寄生虫课件 寄生原虫学习资料

兽医原生动物虫学兽医原生动物学研究寄生于动物体的原生动物及其引起的疾病和防治的一门科学。原生动物又称原虫，是单细胞动物，能由一个细胞进行和完成生命活动的全部功能。原生动物寄生于动物的腔道、体液、组织和细胞内，可致病或不致病。原虫的形态和生活史1原虫的发现与构造17世纪列文虎克Leeuwenhoek（1632.10.24－1723.08.26）发明显微镜，并发现兔肝球虫和贾第鞭毛虫1888年巴贝斯氏发现罗马尼亚流行的巴贝斯虫病（血红蛋白尿）的病原体1893年史密斯证明该虫由蜱传播，后他又和基尔本氏发现双芽巴贝斯虫的生活史1897年罗斯氏证明蚊子为鸟疟原虫的媒介，阐明了疟原虫的生活史全世界已发现45000种原虫，其中一些为寄生原虫2Morphology大小，形状1-30µm细胞核、细胞质、表膜67891.结肠小袋虫2.毛滴虫3.球虫卵囊

4.伊氏锥虫5.微浆体6.双芽梨形虫

7.泰勒梨形虫8.龚地弓形虫

9.利什曼原虫原虫形态内质外质胞核食物泡图1－2原虫构造模式图3虫体构造表膜Pellicle:三层结构的单位膜

由外膜和紧靠其下方的微管或原纤维组成表膜复合体使虫体保持一定的形态和完整性参与虫体的摄食、排泄、感觉、运动有很强的抗原性可以不断更新：如锥虫3虫体构造胞质

Cytoplasm基质

Matrix：蛋白质

ectoplasm-外质：凝胶状，硬度，形状

运动、营养、呼吸、摄食、排泄、感觉

endoplasm-内质：

溶胶状，代谢，含有细胞核和相当数量的食物泡、空泡、贮存物质等。细胞器

OrganellesEndoplasmicreticulum：内质网Golgibody：高尔基体Mitochondria：线粒体Lysosomes：溶酶体Kinetoplast:动基体–特化的细胞器，运动细胞器。

3虫体构造运动细胞器是分类的依据鞭毛：胞质的丝状延伸部分，鞭毛虫，锥虫纤毛：短而细，纤毛虫伪足：外质暂时突出的部分，阿米巴波动脊：孢子虫，依靠波动脊在液体中滑行子孢子、裂殖子和动合子胞核Nucleus：生存、繁殖核膜根据染色质的多寡和分布情况

泡状核染色质少，分散致密核染色质多，均匀而致密3虫体构造4Lifecycleofprotozoa

无性生殖二分裂法

binaryfission出芽生殖

budding：胞核先分裂成大小不等但仍相连接的2个部分，原生质随着核的分支而向核的周围集中，形成2个芽状突起，而后分裂成2个新个体。裂体生殖

multiplefission

胞核先分裂多次，然后各个核周围的胞质紧缩而形成数个新个体。裂殖体，裂殖子4Lifecycleofprotozoa有性生殖

接合生殖conjugation

2个形态相同的原虫一时性的结合在一起，互相交换核质，然后分开，各自分裂成新的个体。

配子生殖

gametogony

裂殖子–大配子体、小配子体–配子–合子–子孢子、孢子囊（孢子生殖：合子-孢子体-子孢子）A.一个宿主体内完成B.两个宿主体内完成传播者：媒介生物性传播

机械性传播裂殖生殖:裂殖体(裂殖子)配子生殖:配子母细胞(大配子,小配子)孢子生殖:子孢子4Lifecycleofprotozoa孢子化卵囊肌胃饲料和饮水等机械、酶释放子孢子小肠胰蛋白酶、胆汁子孢子释放得到促进盲肠：上皮细胞固有层滋养体(trophozoite)4.1艾美耳属裂殖生殖（schizogony）裂殖体（schizont）第一世代裂殖子（merozoite）

宿主细胞破坏（第2.5～3天）子孢子进入肠腔上皮细胞发育为第2代裂殖体、裂殖子宿主细胞破坏进入肠腔（第5天）第3代裂殖体大配子小配子合子卵囊（oocyst）排出体外感染后7天发育为具有感染性的卵囊直接发育型无需中间宿主三个阶段无性生殖：寄生部位上皮细胞裂殖生殖有性生殖：配子生殖大配子（雌性）小配子（雄性）合子（上皮细胞）孢子生殖：合子卵囊孢子囊和子孢子（感染性卵囊）内生性发育外生性发育外界环境在兔体内在外界环境12345678910111213141516171718192021艾美尔球虫发育史1～6.无性繁殖

7～17.有性繁殖

17～20.发育成侵袭性卵囊

21.孢子体游出5原生动物的分类动物界原生动物门Sarcomastigophora肉足鞭毛亚门

锥虫科、锥虫属──TrypanosomaevansiApicomplexa顶器亚门

Sporozoa孢子虫纲

Piroplasmea梨形虫目：巴贝斯虫科

泰勒虫科

Eucoccidia真球虫目：艾美耳科─球虫

隐孢子虫科–隐孢子虫

肉孢子虫科─弓形虫属

住肉孢子虫属Ciliophora纤毛虫亚门结肠小袋纤毛虫Toxoplasmagondii弓形虫ToxoplasmagondiiItsgenusname,toxoplasma,isderivedfromtheGreek"toxon,"meaningarcorcrescentshape.

