珍珠层粉在化妆品中的应用

序号：编码：第九届“挑战杯”广东大学生课外学术科技作品竞赛作品申报书作品名称：珍珠层粉在化妆品中的应用学校全称：华南农业大学申报者姓名（集体名称）：罗善锴罗冠生林韶芸类别：√自然科学类学术论文 □哲学社会科学类社会调查报告和学术论文□科技发明制作A类□科技发明制作B类报送方式：□省级报送作品□高校直送作品说明1.申报者应在认真阅读此说明各项内容后按要求详细填写。2．申报者在填写申报作品情况时只需根据个人项目或集体项目填写A1或A2表，根据作品类别（自然科学类学术论文、哲学社会科学类社会调查报告和学术论文、科技发明制作）分别填写B1、B2或B3表。所有申报者可根据情况填写C表。3.表内项目填写时一律用钢笔或打印，字迹要端正、清楚，此申报书可复制。4.序号、编码由第九届“挑战杯”广东大学生课外学术科技作品竞赛组委会填写。5．学术论文、社会调查报告及所附的有关材料必须是中文（若是外文，请附中文本），请以4号楷体打印在A4纸上，附于申报书后，字数在8000字左右（文章版面尺寸14.5×22cm）。6．作品申报书须按要求由各校竞赛组织协调机构统一寄送。7.其他参赛事宜请向本校竞赛组织协调机构咨询。

A2申报者情况（集体项目）说明：1．必须由申报者本人按要求填写；2．申报者代表必须是作者中学历最高者，其余作者按学历高低排列；3．本表中的学籍管理部门签章视为申报者情况的确认。申报者代表情况姓名罗善锴性别男出生年月1984年9月学校华南农业大学系别、专业、年级理学院2004级应用化学学历本科学制四年入学时间2004.09作品名称珍珠层粉在化妆品中的应用毕业论文题目通讯地址华南农业大学华山学生宿舍19栋410室邮政编码510640办公电住地通讯地址华南农业大学华山学生宿舍19栋410室邮政编码510640住宅电话020—85285264其他作者情况姓名性别年龄学历所在单位罗冠生男22本科华南农业大学林韶芸女22本科华南农业大学资格认定学校学籍管理部门意见以上作者是否为2006年7月1日前正式注册在校的全日制非成人教育、非在职的高等学校中国籍专科生、本科生、硕士研究生或博士研究生。是□否（部门签章）年月日院系负责人或导师意见本作品是否为课外学术科技或社会实践活动成果是□否负责人签名：年月日

B1．申报作品情况（自然科学类学术论文）说明：1．必须由申报者本人填写；2．本部分中的科研管理部门签章视为对申报者所填内容的确认；3．作品分类请按作品的学术方向或所涉及的主要学科领域填写；4．硕士研究生、博士研究生作品不在此列。作品全称作品分类（D）A．机械与控制（包括机械、仪器仪表、自动化控制、工程、交通、建筑等）B．信息技术（包括计算机、电信、通讯、电子等）C．数理（包括数学、物理、地球与空间科学等）D．生命科学（包括生物、农学、药学、医学、健康、卫生、食品等）E．能源化工（包括能源、材料、石油、化学、化工、生态、环保等）作品撰写的目的和基本思路作品介绍：本作品是用乳酸和胰蛋白酶对珍珠层粉进行水解，获得含有多种氨基酸、小分子肽及微量元素的酶解液，并将酶解液应用于化妆品中，研发具有特殊功能的化妆品。通过实验，本作品预计可以达到以下目的：一、为工业生产珍珠层粉酶解液提供优异的实验数据（如反应温度、反应时间及催化剂等等），节省工业生产成本，提高珍珠层粉有效成分的提取率。二、为珍珠层粉在医疗、健康等方面的应用提供前提基础。三、利用珍珠层粉含有的药用成分，开发具有特殊功能的化妆品（如消炎、去痘、消斑、美白、抗衰老等），保护人体皮肤健康。基本思路：珍珠层粉酶解液制备滤液成分检测酸解过滤珍珠层粉滤液成分检测酶酸过滤滤渣滤渣合并两次滤液，浓缩，作为化妆品和医用的原料液。成品设计：配料营养液在水相配制成品乳化配方设计油相原料液配制成品成品功能性检测：去痘、美白、抗衰老等.质量标准及分析检测：稳定性、安全性等.作品的科学性先进性及独特之处本作品在化妆品原料液的提取中采用方开泰和王元先生提出的均匀试验设计方法，该方法是对多因素多水平的试验设计提出的，具有均匀好、试验次数少，预报准确等特点。