实验室生物安全标准操作规程

实验室生物安全标准操作规程

HYEY-PGC-2016

（第三版）

2016年1月11日发布2016年1月20日实施

怀远县第二人民医院

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC-2016------------1修订表

第1页共I页

修订表第3版第0次修订

2016年1月11日发布/I月20日实施

规程号修订次序修订内容批准日期

实验室生物安全标准操作规程（S0P）HYEY-PGC-2016目录

第1页共1页

目录第3版第0次修订

2016年1月11日发布/I月20c

HYEY-PGC0I-2016实验室人员进出实验室

HYEY-PGC02-2016实验室检测样品采集

1IYEY-PGC03-2016实验室检测样品包装和运送

HYEY-PGC04-2016实验室检测样品接收

HYEY-PGC05-2016样品检测操作规程

HYEY-PGC06-2016电气设备操作规程

HYEY-PGC07-2016实验室消毒剂配制标准操作规程

HYEY-PGC08-2016无菌间使用标准操作规程

HYEY-PGC09-2016实验室废弃物处理标准操作规程

HYEY-EGCW-2016实验室消毒标准操作程序

11YEY-PGC11-2016实验室意外事故处理

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC01-2016

第1页共1页

检验科实验室人员进出实验室第3版第0次修订

201年1月11日发布/I月20日实施

制定检验科实验室人员进出的标准操作程序，保障实验室生物安全。

2适用范围

适用于检验科实验室人员进出程序。

3职责

实验室工作人员执行本程序的规定。实验室负责人负责监督执行。

4规程要求

4.1进入程序

实验室人员需将外衣挂入（避免将外衣与工作服混放），穿上工作服，按要求戴手套、口罩等防

护用品方可进入实验室。

4.2退出程序

工作结束后，实验室人员在实验室将一次性口罩、手套、鞋套等放入指定容器。先用0.5%新洁

尔灭对手进行消毒，再用消毒肥皂洗手。在指定区域脱下工作服，必要时进行紫外消毒。实验室人

员退出实验室后，必须将实验室入口门关好，方可离开实验室。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）IIYEYPGC0220161目的

第1页共4页为保

第版第次修订

实验室检测样品采集30障检测实

2016年1月11日发布/I月20日实施

验的顺利

进行，规范采样程序，防止病原微生物在实验室采样过程中产生污染。

2适用范围

适用于实验室内采集、处理动物样品。

3职责

3.1采集检测样品的工作人员在采莫过程中应当防止病原扩散，并对样本的来源、采集过程和处理

方法等作详细记录。

3.2检验人员必须严格按照本操作规程操作，不可擅自做出超出本规程的操作，所有实验人员对所

从事的工作负相应的责任。

4过程要求

4.1工作条件

4.1.1具有采集、处理样品所需要的生物安全防护设备；

4.1.2具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；

4.1.3具有有效的防止病原扩散的措施；

4.1.4具有保证检测样品质量的技术方法和手段。

4.2实验材料

准备灭菌的解剖器械（剪刀、银子、手术刀、大刀、斧头等）、灭菌试管、平皿或自封袋、载

玻片、棉签、营养肉汤、30%,50%甘油盐水缓冲液、加抗生素的PBS（病毒保存液）、50%甘油磷

酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL的离心管、1.5mLEP管、记号笔、签字笔、防护服、无粉

乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消

毒药品、采样单等。

4.3活畜样品的采集

4.3.1血清样品的采集

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC03-20164.3.1.1采

第2页共4页

血方法

实验室检测样品采集第3版第0次修订

2016年1月11日发布/I月20日实施对采

血部位的

皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒，75%的酒精消毒，待干燥后采血。采血方法推行生猪站立式前腔静

脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌。

4.3.1.2采血数量

单一病种抗体监测的每头（只）采集2〜3mL全血，多病种抗体检测的每头（只）采集5〜10mL

全血。

4.3.1.3全血保存

采集好的全血转入盛血试管，斜面存放，室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱，送实验室。

从全血采出到血清分出的时间不超过Who

4.3.1.4血清分离

凝固全血在室温2〜4h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4℃冰箱4〜8h后，

待大厘血清析出时，吸出血清。必要时经离心机3000rpm、30min离心，吸出血清。分离的血清，

一般不加防腐剂。血清若在1〜2周内即可检验，可放在4℃冰笛内保存；如果保存时间较长，应

放在-20℃〜-80℃冰箱内保存。运送血清时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送。

4.3.2全血样品的采集

仝血采集后应直接注入盛有抗凝剂的试管中，立即摇动，充分混合“也可将全血液注入盛有玻

璃珠的灭菌瓶中，立即连续振荡脱纤维蛋白。

4.4活禽样品的采集

咽喉拭子的采集：将棉签插入喉头口及上颗裂处来回刮3〜5次取咽喉分泌液，泄殖腔拭子的

采集：将棉签插入取泄殖腔转2〜3圈并沾取少量粪便，再将咽喉拭子、泄殖腔拭子一并放入盛有

。8〜1.0矶加有抗生素PBS的EP管中,加盖，编号。

4.5病死（屠宰）畜禽样品的采集

4.5.1解剖前检查

急性

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC03-2016

第3页共4页死亡的牛、

第版第次修订

实验室检测样品采集30羊、猪、马

2016年1月11日发布/I月20日实施

等动物，解

剖之前应作临床检查，疑似炭疽病的应采血、镜检，排除炭疽病时.,方可解剖。动物死亡后应在

6h内进行剖检。解剖人员要做好自我防护工作。

4.5.2肝、脾、肾、淋巴结、肺和七、马心脏样品的采集

在肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏有病变的部位各采取2〜3cm3的小方块，分别置于灭

菌的试管或平皿中。其他畜禽采集整个心脏，置于自封袋中。细菌分离样品的采集可用烧红的刀片

烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的钳金耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检

或划线接种于适宜的培养基上。

4.5.3脑、脊髓样品的采集

取脑、脊髓2〜3cm，浸入50%甘油盐水中或将整个头部（猪、牛、马除外）割下，用消毒纱布

包裹，置于不漏水的容器中。

4.5.4肠、肠内容物及粪便样品的采集

肠样品的采集：选择病变最严重的部分，将其中的内容物弃去，用灭菌的生理盐水轻轻冲洗后,

置于试管中。肠内容物样品的采集：烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取肠内容物，放

入盛有30%甘油盐水中或者直接将昔有粪便的肠管两端结扎，从两端剪断。粪便样品的采集：用棉

签插到直肠黏膜表面采集粪便，然后将拭子放入盛有30%甘油盐水中。

4.5.5液体病料样品的采集

采集胆汁、脓、粘液、关节液、水泡液等样品时，用药物或烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管

（毛细吸管、注射器）经消毒部位插入，吸取内部液体，然后将病料注入灭菌试管中，加盖。也可

用接种环经消毒部位插入，提取病科直接接种在培养基上。

4.5.6胎儿样品的采集

取流产后的整个胎儿，装入自封袋或不透水塑料薄膜中。

4.5.7皮肤样品的采集

用清水清洗病变皮肤后，取病变皮肤3〜5g放入灭菌小瓶中，加适量50%甘油磷

实验室生物安全标准操作规程（S0P）HYEY-PGC03-2016

第4页共4页

实验室检测样品兴集第3版第0次修订

2016年1月11日发布/I月20日实施

酸盐缓冲液（pH7.4）,加盖密封。

4.5.8死（屠宰）禽样品的采集

死（屠宰）禽样品的采集除按上述方法采集，也可将整个死禽装入不透水塑料薄膜袋或自封袋

中或其他容器内。

4.6组织样品采集完后的无害化处理

活畜禽、病死畜禽组织样品采奠完后，应做好样品外包装和环境消毒以及病死畜禽及其产品的

无害化处理。

4.7样品编号、抽样单填写

4.7.1样品编号

每头动物的不同部位的组织样品应单独包装。包装好后，在样品袋或平皿外贴上标签，标签注

明样品名、样品编号、采样日期等。采集好不同部位的样品后，同•动物的样品集中包装。

4.7.2采样单填写

可根据具体要求填写。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC03-20161目的

第1页共2页维护

实验室检测样品包装和运送第3版笫0次修订

检测样品

2016年1月11H发布/I月20日实施

的质量，防

止病原的泄漏和扩散，保障样品检测的顺利开展。

2适用范围

适用于检测样品的包装和运送。

3职责

3.1操作者必须严格按照本程序操作，不可擅自做出超出本程序的操作，所有实验人员对所从事的

工作负相应的责任。

3.2实验室负责人负有对样品包装、运输的监督和管理职责，并监督检查相关工作人员的安全工作

程序和行为.

