血检检验科操作程序sop文件

ISO15189质量管理体系文件

血检室作业指导书

文件编号：SWYY-XUEJIAN-01

第1版

共166页

编制：XXX

审核：XXX

批准：XXX

批准日期：2008年4月30日

生效日期：2007年5月1日

XXX医院检验科血检室

操作手册说明及要求

《作业指导书》作为《质量手册》的支持性文件，是实验室按IS015189：

2003《医学实验室-质量和能力的专用要求》编制的文件化管理体系。是医

学实验室管理体系文件的重要组成部分，是《管理手册》中涉及的要素的

具体描述。现予以批准发布实施。

《作业指导书》是检验科实验室质量活动的基本法规和准则。各有关部门

和个人必须认真贯彻执行，严格维护管理体系的有效运行，切实保证产品

的检测质量。

本《作业指导书》持有单位和个人未经允许，不得私自更改、转让和复制。

本作业指导书为本室标准操作程序文件应遵守如下：

1、实验室所有使用的检验方法都应该有操作手册。所制作的操作手册应符

合实际工作情况并为操作人员所熟悉和遵守。

2、操作手册须由主任批准，签字和注明日期。

3、实验室改变领导，手册须由现领导再批准，签字和注明日期。

4、必须保存有开始和停止使用的操作手册副本，并保存到停止使用两年后

才能销毁。

5、本S0P的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员

批准签字：室负责人、科主任。

XXX医院检验科（血检）

检验科主任：XXX

2008年5月1日

2

目录

序号主题内容代号页号

1骨髓细胞形态检查SWSL-XJ-01-017

2骨髓巨核细胞计数SWSL-XJ-01-0211

3过氧化物酶染色SWSL-XJ-01-0314

4糖原染色SWSL-XJ-01-0416

5a一乙酸蔡酚酯酶（ANE）SWSL-XJ-01-0518

6中性粒细胞碱性磷酸酶染色SWSL-XJ-01-0620

7血红蛋白测定SWSL-XJ-01-0722

8红细胞计数SWSL-XJ-01-0824

9网织红细胞计数SWSL-XJ-01-0926

10异常红细胞检查SWSL-XJ-01-1028

11白细胞计数（WBC）SWSL-XJ-01-1133

12白细胞分类计数SWSL-XJ-01-1235

13异常白细胞检查（显微镜法）SWSL-XJ-01-1340

14嗜酸性粒细胞直接计数SWSL-XJ-01-1444

15血小板计数SWSL-XJ-01-1546

16尿本一周氏蛋白定性试验SWSL-XJ-01-1648

17凝血酶原时间（PT）测定SWSL-XJ-01-1750

18活化部分凝血活酶时间测定SWSL-XJ-01-1854

19血浆纤维蛋白原测定SWSL-XJ-01-1958

20凝血酶时间（TT）测定SWSL-XJ-01-2062

21血浆硫酸鱼精蛋白副凝试验SWSL-XJ-01-2166

22SWSL-XJ-01-22

D-二聚体检测68

23尿含铁血黄素定性试验SWSL-XJ-01-2371

24蔗糖水溶血过筛试验SWSL-XJ-01-2473

25酸溶血试验（Ham试验）SWSL-XJ-01-2575

3

26高铁血红蛋白还原试验SWSL-XJ-01-2677

27糖化血红蛋白HbAlcSWSL-XJ-01-2780

28血液流变学检测（旋转式）SWSL-XJ-01-2883

29白血病免疫分型标准操作规程SWSL-XJ-01-2987

30抗双链DNA抗体检测SWSL-XJ-01-3090

31抗ENA抗体测定（欧蒙斑点法）SWSL-XJ-01-3193

32抗精子抗体检测AsAbSWSL-XJ-01-3298

33抗子宫内膜抗体检测EmAbSWSL-XJ-01-33101

34SWSL-XJ-01-34

试剂贮存和配制区标准操作程序104

35紫外消毒标准操作程序SWSL-XJ-01-35

105

