本上不发生免疫排斥反应 D．将小鼠桑葚胚分割成两等份获得同卵双胎的过程属于有性生殖3．（2025•福州模拟）第三代试管婴儿技术也称为胚胎植入前遗传学检测（PGT），其原理是在胚胎植入子宫前，进行遗传学检测，挑选出健康的胚胎进行移植。下列叙述错误的是（）A．获能的精子能与刚采集到的卵母细胞受精 B．PGT可将胚胎培养至含内细胞团的囊胚期 C．胚胎移植前可取滋养层细胞做遗传学检测 D．移植后健康胚胎的发育受母体激素的影响4．（2025•重庆模拟）在制备单克隆抗体的过程中HAT选择培养基可以筛选出融合成功的杂交瘤细胞，一种杂交瘤细胞只能产一种抗体。科学家通过动物细胞融合技术，将两株不同的杂交瘤细胞（A和B）融合形成双杂交瘤细胞AB。双杂交瘤细胞能够悬浮在培养基中生长繁殖，可以产生双特异性抗体AB。据图分析，下列说法正确的是（）A．杂交瘤细胞A、B混合并诱导融合后，利用HAT选择培养基筛选出双杂交瘤细胞AB B．双杂交瘤细胞同时识别α、β抗原后，才能产生双特异性抗体 C．对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，不需要使用蛋白酶使之分散 D．体外培养双克隆抗体需要定期更换培养液以创设无菌环境5．（2025•福州模拟）小分子物质CHIR可激活Wnt信号通路。较小剂量的CHIR仅激活部分Wnt通路，可导致多能干细胞被诱导为成熟的胰岛B细胞；当Wnt通路被完全激活时，多能干细胞则形成中胚层细胞。下列叙述正确的是（）A．多能干细胞和胚胎干细胞都能分化成各种体细胞 B．CHIR剂量的大小会影响多能干细胞分化的终点 C．CHIR能诱导多能干细胞分化是因为细胞发生了基因突变 D．诱导获得的成熟胰岛B细胞可直接移植给1型糖尿病患者6．（2025•盐城二模）体外培养发现绝大多数的克隆胚胎在囊胚阶段出现发育阻滞，用Wnt信号通路抑制剂处理后，出生率可大幅提高。下列叙述正确的是（）A．胚胎发育早期依次经历卵裂、囊胚和桑甚胚阶段 B．胚胎发育过程中部分细胞凋亡是基因选择性表达的结果 C．Wnt信号通路持续异常激活可促进克隆胚胎发育过程 D．动物克隆需利用动物细胞培养、同期发情和胚胎移植等技术7．（2025•长沙校级一模）为培育具有市场竞争力的无籽柑橘，研究者设计如下流程。相关叙述错误的是（）A．过程①常使用纤维素酶和果胶酶 B．经过②获得的融合细胞即为所需杂种细胞 C．过程③的培养基中需要添加生长素和细胞分裂素 D．获得的植株C染色体组成与植株A、柑橘B均不相同8．（2025•辽阳模拟）无毒化栽培是目前生产上防治马铃薯病毒病害最有效的方法，脱毒技术是生产无毒苗的关键技术。茎尖超低温疗法是一种马铃薯脱毒的方法。以被马铃薯卷叶病毒（PLRV）感染的马铃薯试管苗为实验材料，选择不同大小的茎尖进行超低温处理、再生培养，检测再生植株的病毒保存率，结果如表所示。下列说法错误的是（）病毒感染类型茎尖大小/mm病毒保存率/%PLRV0.501.535A．再生培养需要用到植物组织培养技术 B．再生培养时，诱导生根、生芽的培养基的激素含量有差异 C．再生培养时，脱分化和再分化过程一般都需要光照 D．与0.5mm相比，用1.5mm的茎尖进行超低温处理脱毒的效果较差9．（2025•辽阳模拟）最新调查结果显示，我国野生大熊猫种群数量约1864只。由于环境变化和人类活动的影响，现有野生大熊猫栖息地碎片化，我国采取了多种措施对大熊猫实施保护。科研人员设计如图所示的繁殖过程繁育、保护大熊猫。下列相关说法错误的是（）A．激素处理的目的是使供体超数排卵 B．克隆熊猫是无性繁殖，试管熊猫是有性繁殖 C．必须将M中细胞的细胞核取出后注入去核的卵细胞中完成核移植 D．胚胎移植前可通过取样滋养层细胞来鉴定性别10．（2025•广州一模）珍稀中草药蛇足石杉的有效成分为石杉碱甲，但含量较低。研究人员发现共生真菌可与植物细胞共用酶系统，将蛇足石杉细胞与真菌进行共生培养可促进石杉碱甲的生成。图甲、图乙分别表示共生培养过程中蛇足石杉细胞数量及石杉碱甲含量随时间的变化。下列叙述错误的是（）A．利用植物细胞培养生产石杉碱甲需将外植体培育到愈伤组织阶段 B．将蛇足石杉细胞与真菌共生培养时需要适当添加植物激素 C．图甲实验结果可以确定第4天为传代培养和收集代谢物的最佳时间 D．图乙实验结果不足以证明共生真菌利用了蛇足石杉细胞的酶系统11．（2025•萍乡模拟）鲫鱼是一种淡水湖泊中的常见经济鱼类，其早期胚胎发育经历受精卵→卵裂期→囊胚期→原肠胚期→神经胚期。下列相关叙述正确的是（）A．卵裂期卵黄不断减少，胚胎从外界吸收的营养不断增加 B．原肠胚期开始胚层分化，其中外胚层来自囊胚的滋养层细胞 C．体外受精得到的鲫鱼受精卵在胚胎移植时不需添加免疫抑制剂 D．鲫鱼与人具有相似的胚胎发育阶段，为共同由来学说提供了证据12．（2025•抚顺模拟）角膜是覆盖眼睛的透明组织层，角膜干细胞通过增殖分化产生角膜上皮细胞来取代凋亡的细胞，并修复较小的角膜损伤。相关研究显示，短期睡眠不足增加了角膜干细胞的增殖分化速度，长期睡眠不足会造成角膜严重受损，如角膜变薄。下列相关叙述正确的是（）A．角膜干细胞是成体干细胞，分裂能力强，具有组织特异性 B．诱导多能干细胞来源于胚胎，其全能性高，用于治疗角膜损伤相关疾病时，一般不会发生免疫排斥反应 C．用角膜干细胞体外培养角膜上皮细胞，需定期更换培养基以保证无菌环境 D．短期睡眠不足状态下，大多数的角膜干细胞处于分裂间期，细胞周期变长13．（2025•石家庄模拟）原生质体比正常植物细胞更易接受外源DNA，其制备过程主要包括取材→剪碎→酶解。下列叙述错误的是（）A．细胞壁可能会阻止外源DNA进入细胞 B．取材后需用酒精和次氯酸钠对材料灭菌 C．剪碎的目的是使酶与细胞充分接触 D．可用台盼蓝染液来鉴定原生质体活性14．（2025•湖北模拟）细胞悬浮培养是将细胞接种于液体培养基中并保持良好分散状态的培养方式，细胞悬浮培养常在生物反应器（如发酵罐等）中进行。下列叙述错误的是（）A．悬浮培养可以增加细胞与培养液的接触，促进营养物质的吸收 B．生物反应器能精确地控制温度、pH、溶解氧等培养条件 C．植物细胞培养用的是固体培养基，不能进行悬浮培养 D．在接种细胞之前，生物反应器必须经过严格地灭菌15．（2025•湖北模拟）胚胎移植是医学和农业生产上应用较多的胚胎工程技术。下列生物技术需用到胚胎移植的是（）①体细胞核移植②胚胎分割③培育转基因动物④动物细胞培养⑤动物细胞融合A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．②③⑤二．解答题（共5小题）16．（2025•漳州模拟）坦布苏病毒（TMUV，单链RNA病毒）可引起肉鸭严重的神经症状和蛋鸭产蛋量的急剧下降，研究者将绿色荧光蛋白基因（EGFP）插入坦布苏病毒的基因组中构建报告病毒，其构建的部分流程如图甲所示。回答下列问题：（1）利用PCR技术获得EGFP﹣2A片段，预变性是在98℃下进行，变性则是在95℃下进行，进行该操作的目的是。PCR过程中复性的结果是。（2）为了，PCR设计的引物F和2A﹣R的序列要能分别与①、②互补配对。2A基因的表达产物2A蛋白可以通过“核糖体跳跃”断开位于2A肽尾端甘氨酸和脯氨酸之间的肽键，推测在重组DNA中引入2A的目的是。（3）科研人员通过基因工程获取坦布苏病毒的prM蛋白（153个氨基酸构成）用于制备单克隆抗体。为了鉴定单克隆抗体识别prM蛋白的具体区域，将prM蛋白逐步截短，分别与纯化的单克隆抗体反应，实验结果如图乙（“aa”表示氨基酸，“+”表示有反应，“﹣”表示无反应）。①制备单克隆抗体时，需用纯化的prM蛋白对小鼠进行免疫，其目的是获得细胞，并将该细胞与骨髓瘤细胞融合，对经特定的选择培养基筛选得到的杂交瘤细胞进行，多次筛选后可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，再将其注射到小鼠的腹腔内增殖并产生抗体。②根据图示实验结果分析，该单克隆抗体识别prM蛋白的区域大概包含（填“10”“15”或“20”）个氨基酸残基。17．（2025•榆林模拟）脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的一种特有成分。CDI4蛋白是LPS的受体，能识别并结合LPS，诱发炎症反应。