Itsspeciesname,gondii,isderivedfromitsdiscoveryhost,hamster-likerodentknownasthegundi（栉趾鼠））.Obligateintracellularparasite发现历史NicolleandManceaux(1908)北非梳趾鼠体内Splendore（1908）巴西实验室家兔体内WolfandCowen（1937）人体内Dubey（1970）发现生活史于恩庶（1955）首次发现兔和猫弓形虫1977年上海发现猪的无名高热病ClassificationProtozoa,Apicomplexa顶复亚门Sporozoasida孢子虫纲Eucoccidiorida真球虫目Toxoplasmatinae弓形虫亚科

Toxoplasma弓形虫属

Toxoplasmagondii

刚地弓形虫

Hosts:

Definitivehosts:Membersofthecatfamily(Felidae)

Intermediatehosts:allwarmbloodedanimalsLifeCycle终末宿主有性繁殖中间宿主无性繁殖Morphology速殖子：Tachyzoite缓殖子：Bradyzoite卵囊/孢子：oocyst(Sporozoite)配子体：Gametocyte:

macrogamete,

microgameteTachyzoitesinlymphtissueTachyzoites:fastreplicating,responsibleforacutetoxoplasmosis.Size:2-4μmX4-7μmTachyzoitesinascites速殖子超微结构电镜下虫体表膜分两层；核位于虫体后半部，核仁位置不定，核前沿有高尔基体；前端有类锥体及极环，膜下微管起于极环，通常有22条；棒状体8-10条；线粒体1至数个。IntracellulartachyzoitesofToxoplasmagondii.Parazitohporousvacuole:homeforparasitesreplication,cancontain>64parasites.

Bradyzoites:slowreplicating,encagedintissuecysts,formedduringchronicinfection.Mainlyfoundinthebrainandmuscletissues.

组织包囊：tissuecyst,直径5–50μm，cancontain

>1000bradyzoitesTissuecystsIncatintestinalepitheliuma-c:merozoited-f:schizontMicro-gametesIncatintestinalepitheliumTheoocystcontainstwosporocysts,eachofwhichcontainfoursporozoites.OnlycatswillproduceToxoplasmaoocysts;approximatediameter=10µm.

感染不同阶段虫体，在猫体内的潜隐期也不同，摄入包囊后一般3~10天即有卵囊排出，而感染孢子化卵囊则需要18天以上；猫食入速殖子后也能产生卵囊，但潜隐期的变化范围较大(一般13天以上才排出卵囊)。

卵囊在适宜的环境条件下，经1~5天发育为具有感染性的孢子化卵囊。UnsporulatedoocystSporulatedoocyst>60%40-60%20-40%10-20%<10%Pappasetal,IJP,2009Toxoplasmainfection---ubiquitous全世界抗体阳性率20-50%,有些地区高达90%我国0.7-38.6%

广泛流行原因：生活史多期具感染性,抵抗力强中间宿主广泛，与人类关系密切能在中间宿主间传播卵囊存活的时间长,环境抗性好，可被节肢动物和蚯蚓机械性传播；包囊对冰冻和干燥抵抗力差，4度能存活68天。在宿主体内存活的时间长EpidemiologyToxoplasmosisAcuteinfection:typicallycausesamild,flu-likeillness(fever,lossofappetite;unwillingnesstostand;huddlingtogether)ornosymptomsatallinhealthyindividuals,butcancauseseriouscomplicationsinpatientswithcompromisedimmunesystems---AIDSpatients,organtransplantationpatientsChronicinfection:life-long,parasitesformcystsinbrainandmuscles.Canbeactivatedtoacuteinfectionwhenimmunefunctiongoesdown.