广泛用于国防、工业等的试验设计。本实验采用该方法的设计思路：根据酸—酶解珍珠层粉的反应因素、反应水平数及因素间可能存在的交互作用选择合适的均匀设计表，建立试验方案，通过实验、利用方差分析和回归分析法，建立数学模型，优化数学模型，从而预报较佳的实验条件和响应值（配方设计也会尝试用该方法进行设计）。一直来国内对珍珠的水解报道较多，但能检测出色氨酸的报道较少见，是因先用盐酸解珍珠使色氨酸受到破坏之故。色氨酸是一种衡量蛋白质品质的重要指标之一，是人体所必要的氨基酸。本实验采用酸——酶水解法，再用高效液相色谱（HighPertormanceLiquidChromatography）对酶解液的滤液进行分离及检测，用原子发射光谱（AtomicEmissionSpectrometry）等对酸解液的滤液进行微量元素的检测，有望检测出色氨酸及之前未能被检测出成份。本护肤品是O/W型的润肤露，运用HLB法配制而成的，离心测试为一级品，耐寒耐热测试均为优级品，酸性在6.0左右与人体的皮肤的酸碱性相适应，油水乳化体系的稳定性高。本产品的添加了多种透皮促进剂，促使珍珠营养液能被皮肤吸收。作品的实际应用价值和现实意义本实验采用兼价的珍珠层粉作为原料，操作成本较低，开发出来的营养护肤品较易为大众所接受。本实验提取出的珍珠层粉营养液可以广泛地应用于健康、医疗及食品工业等方面，本实验得到的护肤系列产品，将对人体的皮肤起到增强免疫力、消斑、抗衰老等作用，进而保护人体皮肤健康。学术论文文摘珍珠层粉是由贝壳珍珠层研磨得到的，其成分组成和结构与珍珠粉非常相似，因此二者有相似的药效作用。珍珠层粉较珍珠粉的价格便宜得多，珍珠层粉完全有可能替代名贵的珍珠粉作为开发化妆品和保健食品的原料，这样可以大大降低成本。本文采用酸酶水解的方法从珍珠层粉中提取出钙离子、微量元素和蛋白质，并对它们进行处理，从而得到浓缩了的营养液。并将制得的营养液加入已设计好的珍珠层粉营养露配方中，使其营养成份更易于被人体吸收，从而提高珍珠层粉的利用价值。作品在何时、何地、何种机构举行的会议上或报刊上发表及所获奖励鉴定结果请提供对于理解、审查、评价所申报作品具有参考价值的现有技术及技术文献的检索目录主要参考文献：1、方开泰,马长兴.2001.正交与均匀试验设计[M].北京：科学出版社.2、樊欣,邵谦谦.2003.SAS8.X经济统计[M].北京：北京希望电子出版社.3、张洪渊,万海清.2002.生物化学[M].北京：化学工业出版社.4、黄青萍，盘红梅等.2000.珍珠的药理作用及临床应用[J]．时珍国医国药,11（6）：564～565.5、郑全英，毛叶盟.2004.海水珍珠与淡水珍珠的成分、药理作用及功效[J].上每中医约杂志,38（3）：54～55.6、裘炳毅.1995.化妆品化学与工艺技术大全[M].中国轻工业出版社.申报材料清单（申报论文一篇，相关资料名称及数量）1.申报论文：《珍珠层粉在化妆品中的应用》科研管理部门签章年月日

C.当前国内外同类课题研究水平概述说明：1.申报者可根据作品类别和情况填写；2.填写此栏有助于评审。珍珠是由贝体外套膜中的珍珠囊分泌的珍珠质沉积而成,而贝壳是直接由外套膜分泌产生的。鉴于二者的成分和结构非常相似此,近年来人们在对珍珠粉综合开发利用的同时,也增加了对珍珠层粉价值开发研究,以期在利用方面以廉价的珍珠层粉替代价值昂贵的珍珠粉作为化妆品或保健品的原料,达到节约和开发并举的目的。（一）贝壳珍珠层的成分孙家美等[1]曾用X射线荧光光谱仪法对25种淡水贝壳珍珠层进行了多种元素的检测,共检测出18种元素，尽管这些贝类生活环境、方式、个体大小、身体形状、珍珠层颜色等各不相同,但其元素组成却极为相似。主体元素是Ca,海产贝壳都含有Cl,有的还检测到Br和I。陈贵卿等[2]对21种贝类进行的X射线衍射分析发现,有的贝类珍珠层完全由文石组成,如背角无齿蚌、褶纹冠长蚌、黑珠母贝、合浦珠母贝、大珠母贝、珠母贝、企鹅珍珠贝等;而有的贝壳珍珠层则完全由方解石组成,如近江牡蛎,但这类种属极少。