第37讲细胞工程-高考生物一轮复习精讲课件

高考生物一轮复习精讲课件2023年选修3

现代生物科技专题第37讲

细胞工程考点一

植物的组织培养与植物体细胞杂交考点二

动物细胞培养和核移植技术考点三

动物细胞融合和单克隆抗体真题再现教材基础诊断1.

脱分化就是让已经分化的细胞，经过诱导后，失去一些遗传物质而变成未分化细胞的过程。(

)×考点一

植物的组织培养与植物体细胞杂交2.

每个生物细胞都具有全能性的特点，都能发育成完整生物体。(

)3.

在进行植物体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的原生质层。(

)4.

用脱毒苗进行繁殖，种植的作物就具备了抗病毒的能力。(

)√××5.

人工种子就是以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。(

)6.

单倍体育种中,染色体加倍后当年便可得到稳定遗传的优良品种,这样就极大地缩短了育种的年限。(

)√√知识梳理整合1.细胞工程的概念2.植物组织培养技术无菌条件(1)理论基础：植物细胞的全能性遗传信息完整生物体全部遗传信息离体营养、激素(2)操作流程(以胡萝卜的组织培养为例)提醒：植物组织培养的操作要点1）植物组织培养的条件:离体、一定营养物质、激素等。2）愈伤组织形成后,需转移到分化培养基上培养形成幼苗。3）切取胡萝卜块时强调切取有形成层部分,原因是这部分容易诱导形成愈伤组织;选择离体植物器官、组织或细胞时,应选分化程度低、全能性高的部分。4）植物组织培养中不同培养阶段培养基含有的激素不同,因为培养的目的不同（生根或生芽）。5）不同细胞的全能性不同,全能性由大到小为:受精卵＞生殖细胞＞体细胞,离体细胞的全能性表达与分化程度呈负相关,但生殖细胞特殊。6）脱分化过程为避光培养;再分化需要光照，以利于叶绿素的形成。7）培养基的有机碳源一般是蔗糖,其作用是提供能源、调节渗透压。(3)植物激素在植物组织培养中的作用生长素/细胞分裂素的比值作用效果比值高时促进根分化、抑制芽形成比值低时促进芽分化、抑制根形成比值适中促进愈伤组织形成提醒

①条件：离体，一定营养物质，激素(生长素、细胞分裂素)等。②培养基状态：固体培养基(需再分化生根培养基及生芽培养基)。③体内细胞未表现全能性的原因：基因的表达具有选择性。④一般先诱导生芽，再诱导生根。3.植物体细胞杂交技术 (1)概念：将________的植物体细胞，在一定条件下融合成__________，并把杂种细胞培育成____________的技术。 (2)原理：体细胞杂交利用了细胞膜的________，杂种细胞培育成杂种植株利用了植物细胞的________。不同种杂种细胞新的植物体流动性全能性(3)过程(以“番茄—马铃薯的培育为例)(4)意义：克服不同种生物远缘杂交__________性。的不亲和提醒

①植物体细胞杂交的终点是培育出杂种植株，而不是形成杂种细胞；②原生质体是除去细胞壁的植物细胞，原生质层为植物细胞的细胞膜、液泡膜以及两层膜之间的细胞质。提醒

有关植物细胞杂交的三个易错点①两个不同品种的植物细胞，A、B进行杂交，错认为两两融合的原生质体只有AB类型。其实还可能有AA融合的和BB融合的，需要经过筛选，选出AB融合的原生质体。②错认为植物体细胞杂交属于有性生殖。植物体细胞杂交过程中没有有性生殖细胞的结合，因此不属于有性生殖，应为无性生殖。③错认为杂种植株的变异类型属于基因重组。杂种植株的变异类型属于染色体变异，其染色体数通常是两亲本细胞染色体数目之和，杂种植株属于异源多倍体。4.植物细胞工程的实际应用(1)植物繁殖的新途径无毒组织胚状体(2)作物新品种的培育：单倍体育种、________的利用。突变体采用液体培养基，培养到愈伤组织阶段，得到的是愈伤组织细胞的代谢产物。(3)细胞产物的工厂化生产：即利用______________技术生产蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料和生物碱等。植物组织培养教材深挖拓展1.