behavioral/psychologicaldisorders---risk-takingpersonality,suicide,schizophrenia…Congenitaltoxoplasmosis:firstinfectionduringpregnancyleadstoinfectedfetus,causingabortion,prematurebirthandbrain/nervoussystemdamagesininfants.急性感染临床症状(猪)潜伏期3-7天体温40-42℃，稽留7-10天，病猪精神沉郁食欲减少至废绝，但常饮水，伴有便秘或下痢呼吸急促，呈腹式呼吸或犬坐式呼吸；流清鼻涕；眼内出现浆液性或脓性分泌物鼻镜干燥，被毛逆立，结膜潮红。在病的后期，病猪体表，尤其是耳、下腹部、后肢和尾部等因淤血及皮下渗出性出血而呈紫红斑呼吸困难，并常因呼吸窒息而死亡。怀孕母猪高热、废食、精神萎顿和昏睡。死胎、流产、弱仔、怪胎。母猪常在分娩后迅速自愈。Congenitalinfection死胎、流产、弱仔、怪胎孕期弓形虫检查OcularToxoplasmosis先天性弓形虫眼病:有小眼球无眼球、先天性无虹膜、脉络膜缺损、玻璃体动脉残存、视神经萎缩、先天性白内障和斜视等炎症损害引起视网膜脉络膜炎OcularToxoplasmosis后天性弓形虫眼病:局限性渗出性视网膜脉络膜炎，患眼视力下降，眼底病变多位于黄斑部或视盘周围，病灶处视网膜灰白色水肿，境界不清，2～3个月后视网膜水肿渗出逐渐消退，最后呈瘢痕性病灶.并发症包括继发性青光眼、黄斑囊样水肿、视网膜血管阻塞视网膜新生血管形成、脉络膜新生血管形成等，可致视力丧失。BehaviorchangescausedbyToxoplasmachronicinfectionSchizophreniarisk-takingpersonality,suicideHostcells’immunecontrolofToxoplasmatachyzoitesImmuneevasionmechanismsOtherimmuneevasionmechanisms组织学隔离胞内寄生释放可溶性抗原

代谢抑制DiagnosisSabine-FeldmanDyeTestSerum+Toxoplasmacells+complement+methylenebluePositive:noTOXOstainNegative:BlueTOXOcellsDiagnosisSerologicaltests

ELISAAgglutinationTest

DiagnosisDetectionofT.gondiiDNA

RegularPCRLAMPPCRLAMPPCRLAMP

PCRDiagnosis:PathogenexaminationObservationofparasitesinpatientspecimens,suchasbronchoalveolarlavagematerialfromimmuno-compromisedpatients,orlymphnodebiopsy.Animalinoculation治疗1．磺胺嘧啶（SD）+甲氧苄氨嘧啶（TMP）2．磺胺嘧啶+乙胺嘧啶3．长效磺胺4．吡嗪磺+甲氧苄氨嘧啶DHPS:二氢叶酸合成酶DHFR-TS:四氢叶酸还原酶PreventionSanitationProhibitionofcat,mouseSerologicalmonitoringdrugprophylaxiPreventinfectionfromfoodPeelorwashallfruitsandvegetablesthoroughlybeforeeating.Freezemeatforseveraldaysatsubzerotemperaturesbeforecooking.Tissuecystsrarelysurvivefreezingatthesetemperatures.Avoideatingraworundercookedmeat,andnevertastemeatbeforefullycooked.Usehot,soapywatertowashhandsoranythinginthekitchenthatcontactsrawmeat,poultry,seafoodorunwashedfruitsandvegetables.Avoiddrinkingunpasteurizedmilk.PreventinfectionfromenvironmentChangeanddisposeofcatlitterdaily.Oocystsincatfecestakeatleastadaytosporulateandbecomeinfectiousaftertheyareshed.Weargloveswhengardeningorwhenincontactwithsoilorsand,asinfectiousoocystsfromcatfecescanspreadandsurviveintheenvironmentformonths.Avoiddrinkinguntreatedwater.Coveroutdoorsandboxeswhennotbeingused.猪场弓形虫病预防1畜舍应经常保持清洁，定期消毒2猪场内禁止养猫，并经常灭鼠3血清学监测4药物预防RiskfactorsforhumaninfectionExposuretoorconsumptionofraworundercookedmeatDrinkingunpasteurizedgoatmilkContactwithsoilEatingunwashedrawvegetablesorfruitsCleaningcatlitterboxesHostcellinvasionbyToxoplasma

-amodelMorrissetteandSibley,2002HelicalglidingHost-cellinvasionHostcellinvasionbyToxoplasma-amodel弓形虫重要蛋白质的功能虫体表面蛋白(SAG)弓形虫表面蛋白作为弓形虫的主要表面抗原（surfaceantigen，SAG）被宿主免疫系统所识别，而成为杀伤虫体的主要部位。这些抗原主要介导虫体与宿主的粘附。ROP

此是由棒状体这种特殊的细胞器释出，也是一类蛋白质家族，共有11种。对棒状体蛋白研究较多的主要是ROP1和ROP2。棒状体蛋白定位于棒状体这种特殊的细胞器，分为两类：ROP：位于棒状体后段肥大部分，包括ROP激酶(ROP17,ROP18,ROP16…),假激酶(ROP5…),主要用于抵御宿主细胞的免疫杀虫机制等RON：位于棒状体前段，主要参与虫体对宿主的入侵。弓形虫重要蛋白质的功能致密颗粒蛋白(GRA)这是弓形虫致密颗粒细胞器内所含的蛋白质成分,是弓形虫分泌排泄抗原的重要组成部分，在修饰调理弓形虫纳虫泡结构中以及宿主细胞的基因表达中起重要作用，又称为致密颗粒抗原（densegranulesantigen，GRA）。弓形虫重要蛋白质的功能微线体蛋白（micronemalprotein，MIC）