36消毒液配制使用标准操作程序SWSL-XJ-01-36

106

37普通冰箱使用标准操作程序SWSL-XJ-01-37

107

38移液器使用标准操作程序SWSL-XJ-01-38

108

39离心机操作标准操作程序SWSL-XJ-01-39

109

40冰箱维护和保养标准操作程序SWSL-XJ-01-40

110

41恒温水浴箱操作程序SWSL-XJ-01-41

111

42可移动紫外消毒车使用操作程序SWSL-XJ-01-42

112

43加样器校准标准操作程序SWSL-XJ-01-43

113

44温度计校准程序SWSL-XJ-01-44

114

45恒温培养箱操作程序SWSL-XJ-01-45

115

46紧急情况处理规程SWSL-XJ-01-46

116

47废弃物处理程序SWSL-XJ-01-47

118

48个人防护程序SWSL-XJ-01-48

119

49酒精棉球制备的标准操作规程SWSL-XJ-01-49

120

50玻璃仪器的使用、维护与清洁标准操作规程SWSL-XJ-01-50

121

51光学显微镜的使用规程SWSL-XJ-01-51

124

52检验程序的质量保证SWSL-XJ-01-52

126

53电泳仪操作维护规程SWSL-XJ-01-53

127

4

54临床标本采集运送接收程序SWSL-XJ-01-54

130

55临床标本保存处理程序SWSL-XJ-01-55

132

56末梢血采集作业指导书SWSL-XJ-01-56

133

57飞鸽牌离心机操作维护规程SWSL-XJ-01-57

134

58723分光光度计维护规程SWSL-XJ-01-58

136

59仪器故障时的标记放置标准操作程序SWSL-XJ-01-59

139

60实验室常用溶液的配制标准程序SWSL-XJ-01-60

140

5

修订页

序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期

1

2

3

4

5

6

7

8

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11

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16

17

18

19

20

21

6

文件编号：SWSL-XJ-01-01

XXX医院检验科血检室作业指导书版本/修订号：1/0

生效日期:20080501

主题内容

骨髓细胞形态检查第7页共140页

骨髓细胞形态检查

1.实验原理

骨髓细胞形态学检查主要用于观察骨髓涂片中细胞形态、数量等方面的变化，借以

了解骨髓造血功能状况。骨髓象检查对多数血液病及其他一些疾病的珍断、鉴别诊

断、疗效观察和预后判断具有重要意义。

2.标本采集：

1.取材部位成人一般取骼后、骼前上棘，其次为胸骨、棘突部位；2岁以下小儿可

穿刺胫骨，较大儿童的穿刺部位与成人相同。骨髓穿刺部位不同，细胞的数量利组

成可能有一定差异，对检查结果会有一些影响。再生障碍性贫血患者骨髓造血呈所

谓“向心”性分布，以胸骨穿刺为最佳，棘突次之，骼骨最差。骨髓取材过程中，

若遇取材不佳或干抽可换部位取材。

2.骨髓液采集吸取骨髓液量不宜过多，一般不超过0.2ml,不需抗凝，迅速置于

载玻片上。必要时可用EDTA-K?抗凝。

3.标本储存：取材后应立即推制成血涂片，并尽快送检。

4.标本运输：保持干燥，室温运输。

5.标本拒收标准：污染标本不能作测定。

6.实验材料：

1.瑞氏染液（A液）

（1）瑞氏染料0.1g

（2）甲醇（AR）60.0ml

瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成。将瑞氏染料放入清

洁干燥研钵里，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将己溶解的染料倒人棕色试

剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。配

好后放于事温下，一周后即可使用。新配染液效果较差，放置时间延长，染色效果

越好。久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油2-3ml,

除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。

2.pH6.8磷酸盐缓冲液（B液）

磷酸二氢钾（KHZPOD0.3g

磷酸氢二钠（NazHPO”）0.2g

7

加少量蒸储水溶解，再加至1000ml。

7.实验仪器：

7.1仪器名称：OLYMPUS显微镜

7.2仪器厂家：OLYMPUS

7.3仪器型号：OLYMPUSBX41

7.4骨髓细胞医学图像系统

8.操作步骤

1.骨髓涂片：

a.一般取未抗凝骨髓液迅速推片3-5张。若须进行细胞化学染色检查时，可再推

3-5张。若推片过程缓慢，骨髓液容易凝固，可影响检验质量。

b.骨髓涂片不宜太厚，头、体、尾应分明，便于观察不同类型细胞。

c.除片后迅速挥干，以免细胞变形。

d.取材良好的骨髓，涂片片膜粗糙，并易见骨髓小粒。再生障碍性贫血患者的涂片

上可见较多脂肪滴或小珠。

2.骨髓涂片染色：

a.国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐罗氏（Romanowsky）染色法为参考方法，

尚难推广。目前国内各临床实验室多以瑞氏（Wright）和姬姆萨（Giemsa）混合染色

（简称瑞•姬染色）法染血和骨髓涂片。

b.在新鲜骨髓涂片膜边缘较厚处用铅笔写明患者姓名及II期或编号，滴加染液3-5

滴于涂片上，盖满整个片膜，静置约Imin（室温高于25C时可适当缩短时间）：加

5-10滴磷酸盐缓冲液于片膜上并与染液混匀，染色约10-15min;用流水从涂片

一侧缓缓冲掉染液（勿先倒去染液）。涂片干燥后镜检。

2.骨髓涂片的显微镜检查：

a.低倍视野检查：（1）观察取材、涂片、染色情况：取材良好的标本可见骨髓小粒。

合格的涂片中细胞形态舒展、无变形。染色较好的涂片中，红细胞呈粉红色，白细

胞的核染紫红色、胞质染色鲜艳，形态清晰可辨。

b.判断骨髓增生程度：选择涂片膜厚薄适宜、细胞分布均匀的部位，根据红细胞和有

核细胞的大致比例确定骨髓有核细胞的增生程度，一般分为五级。

c.计数巨核细胞总数：用低倍镜计数涂片内全部巨核细胞，部分体积较小的巨核细

胞。（详见骨髓巨核细胞计数）

d.异常细胞筛在：在涂片的边缘、尾部或骨髓小粒周围，观察有无细胞体积较大或成

堆分布的异常细胞。如甘大异常组织细胞、霍奇金细胞（Reed-Slerberg细胞）、

巨大多核骨髓瘤细胞、转移帽细胞、戈谢细胞、尼曼-贝克细胞等。发现可疑细胞时

应在油镜下确认。

e.选择油镜检查：选择细胞分布均匀、无章叠、形态清晰的区域作为油镜竟检查区

域，一般以体尾交界处为宜。

8

2.骨髓细胞成像：

①.打开OLYMPUSBX41显微镜开关、打开电脑、打开数码照相机、打开打印机。

②.连接显微镜上的数码照相机；使用显微镜将骨髓形态调节至清晰；鼠标点击拍

摄并保存图片，在电脑桌面上选择懵髓分析超强版|打开,选择操作人员及输入密码

进入，点击惭建文档愉入患者资料,点击|填写报告愉入骨髓分类及骨髓细胞形态特

征。点击|图像分析|选择唇云］选中所中应患者的骨髓图片肝用,再次点击叵匹］选

择|预览/输出报留打印结果。

8.结果判断与分析

1.各系统骨髓细胞形态特征：（详见《全国临床检验操作规程第三版》P146-152

页）。

10.临床意义：

1.确定诊断造血系统疾病骨髓是人体的造血器官，造血组织出现病变可导致骨髓细

胞出现质和量的异常'，骨髓象检查对有些血液病具有决定性诊断意义，如急性白血