就目前见到的研究珍珠层有机组成的文献(国内)中,只有有关氨基酸的报道，证明氨基酸是贝壳珍珠层有机物组成的主体,且不下15种之多,以丙氨酸和甘氨酸为最多。因测试的具体贝类不同,其种类和数量略有差异,氨基酸占整个珍珠层含量的1%～5%。有的文献指出,珍珠层中还含有多糖、色素等其它一些有机物,但具体的分离、测试尚未见报道。（二）在医药和化工方面的开发应用曹彩等[2]对珍珠、珍珠层粉在医疗保健进行了探测，表明珍珠、珍珠层粉从成虫早期开始给药能明显延长果蝇的平均寿命和最高寿命,海水珍珠和珍珠层粉对雄性果蝇效果较好。而从成虫中期开始给药时,效果不如从成虫早期开始给药好。珍珠、[2]冯丽琪等[3][3]珍珠层粉对免疫功能有改善作用,对治疗口腔溃疡有一定疗效[4][4]对珍珠层粉应用范围的拓展有助于进一步提高珍珠养殖业的附加值。目前对珍珠粉和珍珠层粉的利用主要是取其氨基酸、蛋白质和微量元素,而对在整个量上占优势的珍珠钙的利用却还很少。朱越雄等[5][5]珍珠入药,有镇心定惊、清肝除翳、收敛生机之用。近年来随着珍珠医药保健品、饮品和化妆品的大量开发,珍珠的价格有升无降,于是人们就将开发的目光投向了成分与其相似的贝壳珍珠层。刘承松、谢玉坎等人对大珠母贝珍珠层的化学成分进行了系统研究后指出大珠母贝、合浦珠母贝的贝壳珍珠层与其天然珍珠在化学组分上基本相似,少数无机元素的差异不足以影响其药用价值,用珍珠层代替珍珠入药,从化学组成的相似性这一点来看是合理可行的。上海测试技术研究所对多种珍珠及其贝壳珍珠层的主要成分、微量元素、氨基酸种类、含量进行对比分析后认为:二者有相同的药理效用,完全有可能用人们遗弃的贝壳珍珠层替代名贵的珍珠。由于贝壳珍珠层含有丰富的氨基酸和许多人体必需的微量元素且价廉易得,成为开发高级化妆品的重要原料,在起到良好保健作用的同时也会收到客观的经济效益。据所查文献，珍珠层粉被很多人所忽略，对其研究还比较少，除了在医药方面简单应用外，大多数都被抛弃，在化妆品的应用中还没有它的足迹，因而，本实验是一个值得研究的课题。[参考文献]：[1]孙家美,毛振伟。贝壳珍珠层元素的X射线荧光光谱分析。湛江水产学院学报,1991,11(2):25~30。[2]梁金龙,王惊涛,彭明生.贝壳珍珠层的研究与应用[J].矿物岩石地球化学通报,1999,(18):403～404.[3]曹彩,徐志,韦焕英,姚树汉,刘元.珍珠、珍珠层粉医疗保健新用途初探[J].中国中药杂志，1996，（21）：635～638.[4]冯丽琪,李小薇,江瑜茵,等.新生儿红臀与局部微生物感染的关系[J].南方护理学报,2004,11(5):315～316.[5]高平.复发性口腔溃疡用山茛菪碱与珍珠层粉治疗的疗效观察[J].河北医学,2002,(8):1024～1025.[6]朱越雄,宋慧春.珍珠层粉作为乳酸发酵中钙源添加剂的研究[J].水利渔业,2003,(23):14～15.D.推荐者情况及对作品的说明说明：1．由推荐者本人填写；2．推荐者必须具有高级专业技术职称，并是与申报作品相同或相关领域的专家学者或专业技术人员（教研组集体推荐亦可）；3．推荐者填写此部分，即视为同意推荐；4．推荐者所在单位签章仅被视为对推荐者身份的确认。推荐者情况姓名乐学义性别男年龄46职称教授工作单位华南农业大学理学院通讯地址华南农业大学理学院应用化学系邮政编码510642单位电话020—85287010住宅电话020—85282024推荐者所在单位签章（签章）年月日请对申报者申报情况的真实性作出阐述本作品系罗善锴等三位同学组成的小组独立完成，查阅的文献资料充实，方案可行，数据可信，结论正确。请对作品的意义、技术水平、适用范围及推广前景作出您的评价本作品开发珍珠层粉作为较廉价的化妆品添加剂，设计出合理的化妆品配方，并进行了初步的功能性检测，有较好的发展前景，为开发化妆品市场、充分利用贝壳珍珠层粉提供了可能。