这是由弓形虫虫体前端散布的微线体分泌的、介导对宿主细胞的粘附与入侵的粘性蛋白。主要可分为两类：

一类为具有跨膜性质的微线体蛋白，包括MIC2、MIC6、MIC7、MIC8、MIC9和MIC12等，典型的全长跨膜MIC一般含有信号肽、黏附区域、跨膜区域、分类拣选信号等；

另一类为不具有跨膜特性的可溶性黏附蛋白，如MIC1、MIC3、MIC4和MIC5等，这一类蛋白质在虫体内往往与其他跨膜蛋白形成复合体而被转运、加工、分泌和发挥黏附特性。弓形虫重要蛋白质的功能本实验室在弓形虫研究方面所开展的工作分离了8株弓形虫地方分离株，并进行了抗性研究弓形虫病流行病调查弓形虫SAG1、ROP2、MIC3和GRA6基因的克隆及其原核表达利用上述基因的原核表达产物建立了间接ELISA方法利用MIC3的原核表达产物建立了LAT方法弓形虫感染的PCR鉴定方法DNA疫苗的研究家畜运输应激对弓形虫慢性感染活化的影响本室关于弓形虫病研究的主要内容

—诊断与预防保护力评价1.弓形虫诊断研究1.1诊断—病原学(PCR)敏感性&特异性PCR的应用

对多种动物弓形虫的检测

对发生流产疫情奶牛场弓形虫病的检测LAT的应用特点不足弓形虫疫苗---现状疫苗种类特点不足核酸疫苗保护力强持久稳定基因工程疫苗保护力强生产过程复杂技术难度大

弓形虫疫苗---现状弓形虫疫苗---现状灭活的虫株虫体初提物重组蛋白---SAG1，GRA1，ROP2...DNA疫苗---MIC2,HSP70,GRA4...减毒的基因敲除虫株---SAG1，BAG1，ROP1...

---CPSII商业化的疫苗---减毒活体疫苗（TOXOVAX)。启示不能完成生活周期的突变虫株（比如不能形成缓殖子）或许能作为活体疫苗Stress缓殖子的分化发育具体方法1用CRISPR/CAS9进行全基因组筛选，找出对缓殖子分化发育有重要影响的基因。验证目标基因的功能。老鼠体内，急性Vs慢性感染，表达差异〉5倍。411个基因体外，速殖子Vs缓殖子，表达差异〉3倍。287个基因148个基因具体方法2：分析已有的基因表达数据库具体方法3Stress缓殖子的分化发育在缓殖子期特异表达致死基因，杀死缓殖子以阻断缓殖子分化和慢性感染的形成。3种可能的药物靶标寄生虫必须的代谢酶/途径，宿主细胞里不存在或者不重要---抑制靶标的药物。寄生虫里活跃的酶/途径，宿主细胞里不存在---可以将无毒的药物前体转化成有毒的药物以杀死寄生虫。宿主细胞里不必须的，但对寄生虫存活非常关键的途径---抑制靶标的药物。伊氏锥虫病又称苏拉(Surra)病，是由伊氏锥虫寄生于马属动物、牛、骆驼和犬等家畜体内的血液和造血器官所引起的进行性消瘦、贫血、黄疸、发热和心机能障碍为特征的动物原虫病。马属动物发病急，死亡率高。其它动物多呈慢性过程。Pathogen

：Trypanosomaevansi大小：18-34×1-2μm平均24×2μm细长柳叶形，前端比后端尖点状动基体生毛体–鞭毛–游离鞭毛长6μm游离鞭毛Freeflagellum波动膜Undulatingmenbrance核nuclus动基体kinetoplastPathogen

：Trypanosomaevansi大小：18-34×1-2μm平均24×2μmlifecycle宿主内(造血脏器、血液、淋巴液)→吸血昆虫（机械性传播）→新宿主宿主体内行纵二分裂法传播者：虱蝇、虻、螯蝇(采采蝇)生存：虻体内33-44h螯蝇22h3h内具感染性infective伊氏锥虫病Epidemiology1.易感动物

家畜中，易感顺序为：马、骡、犬>驴、骆驼>水牛、黄牛、牦牛但以水牛带虫最为严重

实验动物小白鼠>大白鼠、猫>家兔、豚鼠

野生动物：地鼠等

传染来源：带虫动物：水牛可带2-3年，骆驼5年3.途径：机械传播虻类：5科80多种蝇类：4属6种4.发病季节

a.与昆虫一致5-10月份

b.冬季1-3月份体质差、带虫动物发病5.动物年龄：青年>幼年6.地理分布亚洲、非洲我国：南方及西北华北、东北很少EpidemiologyPathogenesis虫体繁殖肝脏低血糖乳酸增加