如图是番茄马铃薯体细胞杂交过程示意图,据图分析回答相关问题:1）

①过程用到的方法是_________,去除细胞壁的原因是_______________________,②过程依据的原理是___________________。植物体细胞融合成功的标志是_________________,其与细胞内___________（细胞器）有关。酶解法细胞壁会影响细胞融合细胞膜具有流动性形成新的细胞壁高尔基体2）

③和④过程分别是_________________的过程。该杂种植物有_____个染色体组。该杂种植株理论上_______（填“可育”或“不可育”）。③过程培养基用到的有机碳源一般为_______。脱分化和再分化四可育蔗糖3）

②③步骤之间还要进行杂种细胞的筛选,原因是___________________________________________。4）

杂种植株一定能表现出双亲的遗传特性吗?为什么?__________________________________________________________。5）

③过程_________（填“需要”或“不需要”）光,原因是植物细胞利用的是培养基中有机营养;④过程_______（填“需要”或“不需要”）光,原因是____________________________________,③④过程培养基含有的激素_______（填“相同”或“不同”）。融合过程可能有同种细胞融合或不融合的情况不一定。因为基因的表达不是孤立的,是相互调控、相互影响的不需要需要有利于叶绿素的形成及进行光合作用不同2.

）为什么“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所想象的那样，地上长番茄，地下结马铃薯？提示：生物基因的表达不是孤立的，是相互调控、相互影响的，番茄—马铃薯杂交植株虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达相互干扰，不能有序地表达。3.

微型繁殖技术：①概念：用于快速繁殖优良品种的___________________。②特点：繁殖速度快，高保真（因为是无性繁殖），不受自然生长季节的限制。植物组织培养技术4.

作物脱毒的由来：_____________________________________________________________________________________________________。5.

人工种子的由来：__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。不少树木生长周期长，一些作物优良杂种的后代会因发生性状分离而丧失其优良特性，常规种子的生产还会受到季节、气候、地域的限制并需要占用大量的土地来实现制种无性繁殖的作物，它们感染的病毒很容易传给后代，病毒在作物体内逐年积累就会导致作物产量降低，品质变差6.植物组织培养过程控制无菌的原因是__________________。7.植物组织培养离体的细胞能表达全能性的原因是_________________________ ____________，若不离体这些细胞在母体上发生基因选择性表达而分化。避免微生物的污染离体细胞含有本物种全部的遗传信息8.人工种皮是保证包裹在其中的胚状体顺利生长成

小植株的关键部分。请探讨：人工种皮中应该具

有的有效成分是什么？为了促进胚状体的生长发育，我们还可以向人工种皮中加入哪些物质？

提示

针对植物种类和土壤等条件，在人工种子的包裹剂中还可以加入适量的养分、无机盐、有机碳源以及农药、抗生素、有益菌等。为了促进胚状体的生长发育，还可以向人工种皮中加入一些植物生长调节剂。素养能力提升考向

植物细胞工程

1）

用于离体培养的蓝莓组织叫做_________，该技术的原理是_____________________。外植体植物细胞具有全能性2）

配制MS培养基时，应加入一定量的琼脂、蔗糖、无机盐、维生素、有机物等营养物质，蔗糖除作为碳源外，还具有_______________________的功能。常用的培养基有脱分化培养基、生根培养基和生芽培养基，这三种培养基的主要差异是_____________________________________。3）

图中蓝莓组织要经过消毒处理后才能进行培养。其①过程中，细胞的分化程度会_______（填“升高”“降低”或“不变”）。4）

愈伤组织经过②③过程重新分化成根或丛芽的过程叫_________。提供能量和维持渗透压生长素和细胞分裂素的用量及比例不同降低再分化2.

利用相关工程技术可以获得抗黑腐病杂种黑芥—花椰菜植株，已知野生黑芥具有黑腐病的抗性基因，而花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，技术人员用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力，再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，流程如下：据图回答下列问题：1）

该过程用到的工程技术有_________________和_______________。植物体细胞杂交植物组织培养[解析]

从流程图可知，该过程用的工程技术有植物组织培养和植物体细胞杂交技术。2）

过程①所需的酶是___________________,过程②PEG的作用是_____________________，经过②操作后，需筛选出融合的杂种细胞，显微镜下观察融合的活细胞中有供体的_________存在可作为初步筛选杂种细胞的标志。纤维素酶和果胶酶促进原生质体的融合叶绿体[解析]

因为植物细胞有细胞壁，细胞壁阻碍细胞间的杂交，因此在进行体细胞杂交之前，应利用纤维素酶和果胶酶去除植物的细胞壁，PEG的作用是诱导原生质体的融合。3）

原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是_____________________。原生质体经过细胞壁再生，进而分裂和脱分化形成____________。保持原生质体完整性愈伤组织[解析]

原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是保持原生质体的完整性，经过脱分化后形成的是愈伤组织。4）

若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和双亲植株的根尖，制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的_____________；对杂种植株进行____________接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。形态和数目黑腐病菌[解析]

观察再生植株的染色体变异类型，需要进行对比观察染色体的形态和数目有没有变化，对杂种植株进行黑腐病菌接种，可筛选出具有高抗性的杂种植株。3.

