果洛牛布鲁氏菌病的流行诊断和综合防控策略的分析探讨

牛布鲁氏菌病是现代牛养殖业中危害极大的一类人畜共患传染性疾病，病原主要进行消化道、生殖道、呼吸道和破损的黏膜组织等多种渠道进行传播，很容易在养殖、屠宰、销售等诸多环节传播流行，严重威胁到养殖人员和消费者的身心健康以及畜牧养殖安全。青海省果洛州有着悠久的牛养殖历史，牦牛养殖产业是当地的支柱性产业，随着近年来养殖规模逐渐扩大，规模化养殖场的建设数量逐渐增加以及养殖户对外引种频率的显著增强，布鲁氏菌病的传入风险大大增加，如果缺乏科学有效的诊断和防控，势必会对牛的正常生长发育构成严重危害。目前基层地区的农牧民群众对布鲁氏菌病的危害认知不足，在日常养殖过程中，并不能够做好疾病的有效识别和防治工作经验的有效总结，当出现疑似病例之后，不知道该采取哪种措施进行有效的处理，最终造成布鲁氏菌在养殖场中大范围传播蔓延，引发大批量的牦牛发病，带来不可挽回的直接损失。本次研究在对青海省果洛州牛养殖现状进行探讨的基础上，进一步分析了布鲁氏菌病的流行特点、诊断方法和综合防控措施，希望对更好地降低该类疾病的发生流行率有一定帮助。一、青海省果洛州牛布鲁氏菌病的防控现状1、青海省果洛州牛养殖产业现状青海省果洛州属高原大陆性季风气候，冬长夏短，温差较大，降水稀少，年平均气温-2～2℃，1月平均气温-15～-5℃，7月平均气温10～16℃，平均年降水量300～500mm，主要集中在6～9月，年日照时数2800～3000h。当地拥有丰富的畜牧资源全州草地面积，占全省草场面积的1/3以上，境内有黄河、玛曲河等河流，高原气候凉爽，昼夜温差大，有利于畜牧业的发展，再加上藏族文化中重视畜牧业，当地农牧民群众拥有丰富的畜牧业传统和养殖经验。目前果洛州已经基本形成了以牦牛肉、牦牛奶、牦牛绒为核心的牦牛产业链。2、青海省果洛州牛布鲁氏菌病防控现状随着青海果洛州牦牛养殖产业的不断向前推进和发展养殖规模扩大背景之下，以布鲁氏菌病为主的人畜共患传染性疾病呈现散发流行的态势，并且越发严重，其中玛多县、班玛县、久治县等地发病率较高，病原主要通过接触感染牛的胎盘、胎衣、流产物、精液等途径传播。为更好降低布鲁氏菌病的阳性率，确保牦牛养殖安全，当地农牧部门和政府部门高度重视牛布鲁氏菌病的防控工作，定期对牛群进行布鲁氏菌抗体检测，发现阳性牛后，立即隔离并扑杀，对密切接触牛只进行检测和隔离，对4～8月龄的雌性犊牛进行布鲁氏菌疫苗接种，建立免疫屏障，加强疫区彻底消毒，对疫区引进的牛只进行检疫和隔离，同时开展牛布鲁氏菌病防治知识宣传和培训，增强牧民的防控意识和能力。尽管果洛州采取了积极的防控措施，但牛布鲁氏菌病防控仍面临挑战。在疫病防控期间部分农牧民对布鲁氏菌病认识不足，防控措施落实不到位，另外果洛州地处高原，自然环境复杂，增加了布鲁氏菌传播的难度，再加上野生动物也可能携带布鲁氏菌，对牛群构成潜在威胁。二、牛布鲁氏菌病的流行病学1、牛布鲁氏菌病的病原学布鲁氏菌病是由布鲁氏菌属的细菌引起，病原为革兰氏阴性细菌，呈球形、球杆状或短杆状，无鞭毛，不运动，也不形成芽孢，在沙黄-孔雀绿染色中呈红色，而其他细菌则呈绿色，这一特性可作为其鉴别依据。布鲁氏菌为绝对厌氧菌，对氧气非常敏感，需要在无氧环境下生长。在低温、干燥的环境中，其活动能力较强，而在高温条件下活动能力较差，在60℃的环境中，约30min即可将其杀死。在体外环境中细菌的抵抗力较强，能在动物的乳汁、皮毛、分泌物和排泄物中存活数月，对常用的物理和化学消毒方法均敏感，湿热60℃或紫外线照射20min即可灭活。目前，布鲁氏菌病在全球近170个国家和地区的人畜中存在，在我国布鲁氏菌病曾在20世纪80年代和90年代初期得到基本控制，但自90年代中期起疫病持续快速上升，成为报告发病率上升速度最快的传染病之一。