CNS体温增高、机能障碍

毒素网状内皮S红细胞溶解贫血黄疸心肌心肌能障碍抗原脱落免疫复合物水肿坏死

ClinicalsignsA.马属动物带呈急性经过(1)Latentperiods4→7dT↑400C间歇热，稽留数日，经短时间歇，再行发作。(2)发热期间，R频数，P↑，尿量少，尿色深黄，粘稠，间歇期间，症状缓解。(3)反复数次发作后，体表水肿，结膜、眼脸黄染，精神沉郁、消瘦。(4)血液学变化：RC急剧↓最低200万左右，Hb减少至30%，血沉加快。B.牛

多呈慢性经过(1)Latentperiods6-12d，不定期的间歇热，最高可达410C，间歇2d至数月不等。(2)病牛消瘦、体表干枯、皮肤龟裂、结痂；(3)精神沉郁，四肢无力，走路摇晃(4)妊娠牛流产、死胎；所产犊牛有因胎盘感染而于生后死亡。(5)RC↓至300万左右，Hb↓50%(6)急性型多发于春耕和夏收期间的肥壮牛及寒冬季节，机体抵抗力下降时。Clinicalsigns犬：急性、致死性，常见症状–间歇热、头部、腿和腹壁水肿，类似狂犬病的神经症状。猪：无症状或温和型症状山羊：慢性过程鹿：慢性过程，水肿、贫血、消瘦、神经症状骆驼：类似于马，慢性常见

被毛干枯、脱落，眼结膜充血淤血

黏液或脓性分泌物。驼峰萎缩，

淋巴结肿大，腹下四肢水肿。Diagnosis(一)临床症状(二)血液学查虫：多次检查

A.涂片检查：薄血膜和涂片用姬姆萨染色

B.集虫检查：红细胞压积管离心技术(三)血清学反应a.对流免疫电泳b.补体结合反应c.McAb-ELISA(四)动物接种小白鼠：易感，但耗时。(五)鉴别诊断

A.马传贫血液学无虫

B.血孢子虫病查虫Diagnosis治疗A．萘磺苯酰脲俗称拜耳205，又称那嘎诺尔，英国产为安锥波剂量与用法：马、牛12mg/kg

配成10%溶液iVB.甲基硫酸喹嘧胺俗称安锥赛，抗锥灵我国已生产

5mg/kg10%溶液

皮下注射C.血虫净俗称贝尼尔

3.5mg/kg5%深部imD.治疗注意事项：

(1)药量要足，否则易产生抗药性

(2)观察期要长，防止过早使用引起复发(3)2种以上药物配合使用疗效好预防

A.药物预防

1.安锥赛预防盐，一次3-3.5个月

2.拜耳205治疗，一次1.5-2个月

B.消灭媒介

C.隔离病原，严格检疫人畜共患寄生原虫病---

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)病原是真球虫目隐孢子虫属Cryptosporidium寄生于人、牛等家畜胃肠道上皮细胞，可引起犊牛和羔羊严重腹泻和禽类严重呼吸道症状为特征的一类寄生原虫病。隐孢子虫在艾滋病（AIDS）病人中的感染率高达48%。隐孢子虫是一种世界性分布的严重危害人和动物健康的人兽共患寄生虫病。隐孢子虫--儿童杀手PathogenCryptosporidiumC.parvum：微小C.andersoni：安氏C.muris：小鼠C.meleagridis：火鸡C.bailayi：贝氏C.suis：猪隐孢子虫有多个种种名主要宿主卵囊长度（μm）卵囊宽度（μm）卵囊长/宽C.muris（鼠隐孢子虫）啮齿、哺乳类动物8.0~9.2（8.4）5.8~6.4（6.2）1.25~1.59（1.35）C.parvum（微小隐孢子虫）哺乳动物4.8~5.6（5.2）4.2~4.8（4.6）1.04~1.33（1.16）C.wrairi（魏氏隐孢子虫）豚鼠4.8~5.6（5.4）4.0~5.0（4.6）1.04~1.33（1.17）C.felis（猫隐孢子虫）猫3.2~5.1（4.6）3.0~4.0（4.0）1.15C.andersoni（安氏隐孢子虫）反刍动物6.0~8.1（7.4）5.0~6.5（5.5）1.07~1.50（1.35）C.canis（犬隐孢子虫）犬4.8~5.6（4.95）4.3~4.9（4.7）1.05C.hominis（人隐孢子虫）人类4.4~5.9（5.2）4.4~5.4（4.86）1.0~1.09（1.07）C.suis（猪隐孢子虫）猪4.48~5.1（4.6）4.17~5.（4.2）1.0~1.1（1.09）C.bovis（牛隐孢子虫）牛4.76~5.35（4.9）4.17~4.76（4.6）1.06C.fayeri（费氏隐孢子虫）有袋类动物4.5~5.1（4.9）3.8~5.0（4.3）1.02-1.18（1.14）C.meleagridis（火鸡隐孢子虫）火鸡，人类4.5~6.0（5.2）4.2~5.3（4.6）1.00~1.33（1.13）C.baileyi（贝氏隐孢子虫）鸡，火鸡6.0~7.5（6.6）4.8~5.7（5.0）1.05~1.79（1.33）C.galli（鸡隐孢子虫）雀类，鸡8.0~8.5（8.25）6.2~6.4（6.3）1.25~1.37（1.30）C.serpentis（蛇隐孢子虫）蛇类，蜥蜴5.6~6.6（6.2）4.8~5.6（5.3）1.04~1.33（1.16）C.varanii