动物细胞培养过程中，通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸。(

)4.

由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，恢复其全能性困难，因此，动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。(

)×√教材基础诊断1.

动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。(

)√2.

细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同，例如，碳源、氮源、水、无机盐、血清等。(

)×考点二

动物细胞培养和核移植技术知识梳理整合1.动物细胞培养

原理：细胞增殖(1)地位：动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、______________、生产单克隆抗体等。其中______________技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞融合动物细胞培养(2)培养过程提醒

动物细胞培养的要点理解1）原代培养与传代培养的分界点:分瓶培养前为原代培养,分瓶培养后为传代培养;2）培养至10~50代时,部分细胞的核型可能会变化,继续传代培养,部分细胞获得不死性,已经发生突变,会朝着等同于癌细胞的方向发展。目前保存的细胞多为10代以内,以保持细胞正常的二倍体核型。(3)培养条件抗生素培养液血清、血浆细胞代谢（4）应用：生物制品的生产、检测有毒物质、医学研究。(5).植物组织培养和动物细胞培养的比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞全能性细胞增殖取材幼嫩的细胞、组织或器官胚胎或出生不久的幼龄动物器官或组织培养基成分无机盐、蔗糖、维生素、植物激素、琼脂等葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、抗生素、动物血清、血浆等结果植株或大量细胞只能获得大量细胞,不能得到生物个体相同点都需人工条件下的无菌操作;都需适宜的温度、pH等条件2.动物体细胞核移植技术和克隆动物1）原理：动物体细胞核的全能性。2）类型：胚胎细胞核移植和体细胞核移植。3）过程：提醒

(1)核移植技术获得的动物与供核动物性状不完全相同的原因：①克隆动物线粒体中的DNA来自去核卵母细胞；②性状受环境的影响；③在个体发育过程中有可能发生基因突变。(2)动物体细胞核移植技术选用去核卵母细胞的原因：①卵母细胞体积大，易操作；②卵黄多，含有丰富的营养物质，能提供早期胚胎发育所需的营养；③含有能够激发细胞核全能性表达的物质。（3）动物体细胞核移植技术（克隆）从生殖方式的角度看属无性生殖,重组细胞相当于受精卵,需要动物细胞培养和胚胎工程技术的支持。②保护___________。③生产医用蛋白。④作为异种移植的供体。⑤用于组织器官的移植。5）存在问题:___________、克隆动物存在健康问题、动物食品的安全性问题等。濒危物种成功率低4）应用①加速家畜___________进程,促进优良畜群繁育。遗传改良教材深挖拓展根据动物细胞培养过程示意图和体细胞核移植过程流程图，回答相关问题：1）

动物细胞培养时选用幼龄动物组织或胚胎进行培养的原因是什么？提示：幼龄动物组织或胚胎分化程度低,增殖能力强,更易于培养。2）

用于核移植的供体细胞,一般都选用传代10代以内的细胞,原因是什么？提示：传代10代以内的细胞的遗传物质没有发生改变。3）

培养过程中两次用到胰蛋白酶,作用分别是什么？提示：第一次使剪碎的组织分散成单个细胞;第二次使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来。4）

将进行培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中,去除卵母细胞细胞核的目的是什么？提示：使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞。5）

题述动物细胞工程中涉及的技术有哪些？提示：核移植、细胞培养、胚胎移植技术。能力素养提升考向

考查动物细胞工程1.