为制备抗CD14蛋白的单克隆抗体，研究人员通过基因工程构建了含有CD14蛋白基因的重组表达载体，如图1所示。制备抗CD14蛋白的单克隆抗体的过程如图2所示。回答下列问题：（1）用PCR技术对CD14蛋白基因进行扩增时，每次循环可分为三步，若循环五次，理论上至少需要的引物是个。（2）CD14蛋白基因插入载体会形成正向连接和反向连接的两种重组载体，再用XhoⅠ和SalⅠ酶切对连接方向进行鉴定。若重组载体能被再次切开，则说明CD14（填“正向”或“反向”）接入载体，判断的理由是。（3）从工程菌中提取到的CD14蛋白通过①注射给小鼠，取小鼠脾组织用酶处理，制成细胞悬液培养，处理后离心收集获得小鼠B淋巴细胞，与SP2/0细胞（一种骨髓瘤细胞）进行融合，促进二者融合常用的方法是（写出1种即可）。用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行培养。（4）图2中，通过过程⑥从小鼠腹腔中提取的抗CD14蛋白单克隆抗体可减轻革兰氏阴性细菌入侵导致的炎症反应，其原理是。18．（2025•黔南州模拟）植物在遭受生物或非生物胁迫时，往往会积累次生代谢产物来应对外界伤害。紫杉醇是存在于红豆杉属植物体内的一种次生代谢产物，具有高抗癌活性。研究发现从红豆杉愈伤组织细胞就可以提取紫杉醇。回答下列问题：（1）在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中，最好选择红豆杉的（幼嫩茎段/成熟茎段）作为外植体进行培养，原因是。（2）在一定激素和营养等条件的诱导下，外植体细胞会失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，这个转变过程称为。未分化的细胞进而形成愈伤组织，将愈伤组织悬浮培养可获得紫杉醇。（3）研究人员在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中发现紫杉醇的产量很低。结合题干信息，提出一种提高紫杉醇产量的措施。目前利用基因工程构建稳定高产紫杉醇的工程菌研究取得很大进展，写出利用紫杉醇合成酶基因构建基因表达载体的思路。19．（2025•河南模拟）我国科研人员利用多种现代生物技术，在猪的体内培育出了一个“人﹣猪嵌合中期肾”，且维持到胚胎第28天（实验过程如图1所示），该研究实现了世界首例人源化肾脏异种再生的壮举。回答下列问题。（1）据图1分析，在“人源化中肾”的培养过程中，运用了等动物细胞工程的技术（答出3点即可）。（2）过程②常用的去核方法为，所谓的“核”实际上是。过程③中，获得单细胞悬液时，猪胚胎剪碎后需用处理。（3）过程④运用基因编辑技术（见图2，Cas9蛋白在向导RNA引导下，切割目标DNA双链）敲除成纤维细胞中的猪肾发育的关键基因SIX1，可以为后续人iPS细胞的生长和分化提供更合适的生存环境。下列对于该过程的分析，正确的有。A．Cas9蛋白由相关基因指导在核糖体上合成，向导RNA可在逆转录酶催化下合成B．Cas9蛋白识别并切割SIX1基因特定位点的磷酸二酯键，其作用方式与限制酶相同C．向导RNA的部分序列是根据SIX1基因设计的，其双链区遵循碱基互补配对原则D．敲除SIX1基因的猪胚胎可避免猪细胞与人iPS细胞竞争肾脏发育的环境（4）过程⑧中，选用iPS细胞作为肾脏供体细胞的原因是。在早期胚胎阶段，猪胚胎的细胞尚未完全分化成各种类型的细胞和组织，细胞之间的连接较松散，这使得导入的人iPS细胞较容易在猪胚胎中整合，胚胎的可塑性也较强，据此判断在构建嵌合胚胎过程中，可在猪胚胎发育至（填“桑葚胚”或“囊胚”）期注射人源供体细胞。合适的培养基是提高iPS细胞嵌合能力的关键，下列有关叙述错误的是。A．培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等营养物质B．为保证体外培养细胞处于无菌、无毒的环境，除无菌操作外，培养液还需定期更换C．动物细胞应放入含5%CO2培养箱中培养，CO2的主要作用是刺激细胞呼吸D．维持动物细胞体外生存必须有适宜的温度、pH和渗透压等环境条件20．（2025•河南模拟）肿瘤免疫治疗是指通过调动机体免疫系统功能，增强机体抗肿瘤免疫应答，从而清除和杀灭肿瘤细胞的一种治疗方法。肿瘤治疗性mRNA疫苗作为肿瘤免疫治疗的重要组成部分，拥有广阔的应用前景，其作用机制如图所示。回答下列问题。（1）据图分析，树突状细胞发挥的作用包括。（2）结合所学知识分析，B细胞的活化需要两个信号的刺激和的作用，活化后的B细胞增殖、分化为，产生的抗体与肿瘤细胞结合；活化的细胞毒性T细胞分泌穿孔素、颗粒酶诱导肿瘤细胞（填“凋亡”或“坏死”）；最终肿瘤细胞被清除。（3）晚期癌症患者体内免疫微环境被高度抑制，单一mRNA疫苗治疗效果不尽如人意，但与单抗药物联用可显著增强抗肿瘤免疫应答。在制备单克隆抗体过程中，需先使用筛选出杂交瘤细胞，然后利用的原理，对体外培养的杂交瘤细胞再次进行筛选，获得。

2025年高考生物三轮复习之细胞工程参考答案与试题解析一．选择题（共15小题）题号1234567891011答案BCACBBBCCCD题号12131415答案ABCA一．选择题（共15小题）1．（2025•苏州校级模拟）科学家培养神经管组织干细胞（NSC）时发现有新的神经元形成。下列叙述错误的是（）A．NSC需放置于95%空气和5%二氧化碳的恒温培养箱中培养 B．定期更换培养液的目的是使NSC处于无菌环境，此外还需调节pH和温度 C．利用96孔板筛选神经元时，尽量保证每孔中只接种单个细胞 D．一般认为NSC具有组织特异性，只能分化成特定的组织或细胞【考点】动物细胞培养的条件与过程．【专题】正推法；克隆技术；解决问题能力．【答案】B【分析】1、一般来说，动物细胞培养需要满足的条件有：营养；无菌、无毒的环境；适宜的温度、pH和渗透压；气体环境。2、干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞。成体干细胞是成体组织或器官内的干细胞。一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。【解答】解：A、动物细胞培养的气体环境是其置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的恒温培养箱中进行培养，A正确；B、培养过程中需要定期更换培养液，以便清除代谢产物及补充新的营养物质，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，此外还需调节pH和温度，B错误；C、利用96孔板培养和筛选神经元时，每一个孔中尽量保证只接种单个细胞，以便让单个细胞进行增殖，C正确；D、神经管组织干细胞属于成体干细胞，只能分化成特定的组织或细胞，因此具有组织特异性，D正确；故选：B。【点评】本题考查动物细胞培养的相关知识，意在考查学生的识记和理解能力，难度不大。2．（2025•榆林模拟）下列有关体外受精和胚胎移植培育动物过程的相关叙述，正确的是（）A．体外受精过程涉及体细胞核移植、动物细胞培养等过程 B．胚胎移植之前，可取囊胚期的内细胞团细胞进行性别鉴定 C．胚胎移植中受体对来自供体的胚胎基本上不发生免疫排斥反应 D．将小鼠桑葚胚分割成两等份获得同卵双胎的过程属于有性生殖【考点】体外受精和胚胎移植；胚胎分割技术；胚胎的早期发育．【专题】正推法；胚胎工程；解决问题能力．【答案】C【分析】1、哺乳动物的体外受精主要包括卵母细胞的采集、精子的获取和受精等几个主要步骤；2、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此，胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一；3、刚排出的精子不能立即与卵子受精，必须在雌性动物生殖道发生相应的生理变化后，才能获得受精能力，这一生理现象称为“精子获能”。使精子获能的方法有直接利用雌性动物的生殖道使精子获能；将精子培养在人工配制的获能液中使其获能等。获能液的成分因动物种类不同而有所差异，常见的有效成分有肝素、Ca2+载体等；4、进行胚胎移植前对供体、受体进行同期发情操作，保证其生理状态相同，因此胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下转移。