病、慢性白血病、巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血、恶性组织细胞病、多发性骨

髓瘤等而且还可对其进行分类、分型，指导治疗方案选择、观察疗放、判断预后等。

2.诊断某些类脂质沉积病这类疾病都具有特征性细胞形态学改变，骨髓象检查也具

有决定性诊断意义，如戈谢病、尼曼-匹克病、海蓝组织细胞增生症等，骨髓涂片中

可见到吞噬细胞中蓄积类脂质而形成特殊形态的戈谢细胞、尼曼•匹克细胞或海蓝

组织细胞等。

3.诊断某些感染性疾病骨髓中含有丰富的单核-吞噬细胞系统，能够捕捉侵入机体内

的病原微生物。如骨髓涂片查找疟原虫、黑热病原虫、弓形虫及真菌等，既可提高

阳性率又可明确临床诊断。

4.诊断恶性肿瘤骨髓转移骨髓是许多恶性肿瘤侵袭转移的好发部位，如肺癌、乳腺

癌、胃癌、前列腺癌、恶性淋巴瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤等发生骨髓转移时，

可在骨髓涂片中见到相应的肿瘤细胞。有时，某些肿瘤的发现可能是最早在骨髓中

找到了转移癌细胞。

5.协助诊断某些血液病及其相关疾病这类疾病多数有骨髓细胞质和量的异常，但需

结合其他临床资料才能作出诊断，如缺铁性贫血、溶血性贫血、骨髓增生异常综合

征、白细胞减少症、粒细胞减少症、粒细胞缺乏症、骨髓增殖性疾病、血小板减少

性紫癫、脾功能亢进等。

6.协助鉴别诊断某些血液病及其相关疾病临床上遇有发热、淋巴结、肝、脾肿大或

骨痛时，骨髓检查有助于鉴别是否由造血系统疾病引起。有些非血液系统疾病可有

血液学改变，如白细胞显著增高的“类白血病反应”，可通过骨髓象检查与慢性粒细

胞白血病鉴别等。

11.质量控制：每10份样本，抽两份样本进行室内工作人员比对分析，要求差异

9

在10%以内。

12.变异的潜在来源

12.1取材不当。

12.2涂片过厚或过薄，影响形态观察。

13.操作注意事项：

1.涂片要新鲜，涂片挥干后染色，如有特殊情况，一般不应越过1周。否则影响染

色质量。

2.染色时间长短除与气温有关外，也与细胞增生情况、染液性能有关。必要时可将

染色中的涂片在显微镜下观察，待颗粒清楚，核与胞质分明，着色满意后才终止染

色。

3.染色过深的涂片可用瑞•姬染液滴加于涂片上，马上冲洗。染色过浅的涂片可重

复染色一次。取材后，必须立即涂片。

14.参考文献：

1.叶应妩，王毓三，等，全国临床检验操作规程，第三版，中华人民共和国卫生部

医政司，2006

2.刘成玉主编.临床检验基础实验指导.第二版•人民卫生出版社，2003

操作人员部门主管质量负责人

姓名XXXXXXXXX

日期2008/5/01

10

文件编号：SWSL-XJ-01-02

XXX医院检验科血检室作业指导书版本/修订号：1/0

生效日期:20080501

主题内容

骨髓巨核细胞计数第11页共140页

骨髓巨核细胞计数

1.实验原理

用瑞氏染色法，对制备好的骨髓片进行染色，低倍镜下（必要时转油镜确认）

以1.5cmX3cm为单位面积，计数巨核细胞数，并加以分类。

2.标本采集：

2.1骨髓穿刺部分：一般取胸骨、棘突、骸骨前、崎或后崎等部分，两岁以内小儿

主张用胫骨穿刺。穿刺部分不同，取材可能有明显的差异，必要时可做多部位取材，

以便能得到更准确的分析数据。

2.2骨髓采集量：一般不超过0.2ml,否则易于稀释。

2.3骨髓取材满意的几项指标：

2.3.1抽取骨髓时，患者有特殊酸痛感。

2.3.2骨髓涂片应有骨髓小粒。

2.3.3显微镜下可见骨髓特有细胞成分，如巨核细胞、浆细胞、网状细胞、组织嗜

碱细胞、幼稚红细胞、幼稚粒细胞等。

3.标本储存：取材后应立即推制成骨髓薄片，并尽快送检。

4.标本运输：保持干燥，室温运输。

5.标本拒收的标准：重度血稀，无骨髓特有细胞成份标本。

6.实验材料：

1.瑞氏染液（A液）

（1）瑞氏染料0.1g