4过程要求

拟运输的样品，要求严密包装，外表加以消毒，编号、登记后，贴.上“生物危险”标识，并严

防标识脱落。样品必须经三层包装。

4.1样品的包装

4.1.1内包装

4.1.2外包装

实验室生物安全标准操作规程（SOP）IIYEY-PGC03-20164.1.3包装

第2页共2页要求

实验室检测样品包装和运送第3版笫0次修订

在辅

2016年1月11日发布/I月20三

助包装周

围必须放置冰、干冰或者其他冷冻剂，或者按照规定将冷冻剂放在由一个或者多个完整包装件组成

的合成包装件中，内部要有支撑物，干冰或者干冰消耗掉以后，仍可以把辅助包装固定在原位置上。

如果使用冰，包装必须不透水；如果使用干冰，外包装必须能排出二氧化碳气体；如果使用冷冻剂,

主容器和辅助包装必须保持良好的性能，在冷冻剂消耗完以后，仍能承受运输中的温度和压力。

主容器必须是火焰封口的玻璃安液或者是用金属封口的胶塞玻璃瓶。在辅助包装周围还必须放

置冰、干冰或者其他冷冻剂。

实睑室生物安全标准操作规程(SOP)HYEY-PGC04-20161目的

第1页共1页规范接收

实验室检测样品接收第3版笫0次修订

检测样品，

2016年1月11日发布/I月20日实施

保证生物

安全。

2适用范围

适用于送检样品的交接管理。

3职责

专人负责接收样品和接样的生物安全。

4过程要求

4.1检测样品由专人接收，在接收送检样品时应作好样品登记，填写《样品接收登记表》，并对样

品进行符合性检查，检查包括：

(1)样品包装、标志及外观是否完好；

(2)对照抽样单核查样品的名称、采样地点、样品数量、性状等信息；

(3)样品是否损坏、污染或已过有效期。

4.2接样人进行样品登记、保存后，报告实验室负责人安排检测工作。

4.3检验后的剩余样品，由样品保管人负责留存。

实验室生物安全标准操作规程(SOP)HYEY-PGC05-20161目的

第1页共1页为规

样品检测操作规程第3版第0次修订

范样品的

2016年1月11日发布/I月20=

检测，特制

定本规程。

2适用范围

适用不同待检样品的检测。

3职责

3.1实验室工作人员严格依照本规程进行样品的检测。

3.2实验室负贡人负贡监督实验室工作人员样品的检测工作。

4过程要求

样品的检测方法应采用《作业指导书-检测标准》(GTCADC-ZYBZ-2016)规定的方法。

5.相关文件

《作业指导书-检测标准》(GTCADC-ZYBZ-2016)

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC06-20161目的

第1页共1页

为规范

电气设备操作规程第3版第0次修订

实验室电气

2016年1月11日发布/I月20日实施

设备的使用

和维护，特制定本规程。

2适用范围

适用于电气设备的操作和维护。

3职责

实验室工作人员严格依照本规程进行使用电气设备。

4过程要求

4.1实验室工作人员必须熟悉仪器的性能、用途、使用方法，严珞按照说明书使用，遵守仪器操作

规程。

4.2仪器使用过程中发生故障必须立即停止使用，并报告实验室负责人，及时查找原因，尽快排除,

并登记。

4.3使用完毕必须对使用过的仪器设备按相关要求去除污染，以减少污染风险。

5相关文件

《作业指导书-仪器设备操作规程》（GTCADC-ZYGC-2016）

实验室生物安全标准操作规程（SOP）IIYEY-PGC07-20161目的

第1页共2页规范

实验室消毒剂配制标准操作规程第3版第0次修订实验室消

2016年1月11日发布/I月20日实施

毒剂配制，

保证消毒液的有效性和实验室生物安全。

2.适用范围

适用于检验科实验室常用消毒剂的配制。

3.职责

实验室工作人员负责常用消毒剂的配制。

4.过程要求

4.1消毒剂配制

4.1.1配制前，实验室工作人员应洗净配制容器及量具，自然晾干。按试剂配制的配方和配质量量

取所需药品。按配制要求的先后顺序加入药品，搅拌均匀配制试剂。

4.3配制过程产热的试剂待自然冷却后分装，并将填写好品名、浓度、配制时间、有效期的标签贴

于盛装容器上。做好配制记录。常用消毒剂的配方及注意事项见下表1。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC07-2016表1常用

第2页共2页消毒剂种

实验室消毒剂配制标准操作规程第3版第0次修订类和配制

2016年1月11日发布/I月20日实施

消毒剂名称用途配制方法备注

手消毒，仪器表面消量取5%新洁尔灭溶液100mL置于配制容器中，

0.2%新洁尔灭

毒等加入2400mL纯化水搅拌混匀。

称取20gNa0H固体，缓慢加入纯化水定容到强碱pH值大

2%NaOH溶液原位消毒

1000mL»于13

75%乙醇手表面消毒取750mL无水乙醇加纯化水定容到1000mL。

纪制好的过

氯乙酸需室

冰醋酸：H2O2：浓1*30,按体积比

温放置48h后

140.0：60.0：2.1配制。根据需要量分别量取

使用。超过

15%〜18%过氧乙酸实验室薰蒸消毒所需的过氧化氢、冰醋酸和浓硫酸。置于配制

20%的过氧乙

容器中搅拌均匀。使用时可加入催化剂高钛酸

酸会发生爆

钾或加热。

炸。一周内用

完。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC08-20161目的

第1页共2页确保

无菌间使用标准操作规程第3版第0次修订

无菌室环

2016年1月11日发布/I月20日实施

境的无菌

状态。

2适用范围

适用于无菌间空气微生物监测.