【解答】解：A、体外受精主要涉及精子的采集与获能、卵母细胞的采集和培养以及受精等环节，没有涉及体细胞核移植，A错误；B、胚胎移植之前，可取囊胚期的滋养层细胞进行性别鉴定，而不是内细胞团细胞，内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，若取内细胞团细胞进行性别鉴定会影响胚胎发育，B错误；C、胚胎移植中受体对来自供体的胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能，C正确；D、胚胎分割就是将小鼠桑葚胚分割成两等份获得同卵双胎的过程，由于该过程没有经过两性生殖细胞的结合，因此属于无性生殖，D错误。故选：C。【点评】本题考查体外受精和胚胎移植的相关知识，要求考生识记体外受精的过程；识记胚胎移植的基本程序，掌握胚胎移植的生理学基础，能结合所学的知识准确判断各选项。3．（2025•福州模拟）第三代试管婴儿技术也称为胚胎植入前遗传学检测（PGT），其原理是在胚胎植入子宫前，进行遗传学检测，挑选出健康的胚胎进行移植。下列叙述错误的是（）A．获能的精子能与刚采集到的卵母细胞受精 B．PGT可将胚胎培养至含内细胞团的囊胚期 C．胚胎移植前可取滋养层细胞做遗传学检测 D．移植后健康胚胎的发育受母体激素的影响【考点】体外受精和胚胎移植．【专题】正推法；胚胎工程；理解能力．【答案】A【分析】胚胎工程中，采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。胚胎植入前遗传学诊断，要在囊胚期，取样滋养层细胞，提取DNA，然后常用SRY﹣PCR法进行性别鉴定。也可以培养滋养层细胞，制片观察染色体的形态和数目。【解答】解：A、刚采集到的卵母细胞不能直接参与受精，需培养到MⅡ期，A错误；BC、胚胎植入前遗传学检测（PGT），可将胚胎培养至含内细胞团的囊胚期，取滋养层细胞做遗传学检测，BC正确；D、移植后健康胚胎的发育受母体激素的影响，故需要对受体进行同期发情处理，D正确。故选：A。【点评】本题以试管婴儿技术为背景，考查人类遗传病及胚胎工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力。4．（2025•重庆模拟）在制备单克隆抗体的过程中HAT选择培养基可以筛选出融合成功的杂交瘤细胞，一种杂交瘤细胞只能产一种抗体。科学家通过动物细胞融合技术，将两株不同的杂交瘤细胞（A和B）融合形成双杂交瘤细胞AB。双杂交瘤细胞能够悬浮在培养基中生长繁殖，可以产生双特异性抗体AB。据图分析，下列说法正确的是（）A．杂交瘤细胞A、B混合并诱导融合后，利用HAT选择培养基筛选出双杂交瘤细胞AB B．双杂交瘤细胞同时识别α、β抗原后，才能产生双特异性抗体 C．对培养到一定密度的双杂交瘤细胞进行传代培养时，不需要使用蛋白酶使之分散 D．体外培养双克隆抗体需要定期更换培养液以创设无菌环境【考点】单克隆抗体及其应用．【专题】模式图；克隆技术；理解能力．【答案】C【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。【解答】解：A、HAT选择培养基是指单克隆抗体制备过程中的第二次筛选所使用的选择培养基，可用抗原﹣抗体杂交的方法筛选出产生特异性抗体的杂交瘤细胞，双杂交瘤细胞本身就是由两个杂交瘤细胞融合而成，利用选择培养基无法筛选出双杂交瘤细胞AB，A错误；B、分析题意可知，杂交瘤细胞是由已免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融合，无需接触抗原就能产生抗体，B错误；C、双杂交瘤细胞能够悬浮在培养基中生长繁殖，若要传代培养，细胞培养液直接离心，去除上清液培养基，加入新鲜培养基即可，不用胰蛋白酶处理，C正确；D、体外培养双克隆抗体需要定期更换培养液以补充营养，减少代谢废物的积累，D错误。故选：C。【点评】本题主要考查的是单克隆抗体的制备以及应用的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。5．（2025•福州模拟）小分子物质CHIR可激活Wnt信号通路。较小剂量的CHIR仅激活部分Wnt通路，可导致多能干细胞被诱导为成熟的胰岛B细胞；当Wnt通路被完全激活时，多能干细胞则形成中胚层细胞。下列叙述正确的是（）A．多能干细胞和胚胎干细胞都能分化成各种体细胞 B．CHIR剂量的大小会影响多能干细胞分化的终点 C．CHIR能诱导多能干细胞分化是因为细胞发生了基因突变 D．诱导获得的成熟胰岛B细胞可直接移植给1型糖尿病患者【考点】干细胞的培养及其应用；血糖平衡调节．【专题】正推法；体温调节、水盐调节与血糖调节；克隆技术；解决问题能力．【答案】B【分析】干细胞是一类具有自我复制能力及多向分化潜能的细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。【解答】解：A、多能干细胞只能分化为部分细胞，不能分化成各种体细胞，A错误；B、“较小剂量的CHIR仅激活部分Wnt通路，可导致多能干细胞被诱导为成熟的胰岛B细胞；当Wnt通路被完全激活时，多能干细胞则形成中胚层细胞”，说明CHIR剂量的大小会影响多能干细胞分化的终点，B正确；C、CHIR能诱导多能干细胞分化是因为细胞发生了基因的选择性表达，而不是基因突变，C错误；D、诱导获得的成熟胰岛B细胞为确保其功能正常，在移植前需检测其在葡萄糖诱导下能否产生胰岛素，功能正常的才能移植给1型糖尿病患者，D错误。故选：B。【点评】本题考查干细胞培养及血糖调节的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。6．（2025•盐城二模）体外培养发现绝大多数的克隆胚胎在囊胚阶段出现发育阻滞，用Wnt信号通路抑制剂处理后，出生率可大幅提高。下列叙述正确的是（）A．胚胎发育早期依次经历卵裂、囊胚和桑甚胚阶段 B．胚胎发育过程中部分细胞凋亡是基因选择性表达的结果 C．Wnt信号通路持续异常激活可促进克隆胚胎发育过程 D．动物克隆需利用动物细胞培养、同期发情和胚胎移植等技术【考点】胚胎的早期发育；体外受精和胚胎移植．【专题】正推法；胚胎工程；理解能力．【答案】B【分析】1、胚胎发育过程：（1）卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加；（2）桑葚胚：32个细胞左右的胚胎[之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞]；（3）囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化]；（4）原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔。2、胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体。用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。【解答】解：A、胚胎发育早期依次经历卵裂、桑葚胚和囊胚阶段，A错误；B、细胞凋亡是基因控制的、程序性死亡，胚胎发育过程中部分细胞凋亡是基因选择性表达的结果，B正确；C、Wnt通路抑制剂处理克隆囊胚后，供体的核移植胚胎出生率可大幅提高，因此Wnt信号通路持续异常激活可阻碍克隆胚胎发育过程，C错误；D、动物克隆需利用动物细胞培养、核移植和胚胎移植等技术，D错误。故选：B。【点评】本题考查胚胎工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力、运用所学知识综合分析问题的能力。7．（2025•长沙校级一模）为培育具有市场竞争力的无籽柑橘，研究者设计如下流程。相关叙述错误的是（）A．过程①常使用纤维素酶和果胶酶 B．经过②获得的融合细胞即为所需杂种细胞 C．过程③的培养基中需要添加生长素和细胞分裂素 D．获得的植株C染色体组成与植株A、柑橘B均不相同【考点】植物体细胞杂交技术及应用．【专题】模式图；植物的组织培养．【答案】B【分析】题图分析：图中①表示去除细胞壁，获得原生质体；②表示诱导原生质体融合；③表示采用植物组织培养技术将杂种细胞培育成杂种植株。