其它说明推荐者情况姓名杨卓鸿性别男年龄33职称教授工作单位华南农业大学理学院通讯地址华南农业大学理学院应用化学系邮编510642单位电话85280319住宅电话38902602推荐者所在单位签章签章日期年月日请对申报者申报情况的真实性作出阐述本作品是由罗善锴等三位同学亲自查阅文献资料和书籍，设计实验方案，并对实验结果进行了详细分析、讨论，得出了初步结论，为下一步深入研究打下基础。请对作品的意义、技术水平、适用范围及推广前景作出您的评价本作品以廉价的贝壳珍珠层粉为原料，并利用其提取液为添加剂，研制高级化妆品，选题新颖。查阅大量文献资料，设计与文献方法不同的配方，通过系列实验筛选出较好配方设计，具有深入研究的价值。作品的结果表明珍珠层粉加入到化妆品中效果明显，有较好的推广应用前景。其它说明学校组织协调机构确认并盖章（团委代章）年月日校主管领导或校主管部门确认盖章年月日

E．大赛组织委员会秘书处资格和形式审查意见组委会秘书处资格审查意见审查人（签名）年月日组委会秘书处形式审查意见审查人（签名）年月日组委会秘书处审查结果□合格□不合格负责人（签名）年月日

F．参赛作品打印处珍珠层粉在化妆品中的应用罗善锴罗冠生林韶芸指导老师：玉副教授华南农业大学理学院，广州，510640摘要：珍珠层粉是由贝壳珍珠层研磨得到的，其成分组成和结构与珍珠粉非常相似，因此二者有相似的药效作用。珍珠层粉较珍珠粉的价格便宜得多，珍珠层粉完全有可能替代名贵的珍珠粉作为开发化妆品和保健食品的原料，这样可以大大降低成本。本文采用酸酶水解的方法从珍珠层粉中提取出钙离子、微量元素和蛋白质，并对它们进行处理，从而得到浓缩了的营养液。并将制得的营养液加入已设计好的珍珠营养露配方中，使其营养成份更易于被人体吸收，从而提高珍珠层粉的利用价值。关键词：珍珠层粉酶解液凯氏定氮法化妆品PEARLLAYERPOWDERAPPLYINCOSMETICAuthor:LuoShangKaiLuoGuangShengLinShaoYunInstructor:HeTingYuAssociateprofessorCollegeOfScienceOfSouthChinaAgriculturalUmiversity,Guangzhou,510640Abstract:Pearllayerpowder,whichisskivedfromconchpearllayer,resemblespearlpowderiningredientandstructure.Sotheyarealikeinmedicaleffect.Butpearllayerpowderismorechearperthanpearlpowder.IfpearllayerpowderisusedintheCosmeticandhealthfoodasasubstituteofpearlpowder,thecostofproductioncanbereducedinthisway.Thetextadoptacid—enzymehydrolyzetodealwithpearllayerpowder.Thecalciumion,microelementandprotein,whichextractedfrompearllayerpowder,canbefurtherprocessedturnintothenutritionliquid.NutritionliquidwillbejoinedintotheMoisturizingcream.SothattheFunctionalpositionofthepearllayerpowdercanbemoreearilyabsorbedbytheskin.Accordingly,thevalueofpearllayerpowderisimproved.Keywords:PearllayerpowderEnzymolysisliquicMicroKjeldhalCosmetic1前言珍珠是一种非常重要的中药材，也是一种高贵的装饰品，在我国已有两千多年的使用历史。