《植物组织培养》课件 模块三-3 外植体的选择与处理

项目三

无菌操作技术任务三外植体的选择与处理任务二无菌操作技术任务一虚拟无菌操作无菌操作任务三外植体的选择与处理知识目标学会处理各种外植体的方法和操作流程；学会外植体的培养方法；掌握外植体的培养过程。123掌握外植体的选择方法；熟练掌握外植体的灭菌方法和无菌操作技术；学会外植体的培养过程

123技能目标第一节外植体的选择和处理第二节培养和驯化任务讲解第一节外植体的选择和处理一、外植体选择时应注意：（1）选择优良的种质及母株（2）选择适当的时期（3）选取适宜的大小（4）外植体来源要丰富（5）外植体要易于消毒二、外植体取材的部位：（1）茎尖茎尖不仅生长速度快，繁殖率高，不容易发生变异，而且茎尖培养是获得脱毒苗木的有效途径。因此茎尖是植物组织培养中最常用的外植体。（2）节间部大部分果树和花卉等植物，新梢的节间部是组织培养的较好材料。新梢节间部位不仅消毒容易，而且脱分化和再分化能力较强，因此是常用组织培养材料。（3）叶和叶柄叶片和叶柄取材容易，新出的叶片杂菌较少，实验操作方便，是植物组织培养中常用的材料。尤其是近年在植物的遗传转化中，以叶片为试验材料的报道很多。（4）鳞片水仙、百合、葱、蒜、风信子等鳞茎类植物常以鳞片为材料。（5）其他种子、根、块茎、块根、花粉等也可以作为植物组织培养的材料。三、外植体处理：

首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、70％酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70％酒精浸10-30s。第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1-2种使用。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次1-3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-10次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用。第五步接种。接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割或剪裁成小段或小块，放人培养基的过程。第二节培养和驯化

指把培养材料放在培养室(有光照、温度条件)里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。

1．培养方法(1)固体培养法即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。虽然该方法设备简单，易行，但养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象发生。1培养方法(2)液体培养法即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少，所以通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给，采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速度一般为50-100r／min，这种定期浸没的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。1.初代培养◆2.继代培养◆3.生根培养◆培养步骤2．培养步骤2．培养步骤丛生芽的发育Ⅰ顶芽腋芽微型扦插丛生芽的发育Ⅱ顶芽CTK刺激带芽的茎切段侧芽接种培养形成的茎梢节长，直立向上呈小灌木丛状获得较多嫩茎梢茎段培养继代扩繁试管苗生根培养无愈伤组织产生初代继代丛生芽的发育2不定芽的发育脱分化分化愈伤组织芽、芽丛切割芽丛继代培养大量芽丛试管苗生根培养外植体初代继代不定芽的发育石龙芮下胚轴培养产生胚状体过程体细胞胚状体的发育Ⅰ体细胞胚状体的发育1体细胞胚状体的发育Ⅱ

外植体特点：数量多，速度快，结构完整，成苗率高愈伤组织小孢子游离单细胞器官

胚状体

试管苗体细胞胚状体的发育2原球茎的发育

缩短的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官。原球茎的发育视频视频3-5初代培养继代培养扩繁方法：以几何级数增加，可切割茎段、分离芽丛、胚状体、原球茎。培养基：基本培养基或分化培养基实质：增殖培养物，为生产成品试管苗做准备。继代培养目的：扩繁无根苗，最后达到边繁殖边生根视频3-6继代培养生根培养培养材料生根继代培养初代培养生根培养基：1／2或1／4MS培养基生根方法与途径新梢基部浸入50或100ppmIBA液4－8h在含IAA培养基中培养4－6d移入含IAA的生根培养基培养其它方法(滤纸桥等）生根培养生根培养生根培养生根培养生根培养生根培养视频视频3-7生根培养任务小结外植体的取材部位较多，应合理选择；应选择合适的消毒剂对外植体进行处理；外植体