【解答】解：A、植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，①表示去除细胞壁，获得原生质体，故①过程常利用的酶是纤维素酶和果胶酶，A正确；B、通过过程②得到的两两融合细胞除了杂种细胞外，还有同种细胞的融合，如柑橘A﹣柑橘A融合细胞、柑橘B﹣柑橘B融合细胞，B错误；C、③表示采用植物组织培养技术将杂种细胞培育成杂种植株，过程③的培养基中需要添加生长素和细胞分裂素，C正确；D、杂种细胞由柑橘A（1个染色体组）细胞和柑橘B（2个染色体组）细胞融合而成，细胞中都含有3个染色体组，故获得的植株C有3个染色体组，与柑橘A、B不相同，D正确。故选：B。【点评】本题结合图示考查植物体细胞杂交和植物组织培养的过程，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力。8．（2025•辽阳模拟）无毒化栽培是目前生产上防治马铃薯病毒病害最有效的方法，脱毒技术是生产无毒苗的关键技术。茎尖超低温疗法是一种马铃薯脱毒的方法。以被马铃薯卷叶病毒（PLRV）感染的马铃薯试管苗为实验材料，选择不同大小的茎尖进行超低温处理、再生培养，检测再生植株的病毒保存率，结果如表所示。下列说法错误的是（）病毒感染类型茎尖大小/mm病毒保存率/%PLRV0.501.535A．再生培养需要用到植物组织培养技术 B．再生培养时，诱导生根、生芽的培养基的激素含量有差异 C．再生培养时，脱分化和再分化过程一般都需要光照 D．与0.5mm相比，用1.5mm的茎尖进行超低温处理脱毒的效果较差【考点】植物的组织培养．【专题】数据表格；正推法；植物的组织培养；理解能力．【答案】C【分析】由图表信息可知，PLRV感染的试管苗经低温处理后，茎尖越短病毒保存率越低。【解答】解：A、再生培养需要用到植物组织培养技术，即需要经过脱分化和再分化处理，A正确；B、再生培养时，诱导生根、生芽的培养基的激素含量有不同，诱导生根的培养基中生长素含量较高，诱导生芽的培养基中细胞分裂素含量较高，B正确；C、再生培养时，脱分化过程不需要光照，而再分化过程一般可能需要光照，C错误；D、与0.5mm相比，用1.5mm的茎尖进行超低温处理脱毒的效果较差，即还具有一定的带毒率，D正确。故选：C。【点评】本题主要考查植物组织培养的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。9．（2025•辽阳模拟）最新调查结果显示，我国野生大熊猫种群数量约1864只。由于环境变化和人类活动的影响，现有野生大熊猫栖息地碎片化，我国采取了多种措施对大熊猫实施保护。科研人员设计如图所示的繁殖过程繁育、保护大熊猫。下列相关说法错误的是（）A．激素处理的目的是使供体超数排卵 B．克隆熊猫是无性繁殖，试管熊猫是有性繁殖 C．必须将M中细胞的细胞核取出后注入去核的卵细胞中完成核移植 D．胚胎移植前可通过取样滋养层细胞来鉴定性别【考点】体外受精和胚胎移植；动物细胞核移植技术．【专题】正推法；胚胎工程；理解能力．【答案】C【分析】将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。原理是动物细胞的细胞核具有全能性。【解答】解：A、在胚胎工程里，对供体用促性腺激素等激素处理，目的是促使供体超数排卵，以获取更多卵母细胞，A正确；B、克隆熊猫运用核移植技术，未经过两性生殖细胞结合，属于无性繁殖；试管熊猫经体外受精形成受精卵，再经早期胚胎培养和胚胎移植等过程，有两性生殖细胞结合，属于有性繁殖，B正确；C、核移植时，是把供体细胞的细胞核取出注入去核卵母细胞完成核移植，并非必须将图中M细胞的细胞核取出，M细胞含义不明确，C错误；D、胚胎移植前，可通过取样滋养层细胞，利用DNA分析等技术鉴定胚胎性别，D正确。故选：C。【点评】本题考查胚胎工程相关知识，包括胚胎移植中供体处理、克隆与试管动物的生殖方式、核移植操作以及胚胎性别鉴定等，意在考查学生对胚胎工程相关概念和技术的理解掌握能力。10．（2025•广州一模）珍稀中草药蛇足石杉的有效成分为石杉碱甲，但含量较低。研究人员发现共生真菌可与植物细胞共用酶系统，将蛇足石杉细胞与真菌进行共生培养可促进石杉碱甲的生成。图甲、图乙分别表示共生培养过程中蛇足石杉细胞数量及石杉碱甲含量随时间的变化。下列叙述错误的是（）A．利用植物细胞培养生产石杉碱甲需将外植体培育到愈伤组织阶段 B．将蛇足石杉细胞与真菌共生培养时需要适当添加植物激素 C．图甲实验结果可以确定第4天为传代培养和收集代谢物的最佳时间 D．图乙实验结果不足以证明共生真菌利用了蛇足石杉细胞的酶系统【考点】植物的组织培养．【答案】C【分析】柱形图分析：随着时间延长，共生培养过程中蛇足石杉细胞数量及石杉碱甲含量都表现出先升高后降低的趋势。【解答】解：A、蛇足石杉细胞与真菌进行共生培养获取石杉碱甲，只需将外植体培育到愈伤组织阶段，再进行细胞培养即可，A正确；B、生长素与细胞分裂素比值适中时，促进愈伤组织的形成，故在培养基中要适当添加植物激素，B正确；C、图甲实验结果只能说明在0、2、4、6天中的第4天蛇足石杉细胞数量及石杉碱甲含量最高，但不能确定第4天为传代培养和收集代谢物的最佳时间，C错误；D、图乙实验测定的是不同时间蛇足石杉产生的石杉碱甲的含量，无法证明共生真菌利用了蛇足石杉细胞的酶系统，D正确。故选：C。【点评】本题考查植物组织培养的相关内容，要求学生能运用所学的知识正确作答。11．（2025•萍乡模拟）鲫鱼是一种淡水湖泊中的常见经济鱼类，其早期胚胎发育经历受精卵→卵裂期→囊胚期→原肠胚期→神经胚期。下列相关叙述正确的是（）A．卵裂期卵黄不断减少，胚胎从外界吸收的营养不断增加 B．原肠胚期开始胚层分化，其中外胚层来自囊胚的滋养层细胞 C．体外受精得到的鲫鱼受精卵在胚胎移植时不需添加免疫抑制剂 D．鲫鱼与人具有相似的胚胎发育阶段，为共同由来学说提供了证据【考点】胚胎的早期发育；体外受精和胚胎移植．【专题】正推法；胚胎工程；理解能力．【答案】D【分析】胚胎发育过程：（1）卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加。（2）桑葚胚：32个细胞左右的胚胎[之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞]。（3）囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化]。（4）原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔[细胞分化在胚胎期达到最大限度]。【解答】解：A、卵裂是指受精卵的早期分裂，在卵裂期内，一个细胞或细胞核不断地快速分裂，将体积极大的受精卵细胞分割成许多较小的有核细胞的过程，在此过程中，由于受精卵并不从外界吸收营养，A错误；B、原肠胚期开始胚层分化，其中外胚层来自囊胚的内细胞团细胞，B错误；C、体外受精得到的鲫鱼受精卵在胚胎移植时需要添加免疫抑制剂，C错误；D、鱼与人具有相似的胚胎发育阶段，说明脊椎动物在胚胎发育早期具有彼此相似的阶段，为共同由来学说提供了证据，D正确。故选：D。【点评】本题考查早期胚胎发育的相关知识，要求考生识记早期胚胎发育的具体过程，掌握各阶段的特点，能结合所学的知识准确答题。12．（2025•抚顺模拟）角膜是覆盖眼睛的透明组织层，角膜干细胞通过增殖分化产生角膜上皮细胞来取代凋亡的细胞，并修复较小的角膜损伤。相关研究显示，短期睡眠不足增加了角膜干细胞的增殖分化速度，长期睡眠不足会造成角膜严重受损，如角膜变薄。下列相关叙述正确的是（）A．角膜干细胞是成体干细胞，分裂能力强，具有组织特异性 B．诱导多能干细胞来源于胚胎，其全能性高，用于治疗角膜损伤相关疾病时，一般不会发生免疫排斥反应 C．用角膜干细胞体外培养角膜上皮细胞，需定期更换培养基以保证无菌环境 D．短期睡眠不足状态下，大多数的角膜干细胞处于分裂间期，细胞周期变长【考点】干细胞的培养及其应用．【专题】正推法；胚胎工程；理解能力．【答案】A【分析】在一定条件下，干细胞可以分化成其他类型的细胞。干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等。