3职责

实验室工作人员负责实验室空气微生物监测和实施。

4过程要求

4.1实验室工作人员在进无菌间之前，应先用2%石碳酸或来苏尔对手进行浸泡消毒。

4.2缓冲间在每次使用前，应先打开紫外灯，紫外照射30min；工作人员在进入无菌室前，必须于

缓冲间内更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。检验用的有关器材（待检品除外），搬入无菌室

前必须分别进行灭菌消毒。

4.3将无菌间和生物安全柜的紫外灯打开照射30min后，才能进行工作。

4.4实验完毕后，用0.2%新洁尔灭消毒液擦拭生物安全柜台面，打开生物安全柜内紫外灯，照射

30min0同时无菌间和缓冲间的紫外灯一并打开，照射30min。

4.5工作人员在缓冲间脱下工作服、工作帽及工作鞋。

4.6适时应对无菌间进行熏蒸消毒。

4.7每月应对无菌间进行一次无菌检查记录

4.7.1营养琼脂平板的制备

按营养琼脂说明书配制营养琼脂，12（TC15min高压灭菌后，冷却到5（TC左右倾倒于9cm的平

板。待琼脂凝固后，放37t48h培养，无菌生长，方可以使用。

4.7.2沉降菌数测定

先打开无菌室内紫外灯照射30min后，将备妥的营养琼脂平板5个。以无菌方式移入操作间，置四

个角落和中央各1个，开盖，暴露30分钟后将盖盖上。在37七培笄箱内倒置培养48h,取出检查“

分别数出5个平板的生长菌落数并得出5个平板的平均菌落数。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC08-2016无菌室

第2页共2页

内的洁净级

无菌间使用标准操作规程第3版第0次修订

2016年1月11日发布/I月20日实施别应达到

10000汲,

即在进行沉降菌数测定时，平均菌落数应小于或等于3个0.5h）。如所测得的平均菌落

数小于3个，则证明该无菌室无菌程度符合要求，否则该无菌室的无菌程度不符合要求，需要对无

菌间进行彻底消毒，直至重复检查符合要求为止。

实检室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC09-20161目的

第1页共2页制定

实验室废弃物处理标准操作规程第3版第0次修订

实验室废

2016年1月11日发布/I月20日实施

弃物安全

处理操作规程，保障实验室生物安全。

2适用范围

适用于实验室废弃物的处理。

3职责

3.1实验室工作人员严格遵守本规程，并对所从事的工作负有生物安全责任。

3.2实验室负贲人负有监督和管理员任。

4过程要求

4.1实验室工作人员做好个人防护。穿好工作服、戴好手套、口罩和帽子等。

4.2实验室废弃物使用防渗专用包装容器（袋）或者防锐器穿透密闭容器收集，及时进行无害化处

理，并做好实验室废弃物处理记录。

4.3废弃物分类处理

4.3.1感染性废弃物处理

培养基、标本和菌（毒）种保存液、血液、血清、临床标本等感染性废弃物须进行压力蒸汽灭

菌。用过的一次性实验用品（包括手套、口罩、帽子等）及试管、吸管、移液器吸头等感染性废弃

物可进行压力蒸汽灭菌或消毒液浸泡24ho

4.3.2损伤性废弃物处理

针头、缝合针、解剖刀、手术刀、备皮刀、手术锯，试验玻片、玻璃试管、玻璃安甑等能够刺

伤或割伤人体的废弃的实验利（锐）器等损伤性废弃物需放入符合要求的利器盒里，容器装满3/4

后封盖，进行高压蒸汽灭菌处理。

4.3.3药物性废弃物处理

过期、淘汰、变质或者被污染的诊断试剂可采用压力蒸汽灭菌处理。

4.3.4病理性废弃物处理

动物组织及动物尸体使用两层防渗专用包装容器（袋）包装好（外包装进行彻底

的消毒处理），按要求进行焚烧、深埋或送往无害化处理场处理。做好废弃物处

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC09-2016理记录。

第2页共2页4.3.5化学

实验室废弃物处理标准操作规程第3版第0次修订

品废弃按

2016年1月11日发布/I月20日实施

组分收集

后，倒入专用化学废弃物收集桶内，集中处理。

实验室生物安全标准操作规程（SOP）HYEY-PGC10-20161目的

第1页共1页保护实

实验室消毒标准操作规程第3版第0次修订

验室的生物

2016年1月11日发布/I月20E

安全，防止病

原逃逸。

2适用范围

实验室日常清洁，实脸过程中产生的污染废弃物、使用过的防护装备