《本草纲目》载“珍珠涂面，令人润泽好颜色。珍珠涂手足，去皮肤逆胪,能化面去黯,令光泽洁白”。据文献报道，珍珠含有的主要成分为碳酸钙、微量元素和有机物。而有机物中主要组成是角壳蛋白，角壳蛋白由多种氨基酸组成，主要有谷氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、、亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、门冬氨酸[1]～[4]。微量元素主要有铁、锌、钴、铬、锰、锶和镍等。我国珍珠资源十分丰富。目前，中国淡水珍珠年产量过1200吨，成为世界第一产珠国，而贝壳珍珠层作为珍珠生产的副产物，其年产量也很大。有资料报道，贝壳珍珠层的主要成分与珍珠相似，同样含有碳酸钙、有机物和微量元素，且二者的药效作用也相当[5]。但贝壳珍珠层价格低廉，因此对贝壳珍珠层的利用引起了人们极大的重视和兴趣。一般地，贝壳珍珠层被研磨成粉末而应用于美容科学。其用法有两种：口服和外敷。据文献报道［6］，用珍珠层粉外敷治疗青春期痤疮临床实验治愈例为76％以上。广州第一人民医院中医科也用珍珠层粉外敷辅助清痘饮治疗青春期痤疮63例，有效率达93％［7］。可见珍珠层粉药效功效之大。珍珠层粉外敷的一般用法是用水调成糊状涂于患处或做成面模敷于脸上，这样的做法致使许多有效成分被不溶于水的碳酸钙所包围，不能被皮肤很好的吸收；且时常要调糊成模，使用起来不方便，因此珍珠层粉的进一步开发利用显得很有必要。本实验通过酸—酶解反应，使不溶的碳酸钙转化为钙离子、角壳蛋白转化为氨其酸和小肽，所以酶解—酸解后的珍珠层粉不受碳酸钙和有机物颗粒的影响，应用于护肤品中更能被皮肤吸收，使用起来也较为方便。它的保健功效是:去痘、消斑、增白、嫩肤。2实验部分2.1原料、试剂和仪器珍珠层粉，购于湛江银浪海洋生物技术，批号：20060701乳酸，分析纯（天津市化学试剂一厂）,批号：060417胰蛋白酶，活力为1000～1500u/mg（上海源聚生物科技）,批号：060528FOSSKjeltexTM2200自动凯氏定氮仪电子分析天平（ProducebyMetlerToledoGroup）OJ—90电动搅拌器（天津欧诺仪器仪表）SY—1—2电热式恒温水浴锅（天津欧诺仪器仪表）JRJ—300—1剪切乳化搅拌机（上海标材模型厂）台式离心机（上海安亭科学仪器厂）电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备）其他试剂均为国产分析纯2.2珍珠层粉样品分析2.2.1珍珠层粉的钙含量测定准确称取0.4542g珍珠层粉，并将其溶于蒸馏水中，定溶至100ml，。用移液管精确量取四份20ml的样品于250ml锥形瓶中，根据GB/T192812003测定钙含量的方法对样品进行标定。2.2.2珍珠层粉蛋白质含量测定在分析天平中准确称量1.000g珍珠层粉三份于小烧杯中，分别加入数毫升1.0mol/L的硫酸溶液，使CO32转化为CO2逸出，再用自动凯氏定氮仪测定其蛋白质含量。2.3角壳蛋白的提取及制备2.3.1均匀设计方法影响角壳蛋白提取率（y）的因素有乳酸浓度、反应温度、反应时间、搅拌速度。本实验采用均匀设计试验的方法[8]，在恒定搅拌速度的条件下对乳酸浓度（x1）、反应温度（x2）及反应时间（x3）三个因素进行考查。表1每个因素取7个水平Tab.1everyfactorchosesevenlevel酸浓度acidconcentration/％：141618202224温度temperature/℃：404550556065时间time/h：11.522.533.5利用DPS统计软件自带的均匀试验设计功能，通过输入3因素6水平进行迭代5min，得到以下均匀设计表。