【解答】解：A、角膜干细胞是成体干细胞，分裂能力强，具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，A正确；B、诱导多能干细胞来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应，B错误；C、定期更换培养基是为了清除代谢物，防止细胞代谢积累物对细胞自身造成危害，C错误；D、分析题意“短期睡眠不足增加了角膜干细胞的增殖分化速度”，由此可知短期睡眠不足状态下，大多数的角膜干细胞的细胞周期变短，D错误。故选：A。【点评】本题主要考查干细胞的培养及其应用的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。13．（2025•石家庄模拟）原生质体比正常植物细胞更易接受外源DNA，其制备过程主要包括取材→剪碎→酶解。下列叙述错误的是（）A．细胞壁可能会阻止外源DNA进入细胞 B．取材后需用酒精和次氯酸钠对材料灭菌 C．剪碎的目的是使酶与细胞充分接触 D．可用台盼蓝染液来鉴定原生质体活性【考点】植物体细胞杂交技术及应用；植物的组织培养．【专题】正推法；植物的组织培养；解决问题能力．【答案】B【分析】植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以制备原生质体，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁去除，这种去除细胞壁的方法称为酶解法。【解答】解：A、原生质体比正常植物细胞更易接受外源DNA，推测细胞壁的存在可能阻碍外源DNA进入细胞，A正确；B、酒精和次氯酸钠常用于消毒（减少微生物数量），而非灭菌，B错误；C、剪碎材料可增大接触面积，便于酶解细胞壁，C正确；D、台盼蓝可鉴别原生质体活性，活细胞不被染成蓝色，死细胞膜破损，被染成蓝色，D正确。故选：B。【点评】本题考查植物组织培养和体细胞杂交技术的相关知识，要求考生理解识记有关技术的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能将教材中的知识结合题中信息进行迁移应用。14．（2025•湖北模拟）细胞悬浮培养是将细胞接种于液体培养基中并保持良好分散状态的培养方式，细胞悬浮培养常在生物反应器（如发酵罐等）中进行。下列叙述错误的是（）A．悬浮培养可以增加细胞与培养液的接触，促进营养物质的吸收 B．生物反应器能精确地控制温度、pH、溶解氧等培养条件 C．植物细胞培养用的是固体培养基，不能进行悬浮培养 D．在接种细胞之前，生物反应器必须经过严格地灭菌【考点】植物的组织培养．【专题】对比分析法；植物的组织培养；理解能力．【答案】C【分析】1、植物组织培养的过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）愈伤组织胚状体→植株（新植体）。2、愈伤组织的特点：高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织（色浅）。【解答】解：A、振荡培养能使微生物与培养液充分接触，从而促进微生物对营养物质的吸收，A正确；B、在生物反应器内的细胞悬浮培养需严格控制溶解氧、温度、pH等条件，B正确；C、植物细胞培养用既可以固体培养基，也可以进行悬浮培养，C错误；D、为防止杂菌污染，在接种细胞之前，生物反应器必须经过严格地灭菌，D正确。故选：C。【点评】本题考查植物组织培养，要求考生识记植物组织培养的原理、条件和具体操作，意在考查考生对知识的理解和运用能力。15．（2025•湖北模拟）胚胎移植是医学和农业生产上应用较多的胚胎工程技术。下列生物技术需用到胚胎移植的是（）①体细胞核移植②胚胎分割③培育转基因动物④动物细胞培养⑤动物细胞融合A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．②③⑤【考点】体外受精和胚胎移植．【专题】正推法；胚胎工程；理解能力．【答案】A【分析】胚胎工程中要用到技术：体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术；转基因动物培育用到的技术：基因工程、动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植；核移植用到的技术：动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植等。【解答】解：①体细胞核移植是将体细胞的细胞核移植到去核的卵母细胞中，构建重组细胞，重组细胞经培养发育成早期胚胎后，需要通过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母体子宫内，使其继续发育直至分娩，从而获得克隆动物，①正确；②胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经胚胎分割得到的胚胎，需要借助胚胎移植技术，将其移植到代孕母体的子宫内，使其发育为新个体，以提高优良胚胎的利用率，获得更多遗传性状相同的后代，②正确；③培育转基因动物时，通常是将外源基因导入受精卵或早期胚胎细胞，然后培养发育成早期胚胎，为了使胚胎继续发育成完整的个体，需要将早期胚胎移植到代孕母体的子宫内，让其在子宫内着床、发育直至分娩，③正确；④动物细胞培养是指从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的过程，其目的是获得大量细胞或细胞产物，没有涉及将胚胎移植到母体子宫内发育成个体的过程，即该过程不需要用到胚胎移植技术，④错误；⑤动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，常用的诱导因素有聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电激等。动物细胞融合技术主要用于制备单克隆抗体等，没有涉及胚胎的发育和移植，即该过程不需要用到胚胎移植技术，⑤错误；综上所述，需用到胚胎移植的是①②③，即A正确。故选：A。【点评】本题主要考查体细胞核移植、胚胎分割、转基因动物、动物细胞培养、动物细胞融合和胚胎移植的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。二．解答题（共5小题）16．（2025•漳州模拟）坦布苏病毒（TMUV，单链RNA病毒）可引起肉鸭严重的神经症状和蛋鸭产蛋量的急剧下降，研究者将绿色荧光蛋白基因（EGFP）插入坦布苏病毒的基因组中构建报告病毒，其构建的部分流程如图甲所示。回答下列问题：（1）利用PCR技术获得EGFP﹣2A片段，预变性是在98℃下进行，变性则是在95℃下进行，进行该操作的目的是使DNA分子充分变性。PCR过程中复性的结果是两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。（2）为了使EGFP﹣2A片段能正向插入TMUV基因组中，PCR设计的引物F和2A﹣R的序列要能分别与①、②互补配对。2A基因的表达产物2A蛋白可以通过“核糖体跳跃”断开位于2A肽尾端甘氨酸和脯氨酸之间的肽键，推测在重组DNA中引入2A的目的是将EGFP与TMUV病毒的前体蛋白断裂成独立蛋白。（3）科研人员通过基因工程获取坦布苏病毒的prM蛋白（153个氨基酸构成）用于制备单克隆抗体。为了鉴定单克隆抗体识别prM蛋白的具体区域，将prM蛋白逐步截短，分别与纯化的单克隆抗体反应，实验结果如图乙（“aa”表示氨基酸，“+”表示有反应，“﹣”表示无反应）。①制备单克隆抗体时，需用纯化的prM蛋白对小鼠进行免疫，其目的是获得能产生抗prM蛋白（特定）抗体的B淋巴细胞，并将该细胞与骨髓瘤细胞融合，对经特定的选择培养基筛选得到的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选后可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，再将其注射到小鼠的腹腔内增殖并产生抗体。②根据图示实验结果分析，该单克隆抗体识别prM蛋白的区域大概包含15（填“10”“15”或“20”）个氨基酸残基。