(C.saurophilum,蜥蜴蛇隐虫）蜥蜴，蛇类4.4~5.6（5.0）4.2~5.2（5.7）1.04~1.12（1.09）C.molnari（摩氏隐孢子虫）海鱼3.23~5.45（4.7）3.02~5.04（4.4）1.00~1.71（1.05）C.scophthalmi（菱鲆隐孢子虫）比目鱼3.7~5.03（4.44）3.03~4.69(3.91)1.05~1.34（1.14）FromXiao,2004卵囊呈圆形或椭圆形，囊壁光滑，其上有裂缝。无微孔、极粒和孢子囊。每个卵囊内含有4个裸露的香蕉形子孢子和1个残体，残体由1个折光体和一些颗粒组成。Cryptosporidium:Anintracellular,

butextracytoplasmicparasite虫体寄生于宿主粘膜上皮细胞表面微绒毛刷状缘内带虫空泡中，带虫空泡来源于宿主上皮细胞的微绒毛，直接与宿主细胞的胞浆膜相连。虫体与宿主细胞相融合，融合区的电子密度较高，位于基部的虫体表膜反复折叠形成板层状的外观，此为营养器。奶牛隐孢子虫镜检结果分离纯化的微小隐孢子虫卵囊40×

分离纯化的安氏隐孢子虫卵囊40×CryptosporidiumspeciesaretinyparasitesEnvironmentalstage(oocysts卵囊):4-5

mInvasivestages(sporozoites子孢子&merozoites裂殖子):~1x4-5

mLifecycle脱囊excystation裂殖生殖

schizogonymerogony配子生殖

gametogony受精fertilization卵囊形成oocystformation孢子生殖

sporogony隐孢子虫生活史---能在一个宿主中完成薄壁型卵囊：自体感染厚壁型卵囊：排出体外EpidemiologySusceptiblehost：儿童、免疫抑制病人、牛、羊、马、犬、猫，150多种哺乳动物和人；30多种鸟类、淡水鱼和海鱼，57种爬行动物。不具有很明显的宿主特异性。Routeoftransmission：peroralinfection，也可经空气传播。Infectivesource：oocyst对外界有很强的抵抗力，50%以上的氨水和30%以上的福尔马林作用30分钟才能杀死卵囊。Prevalence：全球性分布，犊牛感染率高达80%；人隐孢子虫病在60多个国家都有报道。欧美1-3%，亚洲5%，非洲10%。奶牛感染的季节性在1－12月中隐孢子虫卵囊检测的阳性率

24%8.3%奶牛感染的日龄差别17.28%7.5%%猪感染的日龄差异不同日龄猪的感染率日龄Days%%%不同月份猪隐孢子虫感染率猪感染的季节性差异月份上海奶牛隐孢子虫虫种的初步鉴定虫体

形态与已公布序列的比对结果小鼠接种RFLP

结果A与微小隐孢子虫99.2%可扩增虫卵(3∕10)不能被限制性内切酶EcoT14Ⅰ切开B与安氏隐孢子虫同源性达98.4%不可扩增能被限制性内切酶EcoT14Ⅰ切开Pathogenesis改变寄居的宿主细胞活动从肠管吸收营养物质损伤肠道微绒毛数量减少体积变小成熟的肠细胞脱落双糖酶活性降低乳糖和其他糖进入大肠降解促进细菌过度生长形成挥发性脂肪酸改变渗透压或在肠腔积累不吸收的高渗营养物质腹泻Clinicalsigns牛肠型隐孢子虫病：犊牛腹泻diarrhea伴随昏睡、食欲不振inappetence、发热fever、脱水dehydration；继发轮状病毒和冠状病毒感染。牛胃型隐孢子虫病：皱胃处、青年牛或成年牛产奶下降，血浆胃蛋白酶原浓度升高，消瘦，无腹泻症状。Clinicalsigns禽类隐孢子虫病：感染鸡、鸭、火鸡、鹌鹑等精神沉郁、嗜睡、厌食、体重减轻、咳嗽、打喷嚏、咯咯叫及呼吸困难等。Diagnosis生前诊断：粪便集卵法，油镜下观察死后诊断：刮肠粘膜涂片，姬姆萨染色或齐尼氏染色Immunologicandmolecularbiologictechniques