（2）甲醇（AR）60.0ml

瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成。将瑞氏染料放入清

洁干燥研钵里，先加少量甲爵，充分研磨使染料溶解，将己溶解的染料倒人棕色试

剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。配

好后放于事温下，一周后即可使用。新配染液效果较差，放置时间延长，染色效果

越好。久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油2-3ml,

除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。

2.pH6.8磷酸盐缓冲液（B液）

磷酸二氢钾（KHzPOj0.3g

磷酸氢二钠（NazHPO,）0.2g

加少量蒸储水溶解，再加至1000ml。

II

7.实验仪器：

7.1仪器名称：OLYMPUS显微镜

7.2仪器厂家：北京普利生公司骨髓细胞分析软件系统

7.3仪器型号：OLYMPUSCHK-F200A

8.操作步骤：

8.1骨髓片瑞氏染色：将制好的干燥骨髓涂片平置于染色架上，滴加瑞氏染色液A

液3-5滴使其迅速盖满骨髓膜，然后加瑞氏染色B液3-5滴，轻轻摇动玻片或用洗

耳球吹气使A、B染液充分混匀，染色1-2分钟（气温低或涂片较厚时可适当延长染

色时间），用自来水冲去染液，待干。

8.2巨核细胞计数：将瑞氏染色干燥后的骨髓片，用低倍镜计数巨核细胞，并按原

始巨核细胞、幼稚巨核细胞、颗粒型巨核细胞、产板型巨核细胞、裸核型巨核细胞

分类记录，计数面积以1.5cmX3cm为一单位面枳。

9.质量控制：每30份样本，抽两份样本进行室内工作人员比对分析，要求差异在

10%以内O

10.临床意义：

10.1参考值：巨核细胞参考值7-35个/1.5cmX3cm面积。分类：原始巨核细胞0,

幼稚巨核细胞0-0.05,颗粒型巨核细胞0.10-0.27,产板型巨核细胞0.44-0.60,

裸核型巨核细胞0.08-0.30。

10.2原始巨核细胞增多见于巨核细胞白血病（MQ,幼稚型巨核细胞比例增多见于

特发性血小板减少性紫癫的急性型，颗粒型巨核细胞增多比例增多见于特发性血小

板减少性紫癫的慢性型。巨核细胞减少见于巨核细胞系统再生障碍及某些白血病。

11.变异的潜在来源

11.1取材不当，骨髓成份被血液稀释。

11.2涂片过厚或过薄，影响巨核细胞计数。

11.3低倍镜下漏数小巨核细胞。

12.操作注意事项：

12.1骨髓取材禁忌症：血友病、严重凝血因子缺乏症。

12.1取材量不能过多，一般不超过0.2ml,以防血稀。

12.3取材后，必须立即涂片，因骨髓液中纤维蛋白原含量高，会很快凝固，影响

涂片。

12.4推好的髓片应在空气中摇动，使其尽快干燥，以免细胞变形。

12.5根据髓膜厚薄，细胞量多少及室内温度等把握好染色时间，使染色效果满意。

12.6镜检时循序检查切勿漏检，必要时用油镜确认。

13.参考文献

13.1叶应妩，王毓三，等，全国临床检验操作规程，第三版，中华人民共和国卫

生部医政司，2006

12

13.2刘成玉主编.临床检验基础实验指导.第二版•人民卫生出版社，2003

操作人员部门主管质量负责人

姓名XXXXXXXXX

日期2008/5/01

13

文件编号:SWSL-XJ-01-03

XXX医院检验科血检室作业指导书版本/修订号：1/0

生效日期:20080501

主题内容

过氧化物酶染色第14页共140页

过氧化物酶染色（Washburn法）

i.实验原理

粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，pox能分解H202释放

出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氟化钠结合，再进一