【考点】单克隆抗体及其应用；DNA片段的扩增与电泳鉴定．【专题】图文信息类简答题；PCR技术；克隆技术；理解能力．【答案】（1）使DNA分子充分变性两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合（2）使EGFP﹣2A片段能正向插入TMUV基因组中将EGFP与TMUV病毒的前体蛋白断裂成独立蛋白（3）能产生抗prM蛋白（特定）抗体的B淋巴克隆化培养和抗体检测15【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。其原理为DNA复制。PCR的前提条件为要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。PCR的条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、耐高温DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）。PCR过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。【解答】解：（1）利用PCR技术获得EGFP﹣2A片段，预变性是在98℃下进行，变性则是在95℃下进行，进行该操作的目的是使DNA分子充分变性，获得DNA单链。PCR过程中复性的结果是两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，为后续子链延伸做准备。（2）为了使EGFP﹣2A片段能正向插入TMUV基因组中，观察图甲可发现EGFP﹣2A片段的左侧插入的部位是①处，EGFP﹣2A片段的右侧插入的部位是TMUV基因的左侧（②处），因此PCR引物的设计要求是引物F和2A﹣R的序列要能分别与①、②互补配对，这样才能保证EGFP﹣2A片段能正向插入TMUV基因组中；由题意可知，2A蛋白会使核糖体跳过2A肽尾端，可推测在重组DNA中引入2A的目的是将EGFP与TMUV病毒的前体蛋白断裂成独立蛋白。（3）①制备单克隆抗体时，需用纯化的prM蛋白对小鼠进行免疫，其目的是获得能产生抗prM蛋白（特定）抗体的B淋巴细胞，并将该细胞与骨髓瘤细胞融合，对经特定的选择培养基筛选得到的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选后可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，再将其注射到小鼠的腹腔内增殖并产生抗体，而后从小鼠的腹水中获取抗体。②实验操作将prM蛋白逐步截短，仍然能与单克隆抗体反应的区域即为单抗可识别的具体区域，结合图示可推测40～55aa区间，含15个氨基酸残基，应该是单克隆抗体的关键区域。故答案为：（1）使DNA分子充分变性两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合（2）使EGFP﹣2A片段能正向插入TMUV基因组中将EGFP与TMUV病毒的前体蛋白断裂成独立蛋白（3）能产生抗prM蛋白（特定）抗体的B淋巴克隆化培养和抗体检测15【点评】本题考查PCR技术的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。17．（2025•榆林模拟）脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的一种特有成分。CDI4蛋白是LPS的受体，能识别并结合LPS，诱发炎症反应。为制备抗CD14蛋白的单克隆抗体，研究人员通过基因工程构建了含有CD14蛋白基因的重组表达载体，如图1所示。制备抗CD14蛋白的单克隆抗体的过程如图2所示。回答下列问题：（1）用PCR技术对CD14蛋白基因进行扩增时，每次循环可分为变性、复性、延伸三步，若循环五次，理论上至少需要的引物是62个。（2）CD14蛋白基因插入载体会形成正向连接和反向连接的两种重组载体，再用XhoⅠ和SalⅠ酶切对连接方向进行鉴定。若重组载体能被再次切开，则说明CD14正向（填“正向”或“反向”）接入载体，判断的理由是正向连接的重组载体有这两种限制酶的识别序列。（3）从工程菌中提取到的CD14蛋白通过①注射给小鼠，取小鼠脾组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，制成细胞悬液培养，处理后离心收集获得小鼠B淋巴细胞，与SP2/0细胞（一种骨髓瘤细胞）进行融合，促进二者融合常用的方法是PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法（写出1种即可）。用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行克隆化培养。（4）图2中，通过过程⑥从小鼠腹腔中提取的抗CD14蛋白单克隆抗体可减轻革兰氏阴性细菌入侵导致的炎症反应，其原理是抗CD14蛋白单克隆抗体与CD14蛋白特异性结合，阻止了革兰氏阴性细菌细胞壁的脂多糖（LPS）与CD14蛋白结合，从而减轻炎症反应。【考点】单克隆抗体及其应用；DNA片段的扩增与电泳鉴定．【专题】图文信息类简答题；克隆技术；理解能力．【答案】（1）变性、复性、延伸62（2）正向正向连接的重组载体有这两种限制酶的识别序列（3）胰蛋白酶或胶原蛋白PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法克隆化（4）抗CD14蛋白单克隆抗体与CD14蛋白特异性结合，阻止了革兰氏阴性细菌细胞壁的脂多糖（LPS）与CD14蛋白结合，从而减轻炎症反应【分析】1、PCR原理：在高温作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养液培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。【解答】解：（1）PCR技术每次循环分为变性、复性、延伸三步。变性是在高温下使DNA双链解开；复性是在较低温度下，引物与模板链结合；延伸是在DNA聚合酶作用下，以脱氧核苷酸为原料合成新的DNA链；PCR技术中，1个DNA分子经过n次循环后，得到2n个DNA分子。而引物是在DNA复制开始时与模板链结合，引导DNA合成。最初的模板DNA分子不需要引物，从第一次循环开始，每形成一个新的DNA分子都需要引物。循环n次后，DNA分子总数为2n个，除去最初的1个模板DNA分子，新合成的DNA分子数为（2n﹣1）个，每个新合成的DNA分子都需要引物，所以需要的引物数为2×（2n﹣1）。当n＝5时，2×（25﹣1）＝2×（32﹣1）＝62个。（2）若重组载体能被再次切开，则说明CD14正向接入载体，原因是：XhoⅠ和SalⅠ识别的核苷酸序列相同，切割产生的黏性末端也相同。如果CD14蛋白基因正向接入载体，那么用XhoⅠ和SalⅠ酶切时，能在重组载体上找到相应的酶切位点，从而将重组载体再次切开；若反向接入，酶切位点的方向改变，无法被这两种酶再次切开。（3）动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织，使细胞分散开，制成细胞悬液；常用的促进动物细胞融合的方法有物理法（如电激）、化学法（如聚乙二醇）、生物法（如灭活的病毒）；将杂交瘤细胞接种到96孔板，进行克隆化培养，目的是筛选出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞；（4）抗CD14蛋白单克隆抗体能特异性地与CD14蛋白结合，从而阻断LPS与CD14蛋白的识别和结合，进而不能诱发炎症反应，所以可减轻革兰氏阴性细菌入侵导致的炎症反应。故答案为：（1）变性、复性、延伸62（2）正向正向连接的重组载体有这两种限制酶的识别序列（3）胰蛋白酶或胶原蛋白PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法克隆化（4）抗CD14蛋白单克隆抗体与CD14蛋白特异性结合，阻止了革兰氏阴性细菌细胞壁的脂多糖（LPS）与CD14蛋白结合，从而减轻炎症反应【点评】本题主要考查DNA片段的扩增与电泳鉴定以及单克隆抗体的制备以及应用的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握的能力，难度适中。