表2均匀设计表及对应水平Tab.2Uniformdesigntableandparallelismlevel因子乳酸浓度（x1）反应温度(x2)反应时间(x3)FactorlacticacidreactionreactionConcentration/%temperature/℃time/hN1(1)14(2)45(4)2.5N2(6)24(3)50(5)3.0 N3(4)20(1)40(2)1.5N4(5)22(6)65 (3)2.0N5 (3)18(5)60(6)3.5N6(2)16(4)55(1)1.0注：中心化偏差CD＝0.1365Notice:centerwarpCD=0.13652.3.2均匀设计实验步骤1．配制相应浓度14％、16％、18％、20％、22％及24％的乳酸溶液250ml。2.准确称取5.000g珍珠层粉于250ml三口烧瓶中，用20ml水把烧瓶壁的层粉洗干净，从下到上安装反应装置，固定装置后，开启电动搅拌器，以预定速度搅拌，再打开恒压漏斗（预先盛有相应的乳酸溶液），慢慢滴入乳酸溶液，以反应器内少量气泡为宜，滴完后用10ml水润洗量筒和恒压漏斗，润洗液滴入反应器。并适当摇匀反应器。3.预定时间一到，停止搅拌，反应后溶液PH为5～6。把反应液移入离心管，用15ml水冲洗烧瓶。离心管于相应温度恒温10min，然后以4500rpm离心10min，上层液倒入锥形瓶，用15ml水把各管沉淀洗进一支离心管，再以4500rpm离心5min，上层液倒入锥形瓶，再洗涤离心管两次。然后用10ml水洗涤沉淀，把滤渣洗入烧杯，用凯氏定氮法进行蛋白质的测定,计算提取率y。把滤液浓缩至饱和，静置过夜，以少量沉淀析出为宜，备用。重复以上操作6次。2.4酶解反应参考文献[9]的方法，对1.3提取出的角壳蛋白进行酶解反应。1酶液的配制准确称取0.5000g胰蛋白酶，溶于PH＝8.04的磷酸二氢钾—磷酸氢二钠的缓冲溶液中，再定溶至100ml，配成0.005g/ml的酶液。2反应液的制取对1.3酸解反应确定的条件进行放大处理，以20g层粉反应，以获得足够多的、较为纯的角壳蛋白。准确称取0.1000g角壳蛋白于50ml三口烧瓶中，加入PH＝8.04的磷酸二氢钾—磷酸氢二钠缓冲溶液10ml，用搅拌棒慢慢搅拌使角壳蛋白溶解，再加入（1）配制的酶液2ml,于50℃水解24h。反应完后，把反应器至于90℃环境中保温10min灭酶，再把反应液移入离心管，并用5～10ml水冲洗三口烧瓶，以4500rpm离心，上层清液于旋转蒸馏仪中浓缩至一定体积。2.5化妆品营养液制取合并1.3酸解后离心的上层清液与1.4酶解后离心的上层清液，加入少量活性碳，数小时后抽滤，所得滤液即为珍珠层粉营养液。2.6化妆品配方设计2.6.1实验用的配方：（100g）表3配方设计Tab.3ThedirectionforproducingEmollientcream物质TheincludingofEmollientcream（％）配方一Partone配方二Parttwo配方三Partthree配方四Partfour油相Oilobject蜂蜡Beeswax110.50.42硬脂酸Stearicacid4442.6羊毛脂Woolwax221.030.84十六醇Cetylalcohol332.51.28硅油Dimethicone334.125BRIJ720.80.80.840.51水相Aqueousobject甘油Glycerin555.034.21聚乙二醇－400PEG4005554.29三乙醇胺Triethanolamine0.50.50.510.37EDTANa20.70.70.70.61硫代硫酸钠Hyposulphite0.10.10.10.1尼箔金甲脂PHBesters0.10.10.10.1硼酸Boracicacid0.50.50.50.5珍珠层粉营养液Pearllayerpowdenutritionliquid3～53～53～53～5BRIJ7212.42.42.41.71去离子水Deionizedwater余量leavings余量leavings余量leavings余量leavings2.6.2实验步骤1.按照以上的四个配方配好相应水相和油相。