DB22-T3357-2022-玉米抗镰孢菌根腐病鉴定技术规程-吉林省

ICS65.020CCSB0522吉林省地方标准DB22/T3357—2022玉米抗镰孢根腐病鉴定技术规范TechnicalspecificationonevaluationofmaizeresistancetoFusariumrootrot吉林省市场监督管理厅发布DB22/T3357—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林省农业科学院。本文件主要起草人：苏前富、贾娇、张伟、孟玲敏、白雪、王巍巍、高月波、王义生、晋齐鸣。IDB22/T3357—2022玉米抗镰孢根腐病鉴定技术规范1范围本标准规定了玉米抗镰孢根腐病鉴定技术方法和抗性评价标准。本标准适用于栽培玉米（ZeamaysL.）自交系和杂交种等种质资源对玉米镰孢根腐病抗性的人工接种鉴定及评价。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。术语和定义3下列术语和定义适用于本文件。镰孢根腐病Fusariumrootrot由镰孢属的一些种（Fusariumspp.，有性态为赤霉属Gibberellaspp.）所引起的玉米苗期根部4分离、鉴定和保存以常规组织分离法和单孢分离法（见附录A）从田间采集的具有典型玉米根腐病症状的根部分离获得纯培养物，依据形态特征和分子鉴定结果，明确其镰孢属种级分类地位（见附录B），4℃保存备挑取4.1保存的镰孢菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基25℃暗培养5d～7d后，用无菌打孔器打取菌落边缘直径5mm的菌饼，将其接种于合成低营养（SN）培养基中150r/min摇培7d～10d，镜检分生孢子浓度达到1×10个/mL后，充分摇匀接种于经高压灭菌的高粱粒上，每120g6高粱粒接种1mL孢子悬浮液，充分混匀，25℃培养7d～10d后，待菌丝布满高粱粒，阴干低温保存备用。PDA、SN和高粱粒培养基配方见附录C。5鉴定圃鉴定圃应具备良好的自然发病环境和排灌设施，周边应设置保护行。鉴定圃确定后不应随意更换。1DB22/T3357—2022试验设计鉴定圃中每2行(行长5m，行距0.6m～0.7m)为一个小区，随机排列或顺序排列。每30行～50行鉴定材料设1组对照材料（高抗自交系吉842、高感自交系LN810），见附录D。种植要求根据鉴定材料生育期、土壤环境及气候条件等适当早播。每行播种50粒种子，精量点播。鉴定材料出苗率低于60%时视为该材料鉴定无效。6接种时期与方法播种时将按4.2制备的接种体与种子同时施入播种穴中，每穴约5g接种体。田间管理播种后镇压保墒，正常田间管理。播种后若遇持续干旱，应及时浇灌，保持土壤含水量60%～70%。7调查全小区调查，以玉米主胚根2/3以上发生腐烂为发病植株。记录每份鉴定材料的总株数和发病株数,计算发病株率。按公式（1）计算发病株率：P=×100······································································（1）P——发病株率，单位为百分率（%）；n——发病株数，单位为株；N——调查总株数，单位为株。表1玉米对镰孢根腐病抗性鉴定的病情级别划分135发病株率10.1%～20%；发病株率20.1%～40.0%；2DB22/T3357—2022表1玉米对镰孢根腐病抗性鉴定的病情级别划分（续）病情级别描述发病株率40.1%～60.0%；发病株率60.1%～100%。798抗性评价有效性判别当鉴定圃中高感对照材料达到表1中的9级，该批次材料苗期根腐病鉴定结果视为有效。评价8.2.1依据鉴定材料发病程度（病情级别）确定其抗性水平，评价标准见表2。表2玉米对镰孢根腐病抗性的评价标准病情级别抗性高抗Highlyresistant（HR）抗Resistant（R）13579中抗Moderatelyresistant（MR）感Susceptible（S）高感Highlysusceptible（HS）表3年玉米抗镰孢根腐病鉴定记录表编号接种镰孢菌分离物编号：接种日期：评价技术负责人（签字）：3DB22/T3357—2022重复鉴定鉴定材料若初次鉴定表现为高抗、抗、中抗，翌年进行重复鉴定。评价结论综合两年评价结果，抗性以记载的最高病情级别为准，并依此结果对鉴定材料进行评价，形成评价结论。4DB22/T3357—2022附录A（资料性）镰孢菌分离方法A.1常规组织分离法切取小块病健交界处组织，经表面消毒和灭菌水清洗过后，在适宜的培养基和生长条件下培育纯菌丝的一种简易方法。A.2单孢分离法用灭菌水将SN培养基培养的镰孢菌分生孢子悬浮液稀释为1×10个/mL的溶液，然后吸取2003μL溶液均匀涂布于PDA培养基上，25℃黑暗培养24h后，挑取萌发的单个分生孢子于新的PDA培养基中，25℃暗培养。5DB22/T3357—2022附录B（资料性）玉米镰孢根腐病病原菌B.1学名和形态描述B.1.1禾谷镰孢（无性态）/玉蜀黍赤霉菌（有性态）无性态学名：FusariumgraminearumSchwabe有性态学名：Gibberellazeae（Schwein.）Petch无性态特征：大型分生孢子呈镰刀状，有隔膜3个～7个，顶端钝圆或略微收缩，基部有明显的足细胞，具有3个～4个分隔的分生孢子大小为（25µm～40µm）×（2.5µm～4µm），具有5个～7个分隔的分生孢子大小为（48µm～50µm）×（3µm～3.5µm）（图B.1）；小型分生孢子极少或无，无厚垣孢子。有性态特征：子囊壳卵圆状，直径约140µm～250µm；子囊长棒状，（60µm～85µm）×（8µm～11µm），内含8个子囊孢子，（19µm～24µm）×（3µm～4µm）。图B.1禾谷镰孢的菌落形态和分生孢子形态拟轮枝镰孢（无性态）/藤仓赤霉（有性态）无性态特征：小型分生孢子念珠状串生，无色，单胞，（5µm～12µm）×（2µm～3µm）（图B.1）；大型分生孢子较少，无色，镰刀状，略弯，两端尖，3个～5个分隔，（15µm～60µm）×（2µm～5µm）。有性态特征：较少形成，子囊壳球状，直径220µm～300µm；子囊长棒状，内含8个子囊孢子；子囊孢子大小（14µm～18µm）×（4.5µm～6µm）。6DB22/T3357—2022图B.2拟轮枝镰孢的菌落形态和分生孢子形态B.2镰孢菌的分子鉴定特异性检测：针对镰孢菌脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic,DNA）中属和种的特异性序列，用特异性引物进行扩增。特异性引物、扩增产物大小及扩增所需要的退火温度见表B.1。表B.1禾谷镰孢、拟轮枝镰孢和镰孢属的特异性引物7DB22/T3357—2022附录C（资料性）镰孢菌培养基配方C.1PDA培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基（Potatodextroseagarmedium，PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g～20g，蒸馏水1000mL。C.2SN培养基合成低营养培养基（SpeziellerNährstoffarmer，SN）：磷酸二氢钾1g，硝酸钾1g，七水硫酸镁0.5g，氯化钾0.5g，葡萄糖0.2g，蔗糖0.2g，蒸馏水1000mL。C.3高粱粒培养基高