《植物组织培养》课件 模块一-2 实验设备和培养条件

单元二实验设备和培养条件技能目标掌握组织培养实技能目标验室的设计；掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法；掌握调控组织培养的主要环境条件。123任务导入在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。任务导入AGlimpseofPlantTissueCulture任务导入实验室设置及仪器

植物组织培养技术性很强，无菌条件很高，要求有最基本的实验设备条件及熟悉一般操作技术才可以进行。去分化再分化整个操作核心是无菌操作。

要点：设备设施、培养基、培养条件。

植物组织培养通常是外植体愈伤组织植株任务导入实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。实验室组成：化学实验室[准备室]、洗涤室、无菌室（接种室）、培养室、观察室。任务导入图1-12实验室布局示意图任务讲解第一节实验室第二节设备和器材第三节培养条件第一节实验室实验室要求

环境要求：理想的植物组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。规模化生产的实验室最好建在交通方便的地方，便于产品的运送。实验室的建设均需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费和实验性质。第一节实验室

实验室设置的基本原则是：科学、高效、经济和实用。一个植物组织培养实验室必须满足3个基本的需要：实验准备（培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌）、无菌操作和控制培养。此外，还可根据所从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施，使实验室更加完善。第一节实验室一、洗涤室洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。室内应配备大型水槽，最好是不锈钢水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。备有塑料筐，用于运输培养器皿。备有干燥架，用于放置干燥涮净的培养器皿。视频1-4洗涤第一节实验室二、准备室准备室要求明亮、通风。在准备室内要完成培养基制备。负责母液、培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。第一节实验室（1）大型中央工作台（2）药品柜（3）普通冰箱（4）电子分析天平和托盘天平（5）电蒸馏水器（6）磁力搅拌器（7）电炉或电饭锅、铝锅。（8）酸度计（pH计）（9）高压灭菌锅（10）光照培养箱或人工气候箱（11）烘箱干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌。用于干燥需保持80-100℃；进行干热灭菌需保持150℃，达1-3h。第一节实验室图1-13准备室设备（a）第一节实验室电子分析天平电子精密天平图1-14准备室设备（b）第一节实验室图1-15准备室设备（c）第一节实验室三、无菌室（接种室）主要用于植物材料的消毒、接种、试管苗的转接以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备：紫外灯、超净工作台、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。接种室要求1～2盏紫外灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。接种室应设有缓冲间，进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外灯。第一节实验室图1-16无菌室设备（a）第一节实验室图1-17无菌室设备（b）第一节实验室图1-18无菌室设备（c）第一节实验室图1-19无菌室设备（d）第一节实验室图1-20无菌室设备（e）第一节实验室超静工作台图1-21无菌室设备（f）第一节实验室电子灭菌器电子火焰灭菌器图1-22无菌室设备（g）第一节实验室工作台面图1-23无菌室设备（h）第一节实验室视频1-5接种室操作第一节实验室四、培养室培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。培养架大多由金属制成，一般设5层，最低一层离地高约10cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长1.3m，30W的长lm，宽度一般为60cm。第一节实验室培养室最重要的因子是温度，一般保持在20-27℃左右，安装空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70％-80％为好（视情况），可安装加湿器（除湿机）。控制日光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。图1-24培养室设备（a）第一节实验室第一节实验室图1-25培养室设备（b）第一节实验室图1-26培养室设备（c）第一节实验室图1-27培养室设备（d）第一节实验室图1-28培养室设备（e）第二节设备和器材一、玻璃器皿二、器械用具视频1-6玻璃器皿图1-29玻璃器皿图1-30器械用具第二节设备和器材视频1-7组织培养设施设备第三节培养条件培养条件：光照、温度、湿度、气体成分一、温度1.一般控制在25±2ºC。

2.植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同的。如百合20℃；月季24℃；番茄28℃。第三节培养条件二、光照

★影响细胞的增殖、组织和器官的分化。

★愈伤组织的诱导有的在光照下有促进作用；光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。第三节培养条件三、湿度

主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导致生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下降。第三节培养条件四、pH值1.培养基适宜PH值5-6.5，一般为5.8，调

整用0.1M的NaOH和HCl溶液。2.pH影响培养基的硬度。

pH

＞6.5培养基会变硬；

pH

＜5.0培养基不易凝固。3.灭菌之前，培养基的pH要比标准提高

0.2－0.3个单位。第三节培养条件表1-1不同植物的最适PH值杜鹃月季越桔胡萝、石刁柏蚕豆桃番茄、葡萄4.05.84.56.05.57.05.7第三节培养条件五、气体（必要条件）

1.培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关。可用棉塞或特制的封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。常用封口膜：聚丙烯耐高温薄膜第三节培养条件五、气体（必要条件）

2.培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。◆固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。◆液体培养时，可考虑采取振荡培养的方式，以增加通气性。任务小结

组培实验室包括洗涤室、准备室、无菌室（接种室）、培养室四部分；