加热水浴锅中的水至80℃待用。2.用75％以上的乙醇蒸汽将乳化剪切机的定子和转子熏10min。所要用的仪器都要用75％的乙醇消毒或者用沸水消毒10min，并烘干待用。3.将水相和油相分别加热到90℃，使油相和水相中的各物质完全熔化，并保温30min，灭菌。30min后将油相转移到磁力搅拌机上搅拌并恒温80℃左右，确定油相完全熔化后，待水相85℃时把水相缓慢地加入油相当中，加完后搅拌数分钟，此时要恒温在75℃左右。把均质后混合液转至乳化剪切机进行乳化剪切，并用水浴锅恒温70℃～75℃左右。若在转移的过程中油水混合液的温度低于70℃必须在低速乳化的情况下把混合液加热到70℃才缓慢的调节乳化剪切机的速度至5000～5500rpm。当乳化机的速度达到5000～5500rpm时要迅速记下时间。20min后调整乳化剪切机的速度至1500rpm左右，并记下时间。待温度降至55℃左右时关闭乳化剪切机，并记下时间，此时为成品。2.7产品功能性检测1.确定乳化类型将乳液滴加在含有CoCl2的干燥滤纸上，若液滴周围变红则为O/W型乳液，若依然为蓝色则为W/O型乳液[10]。2.稳定性测定将10克产品装入离心管中，将烘箱的温度调至48±1℃左右，（保温一个小时，目的是使润肤露均匀地到达48℃。）立即拿到离心机中离心分别以2000rpm.3000rpm.4000rpm离心30min。若以2000rpm离心30min不分离则为合格品，以3000rpm离心30min不分离则为一级品，若以4000rpm离心30min不分离则为优秀品[11]。3.耐热考验将产品置于烘箱中，并保温48±1℃24小时后取出恢复到室温，若不出现油水分离的情况，则产品耐热性优[11]。4．耐寒性考验将产品置于冰箱中，并分别保温－5℃，－10℃，－15℃24小时后取出恢复室温观察油水情况。若保温－5℃24小时后恢复室温油水不分离则为合格品，若保温－10℃24小时后恢复到室温不分离则为一级品，若保温－15℃24小时后恢复室温油水不分离则为优级品[11]。3结果与讨论3.1珍珠层粉的钙含量表4测定珍珠层粉钙的结果Tab.4theresultofmensuratepearllayerpowdercalcic项目样品体积EDTA浓度所用EDTA体积碳酸钙含量平均值相对偏差itemsampleEDTAuseEDTAvol.calciumaveragerelativevol./mlconcentrationv/mlcarbonatevaluewarpc/(mol/L)contentω/%/%/%117.0594.5030.63217.4096.4431.413200.050317.0894.67095.0990.45417.1094.7800.34钙含量以碳酸钙（CaCO3）的质量分数ω计，数值以％表示，按以下公式计算：ω=*100结果列于上表第五列。M——碳酸钙的摩尔质量数值，单位为克每摩尔（g/mol）(M=100.1)。m——称取的珍珠层粉质量，单位为克(g)。由以上结果可知，第二号样品相对偏差太大，估计为异常值，应将其去除。去除后碳酸钙含量平均值及相对偏差。表5去除异常值Tab.5wipeoffabnormityvalue项目碳酸钙含量平均值相对偏差itemcalciumcarbonateavergevaluerelativecontentω/%/%warp/%194.5030.16394.67094.6510.02494.7800.14去除异常点后，结果令人满意。3.2测定珍珠层粉中蛋白质含量表6凯氏定氮测定蛋白质含量结果Tab.6theresultofMicroKjeldhalmensurateproteincontent项目层粉质量盐酸浓度所用盐酸体积试剂空白所用含氮量平均值盐酸体积Itemlayerhydrochloricusehydrochloricreagentblanknitrogenavergepowderacidacidvol./mlusehydrochloriccontentvaluemass/gconcentration/(mol/L)acid/ml/g/g11.000.47783.040.570.00428721.000.06188.685.020.0031670.00335131.000.05907.454.110.002598根据蛋白质的质量与蛋白质中含氮量的关系，即6.25g蛋白质中含有1g氮。