IFT、ELISA，、PCR动物接种齐一尼氏法：涂片、干燥、火焰固定，用稀释石炭酸复红液染色10分钟，水洗，再用0.5％的醋酸处理，不超过30秒钟，充分水洗，用1％美兰轻度复染20秒钟，水洗、干燥、镜检。绿色背景上红色的虫体DiagnosisNestedPCR-RFLP建立根据GenBank上公布的隐孢子虫18SrRNA基因进行引物设计隐孢子虫卵囊的消化和基因组DNA提取PCR产物DNA片段的纯化、克隆、重组质粒的鉴定

测序及序列分析

Nested-PCR

敏感性、特异性实验

RFLP酶切

安氏隐孢子实时荧光定量PCR检测方法TaqMan探针法引物：F：5‘-attacgtccctgccctttg-3’，R：5‘-ttgttacgacttctccttcctct-3’，安氏隐孢子虫特异性TaqMan探针

（5‘-(FAM)cagtagcaaatacatagcaagggaagtttc(TAMRA)-3’。特异性

TaqMan探针法：牛源安氏隐孢子虫（C.andersoni）能够扩增出曲线，C.parvum、鸡贝氏隐孢子虫、弓形虫、新孢子虫和大肠杆菌均无扩增曲线。标准曲线Ct值与质粒标准品的5－1×106拷贝/µl范围内呈现良好的线性关系敏感性试验发现，此技术可以检测到5个拷贝的质粒稀释品1.安氏隐孢子虫2.微小隐孢子虫3.鸡贝氏隐孢子虫4.弓形虫E5.新孢子虫6.大肠杆菌

Treatment

隐孢子虫的治疗尚无理想药物加强卫生和提高免疫力

Prevention综合性预防措施：减少或预防卵囊的传播64.2ºC5min，72.4ºC1min巴斯德消毒器：71ºC5/10/15s水溶性或气体氨、过氧化氢消除卵囊感染性臭氧ozone：水中的卵囊免疫抑制病人应避免与任何湖水、溪水接触，不与幼龄动物接触。迁移动物到清洁环境，注意粪便的有效处理和环境卫生措施。

新孢子虫病

(Neosporosis)病原是球虫目新孢子虫属的犬新孢子虫（Neosporacanium），寄生于犬、羊、牛、马等家畜体内中枢神经系统centralnervoussystem、肌肉muscle、肝liver、脑brain及其它内脏组织，可引起致死性原虫病，并可致孕畜流产或死胎，新生儿四肢运动障碍和神经系统疾病。

Pathogen

Neosporacanium速殖子呈卵圆形，新月形或小球形，依分裂阶段而不同。大小为：3-7μm×1-5μm

寄生于神经细胞、巨噬细胞、肌细胞、肝细胞，肾小管上皮细胞等典型细胞器均与弓形虫速殖子相同：3层质膜，22根膜下微管，2个顶环，1个类锥体，1个极环，150个微线体，8-12个前棒状体和4-6个后棒状体，1个高尔基复合体，1-3个线粒体，内质网，核及核仁。2025/5/9137致密颗粒棒状体微线体新孢子虫速殖子新孢子虫缓殖子棒状体致密颗粒(引自SpeerCA,1999)顶环质膜透射电镜照片牛外周血白细胞接种Vero细胞1h内观察虫体培养102天时观察分离的虫体在显微镜下的观察

Pathogen

组织包囊呈圆形或卵圆形，直径107μm，仅见于中枢神经系统。囊壁光滑，厚约4μm，呈分支状类小管结构。慢殖子细长，6-8μmx1-1.8μm,其内细胞器与速殖子基本一样，仅棒状体数量少，支链淀粉颗粒更多。新孢子虫小鼠脑涂片流产胎牛脑组织包囊

Pathogen

卵囊在犬科动物肠道中形成卵囊直径10-11μm，孢子化时间24h.孢子化卵囊内含2个孢子囊，每个孢子囊内含4个子孢子，形态与弓形虫卵囊相似。

Lifecycle在终末宿主体内有速殖子、组织包囊、卵囊；犬既是中间宿主又是终末宿主。虫体在中间宿主组织内有速殖子和囊性病原体（组织包囊）两种形式。中间宿主体内速殖子寄生于细胞内，通过内出芽生殖方式繁殖。感染神经细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、血管内细胞、肌细胞、肾小管上皮细胞、肝细胞和其它体细胞。组织包囊主要见于中间宿主的中枢神经系统，囊壁厚度达4μm。薄壁组织包囊（0.3-1.0μm）见于自然感染犬新孢子虫的牛和犬的肌肉。Epidemiology终末宿主：犬和狐狸中间宿主：牛、绵羊、山羊、马、鹿传播途径：经乳、经口、垂直传播食用胎膜可能是犬感染的途径世界性分布，对牛的危害严重，是牛流产的主要原因。牛血清抗体80%阳性牛体内垂直传播