美国科学家已经在实验室中成功培育出膀胱，并顺利移植到7名患者体内。这种技术为那些急需器官移植的患者带来福音。回答下列问题：1）

科学家从患者的膀胱上取下一小块活细胞样本，将其中的肌肉细胞和膀胱上皮细胞分别置于不同的培养皿中培养。在培养之前，需用_______________________处理以分散细胞，细胞在培养皿中的培养过程属于_____代培养。与植物组织培养的培养基相比，其培养基的主要不同点是含有___________。胰蛋白酶或胶原蛋白酶原动物血清2）

约一周后将培养皿中培养的细胞放在由胶原质制成的“支架”上继续培养，再过7周左右，原先的数万个细胞已经繁殖到15亿个左右，布满“支架”，膀胱上皮在内，肌肉在外，形成“新膀胱”。细胞数目大量增加，其增殖方式是___________；由这些细胞再形成肌肉和膀胱上皮的过程中要经过___________。3）

医生将“新膀胱”移植到患者膀胱的上面，这样新器官会继续生长并与老器官“重组”取代老器官中丧失功能的部分。新器官与老器官的“重组”_______（填“是”或“不是”）基因重组；“新膀胱”移植后，_______（填“会”或“不会”）引起免疫排斥反应。4）

除上述方法外，还可将患者的体细胞核移入去核的___________中，利用体细胞_________技术，形成相应组织、器官，用于疾病的治疗。有丝分裂细胞分化不是不会卵母细胞核移植2.

我国科学家突破了体细胞克隆猴的世界难题,成功培育出世界上首例体细胞克隆猴——“中中”和“华华”。这标志着我国将率先开启以猕猴作为实验动物模型的时代。如图为克隆猴的流程示意图。请回答下列问题:1）

我国克隆猴利用的是猴胎儿成纤维细胞，该细胞是已分化的体细胞，从理论上分析，它具有细胞的全能性，这是因为__________________________________________。成纤维细胞的细胞核中含有猴的全部核基因2）

克隆猴时需要进行“去核”操作，即去掉卵母细胞的细胞核。先在体外培养卵母细胞让其分裂，一般选择___________________________________的细胞进行去核操作；然后进行“核移植”，即将体细胞的细胞核移到去核卵母细胞中形成重组细胞，此时采用的技术是_______________；得到的重组细胞再进行人工激活使其分裂形成胚胎。3）

科学家将79枚克隆胚胎移植入21只代孕母猴中，最终只有两只母猴正常怀孕产下“中中”和“华华”，它们的性别是否一致？_____；原因是___________________________________________________。减数第二次分裂中期（或MⅡ中期）显微注射技术是“中中”和“华华”的细胞核中遗传物质一样4）

克隆动物有很多优点：①可以加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育；②___________________________________________________________________。5）

灵长类生物克隆成功是克隆技术的重大突破，在该技术应用方面，应注意哪些潜在的风险？_______________________________________________。可以增加濒危物种的存活数量（或可以建立实验动物模型研究人类疾病）避免进一步扩大到人的体细胞克隆，引发伦理问题教材基础诊断1.

诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法相同。(

)×考点三

动物细胞融合和单克隆抗体2.

细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。(

)3.

植物原生质体融合与动物细胞融合原理是相同的。(

)4.

在进行筛选的选择性培养基上，只有未融合的B淋巴细胞因为不能无限繁殖而不能生长。(

)5.

对经选择性培养的杂交瘤细胞，只需进行克隆化培养，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。(

)√√××6.

生物导弹就是把抗癌细胞的单克隆抗体跟放射性同位素、化学药物或细胞毒素相结合制备而成的。（选修3

P54正文）(

)√7.

动物细胞培养技术是动物细胞工程技术的基础。（选修3

P57专题小结）(

)8.

一个已分化的动物体细胞通过核移植技术，也可以发育成一个动物个体。（选修3

P57专题小结）(

)√√知识梳理整合1.动物细胞融合项目内容概念两个或多个动物细胞结合形成_____个细胞的过程,也称细胞杂交原理_________________一细胞膜的流动性项目内容诱导方法需要用聚乙二醇（PEG）、_____________或电激等诱导因素；灭活的病毒诱导动物细胞融合的原理是：_______________________________________________________________________________________________________________________________________________结果形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为___________意义突破了_______________的局限,使___________成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段,为制造_____________开辟了新途径续表灭活的病毒病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，发生细胞融合杂交细胞有性杂交方法远缘杂交单克隆抗体2.单克隆抗体制备①制备原理：一种浆细胞只能产生一种抗体，浆细胞在体外______

(填“能”或“不能”)无限增殖；骨髓瘤细胞能__________；浆细胞与骨髓瘤细胞融合得到的________细胞，既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。不能无限增殖杂交瘤②制备过程③优点：特异性强、__________，并可大量制备。④用途：作为__________；用于治疗疾病和__________。灵敏度高诊断试剂运载药物教材深挖拓展据教材图回答关于单克隆抗体的相关问题：1）