所以珍珠层粉中蛋白质含量为0.021g/1g层粉。由于尝试采用了不同浓度的盐酸标定吸收液硼酸，所得结果有点不尽人意。3.3寻求较适提取角壳蛋白的条件表7均匀设计试验结果Tab.7thetestresultofuniformdesign因子乳酸浓度x1反应温度x2反应时间x3含氮量yFactorlacticacidreactionreactionnitrogenConcentration/%temperature/℃time/hcontent/gN114452.50.010633N224503.0 0.010071N320401.50.012208N42265 2.00.009889N5 18603.50.010832N616551.00.012814由上表可知，6次试验结果中以第6号试验的效率（0.012814）为最高，相应的试验条件为：乳酸浓度x1＝16％，反应温度x2=55，反应时间x3=1.0。现为研究各因素对响应值的影响，运用SAS系统[8]上线性归模型对试验进行分析，结果如下:模型y=0.015880.00009546x10.00002423x20.00076529x3表8方差分析Tab.8AnovaAnalyse方差来源自由度平方和均方FP值SourseDFSumofSquareMeanSquareFValuePValue回归Model30.000004450.000001481.180.4898误差Erro20.000002520.00000126总和CorrectedTotal50.00000698表9参数估计Tab.9ParameterEstimate变量自由度参数估计标准差tp值VariableDFParameterEstimateStandardErrortValuepValue截距intercept10.015880.003524.520.0457x110.000095460.000138930.690.5630x210.000024230.000055570.440.7054x310.000765290.000555711.380.3024调整后的相关系数Ra=0.0963由方差分析的F检验和各参数估计的t检验可以看出，各因素对响应值都没有统计意义，因此，线性回归模型并不适合。进一步考虑用二次响应回归模型，但无法得到回归结果。因此对结果采用直观分析的方法，结果是以第6号试验最好，但在对第6号试验结果进行研究时发现，提取物包含有较多未反应的碳酸钙，这将影响下一步的酶解反应。为此，对6次试验中再进行分析，发现第3号试验效率较高、且提取物包含的碳酸钙很微量，相应的条件为乳酸浓度为20％，反应温度为40℃，反应时间为1.5h。利用第3号试验条件进行重复试验。表10重复试验结果Tab.10Theresultofrepeattest次数乳酸浓度反应温度反应时间含氮量TimelacticacidreactionreactionnitrogenConcentration/%temperature/℃time/hcontent10.010062220％401.50.01132330.010845由表七可知，试验重复性好。3.4配方乳化结果1.配方一的乳化剪切的时间为44min其中以速度4000rpm～4500rpm乳化的时间为30min，降温乳化的速度为1000rpm,时间为10min。而配方二乳化剪切的时间为31min，其中15min是以4000rpm～4500rpm进行乳化，降温乳化的速度为1000rpm，时间为10min。配方三乳化时间为33mi