18．（2025•黔南州模拟）植物在遭受生物或非生物胁迫时，往往会积累次生代谢产物来应对外界伤害。紫杉醇是存在于红豆杉属植物体内的一种次生代谢产物，具有高抗癌活性。研究发现从红豆杉愈伤组织细胞就可以提取紫杉醇。回答下列问题：（1）在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中，最好选择红豆杉的幼嫩茎段（幼嫩茎段/成熟茎段）作为外植体进行培养，原因是幼嫩茎段细胞的全能性高于成熟茎段。（2）在一定激素和营养等条件的诱导下，外植体细胞会失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，这个转变过程称为脱分化。未分化的细胞进而形成愈伤组织，将愈伤组织悬浮培养可获得紫杉醇。（3）研究人员在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中发现紫杉醇的产量很低。结合题干信息，提出一种提高紫杉醇产量的措施培养过程中模拟生物或者非生物胁迫环境。目前利用基因工程构建稳定高产紫杉醇的工程菌研究取得很大进展，写出利用紫杉醇合成酶基因构建基因表达载体的思路先用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口，然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有紫杉醇合成酶基因的DNA片段，再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处。【考点】植物的组织培养；细胞产物的工厂化生产．【专题】实验性简答题；正推反推并用法；植物的组织培养；理解能力；解决问题能力．【答案】（1）幼嫩茎段幼嫩茎段细胞的全能性高于成熟茎段（2）脱分化（3）培养过程中模拟生物或者非生物胁迫环境先用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口，然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有紫杉醇合成酶基因的DNA片段，再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处【分析】植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：将离体的植物组织、器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织，愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。【解答】解：（1）在利用植物组织培养技术生产紫杉醇的过程中，最好选择红豆杉的幼嫩茎段作为外植体进行培养，原因是幼嫩茎段细胞的全能性高于成熟茎段，分化程度低，更易诱导形成愈伤组织。（2）在一定激素和营养等条件的诱导下，外植体细胞会失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，这个转变过程称为脱分化。未分化的细胞进而形成愈伤组织，将愈伤组织悬浮培养可获得紫杉醇。（3）由于题干中提到植物在遭受生物或非生物胁迫时会积累次生代谢产物，包括紫杉醇，因此提高紫杉醇产量的一种措施可以是在培养过程中模拟生物或非生物胁迫环境。目前利用基因工程构建稳定高产紫杉醇的工程菌研究取得很大进展，写出利用紫杉醇合成酶基因构建基因表达载体的思路为：①选择合适的载体，如质粒；②使用限制性内切酶切割载体，产生一个切口；③用相同的限制性内切酶或能产生相同末端的限制性内切酶切割含有紫杉醇合成酶基因的DNA片段；④利用DNA连接酶将紫杉醇合成酶基因片段拼接到载体的切口处，形成重组载体；⑤将重组载体导入宿主细胞，如细菌，以实现紫杉醇合成酶基因的表达。故答案为：（1）幼嫩茎段幼嫩茎段细胞的全能性高于成熟茎段（2）脱分化（3）培养过程中模拟生物或者非生物胁迫环境先用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口，然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有紫杉醇合成酶基因的DNA片段，再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处【点评】本题结合图解，考查植物组织培养的相关知识，要求学生理解植物组织培养的原理、过程、条件及产物，掌握植物组织培养技术的相关应用，从而结合题干信息对本题作出正确解答，意在考查学生的理解能力和综合分析能力。19．（2025•河南模拟）我国科研人员利用多种现代生物技术，在猪的体内培育出了一个“人﹣猪嵌合中期肾”，且维持到胚胎第28天（实验过程如图1所示），该研究实现了世界首例人源化肾脏异种再生的壮举。回答下列问题。（1）据图1分析，在“人源化中肾”的培养过程中，运用了动物细胞培养技术、细胞核移植技术、胚胎移植技术等动物细胞工程的技术（答出3点即可）。（2）过程②常用的去核方法为显微操作法，所谓的“核”实际上是MⅡ期卵母细胞中的纺锤体﹣染色体复合物。过程③中，获得单细胞悬液时，猪胚胎剪碎后需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。（3）过程④运用基因编辑技术（见图2，Cas9蛋白在向导RNA引导下，切割目标DNA双链）敲除成纤维细胞中的猪肾发育的关键基因SIX1，可以为后续人iPS细胞的生长和分化提供更合适的生存环境。下列对于该过程的分析，正确的有CD。A．Cas9蛋白由相关基因指导在核糖体上合成，向导RNA可在逆转录酶催化下合成B．Cas9蛋白识别并切割SIX1基因特定位点的磷酸二酯键，其作用方式与限制酶相同C．向导RNA的部分序列是根据SIX1基因设计的，其双链区遵循碱基互补配对原则D．敲除SIX1基因的猪胚胎可避免猪细胞与人iPS细胞竞争肾脏发育的环境（4）过程⑧中，选用iPS细胞作为肾脏供体细胞的原因是iPS细胞具有与胚胎干细胞类似的分裂和分化能力，在特定条件诱导下能定向分化为特定的组织器官。在早期胚胎阶段，猪胚胎的细胞尚未完全分化成各种类型的细胞和组织，细胞之间的连接较松散，这使得导入的人iPS细胞较容易在猪胚胎中整合，胚胎的可塑性也较强，据此判断在构建嵌合胚胎过程中，可在猪胚胎发育至桑葚胚（填“桑葚胚”或“囊胚”）期注射人源供体细胞。合适的培养基是提高iPS细胞嵌合能力的关键，下列有关叙述错误的是C。A．培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等营养物质B．为保证体外培养细胞处于无菌、无毒的环境，除无菌操作外，培养液还需定期更换C．动物细胞应放入含5%CO2培养箱中培养，CO2的主要作用是刺激细胞呼吸D．维持动物细胞体外生存必须有适宜的温度、pH和渗透压等环境条件【考点】动物细胞培养的条件与过程；动物细胞核移植技术；基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用．【专题】图文信息类简答题；正推法；基因工程；克隆技术；理解能力；实验探究能力．【答案】（1）动物细胞培养、细胞核移植技术、胚胎移植和干细胞培养（2）显微操作法MⅡ期卵母细胞中的纺锤体﹣染色体复合物胰蛋白酶或胶原蛋白酶（3）CD（4）iPS细胞具有与胚胎干细胞类似的分裂和分化能力，在特定条件诱导下能定向分化为特定的组织器官桑葚胚C【分析】1、细胞全能性是指已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。在多细胞生物中，每个体细胞的细胞核都含有个体发育的全部基因，只要条件许可，都可发育成完整的个体。2、动物细胞培养的条件：（1）营养条件；（2）无菌、无毒环境；（3）适宜的温度、pH和渗透压；（4）适宜的气体环境（95%的空气+5%的CO2）。【解答】解：（1）依据图1可知，在“人源化中肾”的培养过程中，运用了动物细胞培养技术、细胞核移植技术、胚胎移植技术等动物工程技术。