进行融合操作后，培养基中共有哪些种类的细胞？提示：未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、两种同种细胞形成的融合细胞、杂种细胞以及多细胞融合细胞。2）

如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?提示：抗体检测通常用“有限稀释法”来进行。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖，然后检测各孔上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续稀释，一般3~4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞，该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。重难突破1.单克隆抗体制备过程中两次筛选的方法及目的项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞,另外还有未融合的细胞由于小鼠还受到其他抗原的刺激,所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞筛选方法用特定的选择培养基筛选:未融合细胞和同种细胞融合的细胞都会死亡,只有杂交瘤细胞才能生长用多孔培养皿培养,在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测,经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞2.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性相关酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶融合方法物理法：离心、电激、振动化学法：聚乙二醇等试剂诱导除物理法和化学法外，还可以用灭活的病毒诱导结果杂种植株杂种细胞意义克服了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能能力素养提升1.

如图表示单克隆抗体的制备过程，据图回答下列问题：1）

制备单克隆抗体的步骤：a.

将_______注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得B淋巴细胞，若要生产预防SARS的疫苗，则应用____________感染小鼠。b.

通过图中②过程获得的细胞为_____________，它除了具有无限增殖的特点外，还有哪些特征？_________________________________________________。c.

将诱导融合后的细胞，放在_______培养基的多孔培养板上培养、筛选，筛选得到的细胞中的染色体数正好是小鼠体细胞中的二倍吗？_____，原因是_________________________________________。2）

单克隆抗体与一般的血清抗体相比，优点是_______________________________；将该抗体制成生物导弹，则生物导弹的组成是___________________；为了便于了解生物导弹的作用部位，常要对生物导弹中的成分进行_____________。抗原SARS病毒骨髓瘤细胞形态结构发生显著变化、细胞膜上糖蛋白等物质减少选择是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞都来自同一种小鼠灵敏度高、特异性强（纯度高）单克隆抗体＋药物同位素标记3）

单克隆抗体的制备过程中需要两次筛选，请写出图中的编号和筛选目的。第一次筛选：[

]____________________________________________________；第二次筛选：[

]____________________________________________________。④筛选出杂交瘤细胞⑥筛选出能产生特定抗体并能大量增殖的细胞群1.

[2020课标全国Ⅰ，38，15分]为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。回答下列问题：1）

上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是________________________________________________。诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞[解析]

结合题干信息分析题图可推断，给小鼠甲注射病毒A的目的是让小鼠甲产生免疫反应，以获得能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞。真题再现2）

写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：_______________________________________________________________________________。取小鼠甲脾脏剪碎，用胰蛋白酶处理使其分散成单个细胞，加入培养液制成单细胞悬液[解析]

以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：取小鼠甲脾脏，用剪刀剪碎，加入胰蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，加入培养液制成单细胞悬液。3）

为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于_____________，使用该培养基进行细胞培养的结果是__________________________。图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是_____________________________________。选择培养基只有杂交瘤细胞能够生存抗原与抗体的反应具有特异性[解析]

分析题图可知，图中筛选1所采用的培养基属于选择培养基，使用该培养基进行细胞培养的结果是未融合的亲本细胞和融合的具有同种细胞核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生存，即由B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞才能生存。图中筛选2所依据的基本原理是抗原与抗体的反应具有特异性。4）

若要使能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可采用的方法有___________________________________________________________（答出2点即可）。将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖；将杂交瘤细胞在体外培养[解析]

若要使能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖，也可以将杂交瘤细胞在体外培养。2.

[2021湖南，22，15分]M基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：1）

在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是______________________________________________________________，这类酶能将特定部位的两个核苷酸之间的_____________断开。限制酶（限制性核酸内切酶）[限制酶（限制性内切核酸酶）]磷酸二酯键[解析]

限制酶识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸间的磷酸二酯键断开。2）

在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是________________________________________________________________。清除代谢（产）物，防止细胞代谢（产）物积累对细胞自身造成危害[解析]

动物细胞体外培养需要无菌、无毒等适宜环境，因此动物细胞培养的培养液及所有培养用具使用前应进行无菌处理，还应定期更换培养液，以便清除代谢（产）物，防止代谢（产）物积累对细胞自身造成危害。3）

与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是_______________________________________________________。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，在形态上表现为_________________________________（答出两点即可），功能上具有___________。体细胞分化程