步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内。

2.标本采集

2.1病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性

疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

2.2标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液

2.3标本采集要求

2.3.1高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。

2.3.2临床上首选穿刺部位为骼后上棘；翻身困难，需多部位穿刺患者可选择骼前

上棘为穿刺部分。小于3岁的小儿还可选择胫骨头内侧为穿刺部位。

3.标本储存：室温避光处保存，若不能及时测定，可采用95%乙醇固定2分钟，

可保存数天。

4.标本运输：室温运输

5.标本拒收的标准：溶血、稀释标本不能作测定。

6.试剂

6.1试剂名称：血细胞pox染色试剂

6.2试剂生产厂家：上海太阳生物技术公司

6.3试剂组成

试剂1：poxI液（紫红色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

试剂2：poxH液（无色）2℃-8℃避光保存，有效期六个月。

试剂3：95%乙醇，室温避光保存。

试剂4：瑞氏染液，室温避光保存。

7.操作步骤

7.1新鲜涂片滴加I液数滴（覆盖血膜为宜），室温放置1分钟，勿冲洗即滴加II

液数滴，混合后室温放置5分钟，流水冲洗。

7.2滴加95%乙醇脱色，水洗后瑞氏染色，复染后镜检观察结果。

8.结果判断

14

8.1阳性一细胞内出现棕黄或蓝黑色颗粒沉淀物质，定位于胞质。

8.2阴性一细胞内无棕黄色或蓝黑色颗粒。

9.临床意义

9.1粒细胞系统呈集中状粗颗粒强阳性反应，单核细胞系统呈弥散状颗粒弱阳性反

应，部分原始单核细胞可呈阴性反应。网状细胞及吞噬细胞有不同程度的阳性。

9.2淋巴细胞系、红细胞系、巨核细胞系、浆细胞系等均为阴性反应。

10.操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度高。

11.方法局限性

11.1标本应新鲜，且未受其他化学物的污染。若标本采集后不能及时测定，可采

用95%乙醇固定2分钟后，可保存数天。

11.2双氧水（1［液）最适浓度为0.05mol/L左右，浓度过高，将会抑制酶的活性。

12.参考文献

12.1叶应妩，王毓三，等，全国临床检验操作规程，第三版，中华人民共和国卫

生部医政司，2006

12.2刘成玉主编.临床检验基础实验指导.第二版•人民卫生出版社，2003

操作人员部门主管质量负责人

姓名XXXXXXXXX

日期2008/5/01

15

文件编号：SWSL-XJ-01-04

XXX医院检验科血检室作业指导书版本/修订号：1/0

生效日期:20080501

主题内容

糖原染色第16页共140页

糖原染色

1.实验原理

过碘酸是氧化剂，使含有乙二醇基（一CHOH—CHOH）的多糖类物质（糖原粘多

糖、粘蛋白、糖蛋白及糖脂等）氧化，形成双醛基（一CHO—CHO）。醛基与雪夫试剂

中的无色品红结合，使无色的品红变成紫红色化合物，定位于含有多糖类的细胞内。

2.标本采集

2.1病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。凝血因子严重缺陷引起的出血性

疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

2.2标本种类：新鲜抽取的骨髓穿刺液

2.3标本采集要求

2.3.1高压消毒的穿刺针，一次性无菌手套和抽取骨髓液的无菌注射器。

2.3.2临床上首选穿刺部位为器后上棘