（2）过程②表示去除卵母细胞的细胞核，采用的方法是显微操作法，所谓的“核”实际上是指MⅡ期卵母细胞中的纺锤体﹣染色体复合物。过程③中，获得单细胞悬液时，猪胚胎剪碎后，需用胰蛋白酶或胰蛋白酶处理，将组织细胞分散成单个细胞。（3）A、Cas9蛋白是以mRNA为模板，在核糖体上合成的，向导RNA以DNA为模板在RNA聚合酶的作用下合成，逆转录酶催化合成的是RNA→DNA的过程，A错误；B、限制酶具有识别并切割特定的脱氧核糖核苷酸序列的作用，打开磷酸二酯键，Cas9蛋白在向导RNA引导下，切割目标DNA双链，说明不具有识别作用，打开的是磷酸二酯键，B错误；C、向导RNA的部分序列是根据SIX1基因设计的，其双链区遵循碱基互补配对原则，C正确；D、SIX1基因是控制猪肾发育的关键基因，若不敲除，则会与人iPS细胞竞争肾脏发育的环境，D正确。故选：CD。（4）之所以选用iPS细胞作为肾脏供体细胞，主要由于iPS细胞具有与胚胎干细胞类似的分裂和分化能力，在特定条件诱导下能定向分化为特定的组织器官。依据题干信息，猪胚胎的细胞尚未完全分化成各种类型的细胞和组织，细胞之间的连接较松散，这使得导入的人iPS细胞较容易在猪胚胎中整合，所以在构建嵌合胚胎过程中，可在猪胚胎发育至桑葚胚（分化程度较囊胚低）期注射人源供体细胞。A、对动物细胞进行培养，培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等营养物质，A正确；B、为保证体外培养细胞处于无菌、无毒的环境，除无菌操作外，培养液还需定期更换，以补充营养物质，减少细胞代谢废物的积累，B正确；C、CO2的主要作用是维持培养液的pH，不是刺激细胞呼吸，C错误；D、维持动物细胞体外生存必须有适宜的温度、pH和渗透压等环境条件，D正确。故选：C。故答案为：（1）动物细胞培养、细胞核移植技术、胚胎移植和干细胞培养（2）显微操作法MⅡ期卵母细胞中的纺锤体﹣染色体复合物胰蛋白酶或胶原蛋白酶（3）CD（4）iPS细胞具有与胚胎干细胞类似的分裂和分化能力，在特定条件诱导下能定向分化为特定的组织器官桑葚胚C【点评】本题考查动物细胞工程和基因工程的相关知识，要求学生掌握动物细胞培养的条件，细胞核移植技术的操作步骤及注意事项，理解基因工程的操作步骤，从而结合题干信息对本题作出正确解答，意在考查学生的理解能力和综合分析能力。20．（2025•河南模拟）肿瘤免疫治疗是指通过调动机体免疫系统功能，增强机体抗肿瘤免疫应答，从而清除和杀灭肿瘤细胞的一种治疗方法。肿瘤治疗性mRNA疫苗作为肿瘤免疫治疗的重要组成部分，拥有广阔的应用前景，其作用机制如图所示。回答下列问题。（1）据图分析，树突状细胞发挥的作用包括吞噬mRNA疫苗、翻译出抗原蛋白、加工处理抗原并呈递抗原信息给B细胞和T细胞。（2）结合所学知识分析，B细胞的活化需要两个信号的刺激和细胞因子的作用，活化后的B细胞增殖、分化为浆细胞和记忆B细胞，产生的抗体与肿瘤细胞结合；活化的细胞毒性T细胞分泌穿孔素、颗粒酶诱导肿瘤细胞凋亡（填“凋亡”或“坏死”）；最终肿瘤细胞被巨噬细胞清除。（3）晚期癌症患者体内免疫微环境被高度抑制，单一mRNA疫苗治疗效果不尽如人意，但与单抗药物联用可显著增强抗肿瘤免疫应答。在制备单克隆抗体过程中，需先使用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，然后利用抗原﹣抗体特异性结合的原理，对体外培养的杂交瘤细胞再次进行筛选，获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。【考点】单克隆抗体及其应用．【专题】图文信息类简答题；克隆技术；理解能力．【答案】（1）吞噬mRNA疫苗、翻译出抗原蛋白、加工处理抗原并呈递抗原信息给B细胞和T细胞（2）细胞因子浆细胞和记忆B细胞凋亡巨噬细胞（3）选择培养基抗原﹣抗体特异性结合能产生特定抗体的杂交瘤细胞【分析】单克隆抗体的制备利用的技术有动物细胞培养和动物细胞融合，所利用的原理是细胞增殖和细胞膜的流动性。在该过程中需要进行两次筛选，最终才能获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。ADC上的单克隆抗体可以特异性识别肿瘤细胞表面的抗原，从而实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。【解答】解：（1）据图可知，树突状细胞作为一种抗原呈递细胞，该细胞具有吞噬mRNA疫苗、并以mRNA为模板，翻译出抗原蛋白，经将抗原进行加工处理后呈递抗原信息给B细胞和T细胞（辅助性T细胞和细胞毒性T细胞）。（2）B细胞的活化需要两个信号的刺激和细胞因子的作用，活化后的B细胞增殖、分化为浆细胞和记忆B细胞，产生抗体，与肿瘤细胞结合；活化的细胞毒性T细胞分泌穿孔素、颗粒酶诱导肿瘤细胞发生细胞凋亡；最终肿瘤细胞被巨噬细胞清除。（3）在制备单克隆抗体过程中，需要经过两个筛选，第一次筛选，需先使用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选，是利用抗原﹣抗体特异性结合原理进行筛选，获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。故答案为：（1）吞噬mRNA疫苗、翻译出抗原蛋白、加工处理抗原并呈递抗原信息给B细胞和T细胞（2）细胞因子浆细胞和记忆B细胞凋亡巨噬细胞（3）选择培养基抗原﹣抗体特异性结合能产生特定抗体的杂交瘤细胞【点评】本题考查单克隆抗体的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，学生具备运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。

考点卡片1．血糖平衡调节【知识点的认识】1、血糖的来源主要有哪几个方面？①食物中的糖类经消化、吸收进入血液，是血糖的主要来源；②肝糖原分解成葡萄糖进入血液，是空腹时血糖的主要来源③非糖物质可以转化为葡萄糖进入血液，补充血糖。2、血糖的去向主要有哪几个方面？①随血液流经各组织时，被组织细胞摄取，氧化分解；②在肝和骨骼肌细胞内合成肝糖原和肌糖原储存起来；③脂肪组织和肝可将葡萄糖转变为非糖物质，如甘油三酯、某些氨基酸等。3、升高血糖的激素有哪些？降低血糖呢？人体内有多种激素参与调节血糖浓度，如糖皮质激素、肾上腺素、甲状腺激素等，它们通过调节有机物的代谢或影响胰岛素的分泌和作用，直接或间接地提高血糖浓度。胰岛素是唯一能够降低血糖浓度的激素。4、人体血糖平衡的调节机制【命题方向】下列关于血糖平衡调节的叙述，错误的是（）A．血糖主要来源于食物的消化和吸收B．血糖的主要去向是细胞内的氧化分解C．血糖大量转化成脂肪，表明摄入的营养过剩D．人体内的胰岛素等多种激素都有降低血糖的作用分析：1、胰岛B细胞分泌胰岛素是唯一能降低血糖的激素，其作用分为两个方面：促进血糖氧化分解、合成糖原、转化成非糖类物质；抑制肝糖原的分解和非糖类物质转化。2、人体血糖的来源：①消化吸收，②肝糖原分解，③非糖物质转化；去路：①氧化分解，②合成肝糖原和肌糖原，③转化为非糖物质。解答：A、血液中的葡萄糖称为血糖，其主要来自于人体消化系统对食物的消化和吸收，A正确；B、糖类是主要的能源物质，血糖的主要去向是细胞内的氧化分解，B正确；C、血糖大量转化成脂肪，表明摄入的营养过剩，故应注意控制糖分的摄入，C正确；D、胰岛素是机体中唯一能够降低血糖的激素，D错误。故选：D。点评：本题考查血糖调节的相关知识，意在考查学生的识记和理解能力，要求学生掌握血糖的来源和去路，并区分胰岛素与胰高血糖素这两种调节血糖的激素的作用机制，属于中档题。【解题思路点拨】血糖平衡调节：1、人体正常血糖浓度：0.8～1.2g/L（低于0.8g/L：低血糖症；高于1.2g/L：高血糖症，严重时出现糖尿病。）2、人体血糖的三个来源：食物、肝糖原的分解、非糖物质的转化；三个去处：氧化分解、合成肝糖原肌糖原、转化成脂肪蛋白质等。2．植物的组织培养【知识点的认识】（1）植物组织培养：将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。（2）植物组织培养的原理是：植物细胞的全能性（3）在一定的激素和营养等条件的诱导下，已经分化的细胞失去特有的结构和功能，转变成未分化的