高三生物专项复习课件：生物实验中的阳性对照与阴性对照

阴性对照与阳性对照需要设置对照组。严格来说，本实验应该设置两组对照组。一组为阴性对照组，不进行涂布或者用无菌水涂布平板；另一组为阳性对照组，涂布大肠杆菌。前者可以说明培养基是否被污染，后者可以说明该培养基能否培养出大肠杆菌。阴性对照和阳性对照对照实验（Controlexperiments）是在实验中设置比较对象的一种科学方法，对照组的设置可评估实验条件改变对实验结果产生的影响。对照的意义可以增强实验的可信度，能帮我们佐证实验结果的可靠性，也能在实验失败的时候帮助我们排查导致失败的原因。在生命科学实验中的对照实验一般可分为空白对照、阳性对照和阴性对照。空白对照：指不给予任何处理的对照。评定测量方法的准确度以及观察实验是否处于正常状态。空白对照可以排除假阳性的结果。阳性对照：按照当前实验方案一定能得到正面预期结果的对照实验。阳性对照是已知的对测量结果有影响的因素，目的是确定实验程序无误。如果是化学物质如药物实验，阳性对照还可以证明实验药和对照药之间的差别——优效性或等效性。阳性对照可以排除假阴性的结果。也就是说，阳性对照就是一个样本已知必然是阳性的结果，如果检测出来了这个样本不是阳性，则说明实验有问题，不可靠。例如：当要对某抗癌药物处理后的HeLa细胞进行检测时，发现处理组的结果呈现阴性，HeLa细胞不发生凋亡。当阳性对照组结果是阳性，那么，实验操作一定没有问题，有可能是药不行。当阳性对照组结果是阴性的，那么，实验操作一定有问题，有可能抗癌药物是有效的，出现了假阴性的结果。当然也有可能，药物也是不行的。阴性对照：阴性对照和阳性对照相反，按照当前的实验方案一定不能得到正面预期结果的对照实验。排除未知变量对实验产生的不利影响。阴性对照和空白对照不一定画等号。空白对照没加处理因素，阴性对照往往加的是另外处理因素。阴性对照的目的是排除假阳性。也就是说，阴性对照就是一个样本已知必然是阴性的结果，如果检测出来了这个样本是阳性的，这就说明实验有问题。（医学临床试验中阴性对照可采用安慰剂）阴性对照类型1.溶剂对照：最常见的阴性对照。为排除溶剂本身对动物的影响，往往会设置一个溶剂（生理盐水）对照组。有些化合物由于水溶性差，在进行药物溶解时，可能需要使用有机溶剂(如DMSO)以及助溶剂辅助溶解。为排除溶剂本身对动物的影响，往往会设置一个溶剂对照组。2.假手术处理对照：在给动物造模的过程中，也会涉及到假手术处理对照。3.安慰剂处理荧光定量PCR中的阳性对照和阴性对照：阳性对照和阴性对照是指在相同的处理条件下，比如一份已知的感染样品和一份已知的未感染样品，都进行了提取和扩增最终获得了阳性结果和阴性结果。阴阳性对照强调处理过程与样品一致，并且有明确的预期结果。有的时候根据检测目的，阴性对照和空白对照也会被捏成一个对照。什么时候，空白组和阴性组是分开为两组的呢？比如一些转基因实验，空白对照就和阴性对照是分开的。以转目的蛋白表达的载体细胞为例，细胞可分为：实验组（转染表达目的蛋白的载体）、阴性对照（转了空载体的细胞）、空白对照（空白细胞，不转载体，细胞未做任何处理）。阳性对照与阴性对照举例：随着转基因技术与动物细胞工程结合和发展，2011年我国首次利用转基因和体细胞核移植技术成功培育了高产赖氨酸转基因克隆奶牛。其基本流程为：①构建乳腺专一表达载体。随着测序技术的发展，为获取富含赖氨酸的酪蛋白基因（目的基因），可通过检索

获取其编码序列，用化学合成法制备得到。再将获得的目的基因与含有乳腺特异性启动子的相应载体连接，构建出乳腺专一表达载体。②表达载体转入牛胚胎成纤维细胞（BEF）。将表达载体包裹到磷脂等构成的脂质体内，与BEF膜发生______，表达载体最终进入细胞核，发生转化。③核移植。将转基因的BEF作为核供体细胞，从牛卵巢获取卵母细胞，经体外培养及去核后作为______。将两种细胞进行电融合，电融合的作用除了促进细胞融合，同时起到了______重组细胞发育的作用。④重组细胞的体外培养及胚胎移植。重组细胞体外培养至______，植入代孕母牛子宫角，直至小牛出生。⑤检测。DNA水平检测：利用PCR技术，以非转基因牛耳组织细胞作为阴性对照，以______为阳性对照，检测到转基因牛耳组织细胞中存在目的基因。RNA水平检测：从非转基因牛乳汁中的脱落细胞、转基因牛乳汁中的脱落细胞和转基因牛耳组织细胞，提取总RNA，对总RNA进行______处理，以去除DNA污染，再经逆转录形成cDNA，并以此为______，利用特定引物扩增目的基因片段。结果显示目的基因在转基因牛乳汁中的脱落细胞内表达，而不在牛耳组织细胞内表达，原因是什么？______。基因数据库融合受体细胞激活早期囊胚含目的基因的BEFDNA酶模板a.乳腺专一表达载体b.（乳腺）特异性启动子B-FB干扰素浓度高，病变程度低A组：空白对照组B组：阳性对照？静息状态时间明显变短丁组：正常组，不作处理（空白对照）戊组：模型组，不作处理

（阴性对照）类风湿性关节炎（RA）是因免疫炎症反应引起的关节受损进而导致关节功能障碍和残疾的一种疾病，严重影响患者的生活质量。糖皮质激素（GC）属于肾上腺皮质激素，具有免疫抑制作用，是治疗RA的有效药物之一，但GC具有较强的毒副作用。研究人员为探索中药姜黄提取物姜黄素对RA的干预作用做了如下研究。将体重相同的大鼠随机分为正常对照组、造模组，分别进行如下处理，造模组前期需完成RA动物模型的制备，前期处理完成后再分别进行后期处理。请完成实验方案，①②③④分别对应（填字母）。注：弗氏完全佐剂为细胞免疫刺激剂。正常对照组未对实验对象施加处理，属于正常的大鼠，姜黄素组是给模型动物注射姜黄素