Pathogenesis垂直传播，导致流产或胎儿运动障碍和神经系统疾病Clinicalsigns病犬厌食症，吞咽困难，四肢乏力，运动失调，视觉反应降低；神经症状根据虫体寄生部位而不同，后肢比前肢更严重，时常呈强直状态；死胎或产出弱犬。牛流产，5-6个月妊娠期多发，春末秋初多发。犊牛（<2月龄）神经症状，前后肢弯曲或过伸、眼球突出或两眼不对称;共济失调、膝反射降低等。眼球突出或两眼不对称；出生缺陷–脑积水和脊髓狭窄。新孢子虫感染引起感染动物神经和肌肉功能障碍新孢子虫感染引起孕畜的频繁流产、死胎、木乃伊胎木乃伊胎死胎流产胎牛Lesions–犬多灶性心肌炎或心内膜炎：由一个中心坏死灶和大量的浆细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和少量嗜中性粒细胞浸润的黄色炎症区带。-新孢子虫速殖子群落多发性肌炎：骨骼肌、颞肌、喉肌、食道肌–新孢子虫炎性细胞浸润为特征的坏死性肝炎、化脓性胰腺炎、肉芽肿性肺炎、肾盂肾炎、皮炎及眼部病变。Lesions–牛小脑发育不全、脑膜脑炎、脊髓炎、脊髓中灰质少，形成灶性空洞，病变中可以查到新孢子虫的组织包囊。心肌炎–心肌的单核细胞中寄生有大量的速殖子胎盘绒毛层绒毛坏死，并有虫体病灶。

Diagnosis犬新孢子虫流产：胎儿有病变–脑炎；病变中发现犬新孢子虫；犬新孢子虫和刚地弓形虫形态相似。流产奶牛的血清学检查：ELISA、间接荧光抗体试验；亲和ELISA区别近期和慢性感染。确诊-胎儿组织学检查：脑、心、肝、胎盘

局灶性脑炎–坏死和非化脓性炎症PCRTreatment&Prevention本病治疗尚处于探索阶段。早期可试用甲氧苄胺嘧啶，磺胺嘧啶和乙胺嘧啶等抗弓形虫药物治疗。淘汰病牛和血清抗体阳性牛防止犬与牛等中间宿主接触禁止犬进入牛栏禁止犬接触动物饲草、饲料和饮水不让犬吃到流产的胎儿、胎膜或死犊牛小袋纤毛虫小袋纤毛虫病是由毛口目小袋科小袋虫属的结肠小袋纤毛虫(Balantidiumcoli)寄生于猪和人的大肠（主要是结肠）所引起的一种人畜共患病。轻度感染：无异常表现严重感染：肠炎、死亡结肠小袋纤毛虫Etiology有滋养体(trophozoites)和包囊(cyst)两个发育阶段

滋养体能运动，一般呈椭圆形或卵圆形，无色透明或淡灰略带绿色，大小为30～180×25～120μm。包囊圆形或卵圆形，直径为40～60µm，淡黄或淡绿色，囊壁厚而透明。胞口胞咽小核大核食物泡伸缩泡胞肛纤毛12结肠小袋虫1.滋养体2.包囊生活史1～5.无性生殖二分体6.包囊期7～9.有性生殖？.为部分生活

史不祥123467589无性生殖：横二分裂法有性生殖：接合生殖Epidemiology世界性分布，主要流行于热带和亚热带。人群感染率低0.04%~8.1%；猪感染率33.8%~80%。滋养体抵抗力弱，厌氧和室温条件下存活10天。包囊抵抗力强，室温存活2w~2m,10%Formalin存活4h。Pathogenesis滋养体在寄生部位的大量增殖，引起宿主消化功能紊乱；虫体分泌透明质酸酶并借助机械运动侵犯结肠粘膜甚至粘膜下层,引起溃疡；严重病例可出现大面积结肠粘膜的破坏和脱落。Clinicalsigns潜在型无症状，带虫者。急性型水样腹泻，混有血液。粪便中有滋养体和包囊两种虫体存在。表现为食欲不振，渴欲增加，喜欢饮水，消瘦，粪稀如水，恶臭。被毛粗乱无光，严重者2～3日死亡。慢性型消化机能障碍、贫血、消瘦、脱水等症状，发育障碍，陷于恶病质，常常死亡。Diagnosis

直接涂片检查粪便

新鲜粪便

反复送检尸体剖检

溃疡性肠炎

刮取肠粘膜涂片Treatment呋喃唑酮，以0.02％～0.04％的浓度混入猪的饲料中喂服。甲硝哒唑(灭滴灵)每头按0.25g口服，一天两次，连用3d有效。0.1％福尔马林(Formalin)