2、牛布鲁氏菌病的致病机理牛布鲁氏菌可通过皮肤损伤、吸入或摄入进入人体，优先靶向单核巨噬细胞，在单核巨噬细胞内牛布鲁氏菌在细胞质中存活和增殖，并在增殖过程中能够产生多种致病因子，常见的包括脂多糖（LPS）和生物膜，这些因子会抑制宿主的免疫反应，LPS抑制巨噬细胞吞噬和杀菌活性，生物膜形成保护层，防止抗体和免疫细胞的进入。随后布鲁氏菌产生胞内生长抑制因子（IGS），损害巨噬细胞并导致细胞坏死，胞内增殖会破坏单核巨噬细胞的生理功能，导致免疫反应受损，细胞当中的布鲁氏菌死亡之后会释放脂多糖（LPS），导致炎症、发烧和组织损伤，炎症细胞又会进一步释放促炎细胞因子，例如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6），并持续在单核巨噬细胞内建立持续感染。3、牛布鲁氏菌病的流行特点从当前牛布鲁氏菌病的流行情况来看，该种疾病在牧区大多呈现散发流行状态呈散发流行状态，并且近年来越发严重，发病率逐年上升，已波及果洛州所有县市，主要感染牦牛和黄牛，牦牛感染率高于黄牛，病原要通过接触感染牛的胎盘、胎衣、流产物、精液等途径传播。从传播规律来看，牛布鲁氏菌病的流行具有一定季节性，牧区该类疾病发病多集中在春季和秋季，与牛的繁殖季节有关，青年牛和初产牛感染率较高，呈现地域性分布，牧区发病率高于农区。从流行原因来看，果洛州牛布鲁氏菌病的流行往往与养殖方式、免疫接种、农牧民群众的防控意识、野生动物的接触密切相关，当前在牧区大多数农牧民群众一直坚持放牧为主，牛群间接触频繁，增加了传播风险，再加上部分牧民未及时对牛犊进行疫苗接种，对布鲁氏菌病的认识不足，防控措施落实不到位，以及野生动物也可能携带布鲁氏菌，对牧区牦牛生产构成潜在威胁。三、牛布鲁氏菌病的临床症状牦牛布鲁氏菌病的潜伏期一般为7～60d，平均约为2～3周，但也有报告指出，少数病例的潜伏期可短至数天或长达数月。感染细菌之后，患病牛就会表现出较为复杂的临床症状，牦牛在急性期可能出现发热，典型的发热形态为波状热，即体温逐渐升高，达到高峰后缓慢下降，热程约2～3周，间歇数日至2周，然后体温再次升高，反复多次，并在此阶段出现寒战、多汗、头痛、肌肉和关节疼痛、乏力、肝脾和淋巴结肿大等症状。病程超过一年的病例称为慢性期，可分为两类，一类是全身性非特异性症状，持续出现低热、症状体征反复出现或加重，类似神经症和慢性疲劳综合征，另一类是器质性损害，骨骼-肌肉系统的损害，大关节损害和肌腱挛缩，神经系统病变如周围神经炎、脑膜炎，以及泌尿生殖系统病变如睾丸炎、附睾炎、卵巢炎等，尤其是妊娠阶段的母牛在妊娠中后期极容易出现流产现象，产下的胎儿大多死亡，即便是胎儿能够存活也会天然携带有布鲁氏菌导致该种病情大范围传播蔓延。四、牛布鲁氏菌病的病理变化通过对病死牛解剖之后能够发现，病死牛的多个脏器器官都会出现广泛性的病理变化，其中肝脏是布鲁氏菌最常侵犯的器官之一，急性感染时，肝脏出现充血、水肿和细胞浸润，随后形成肉芽肿，主要由上皮样细胞、巨噬细胞和淋巴细胞组成，慢性感染时肝脏可能出现纤维化和肝硬化。脾脏肿大，镜下可见淋巴细胞和巨噬细胞的弥漫性浸润，淋巴结肿大，镜下可见淋巴细胞、巨噬细胞和浆细胞的浸润。母畜可能出现流产、不育和子宫炎，公畜可能出现睾丸炎，导致睾丸肿大和萎缩。肾脏出现炎性变化，充血、细胞浸润和肾小球硬化，中枢和周围神经系统病变导致脑膜炎、脑炎和神经炎。将肿大关节切开之后可以发现内部关节炎显著增多，关节软骨坏死，有的病死牛还会表现出心内膜炎和心肌炎，导致心脏病变。五、牛布鲁氏菌病的实验室诊断1、显微镜检查准备好干净的载玻片，患病牛的流产物、胎衣碎片、科兹罗夫斯基染液、95%酒精溶液、显微镜。将病料粉碎之后，按照1∶20用生理盐水进行稀释，在干净的载玻片上滴加少量病料，加一滴科兹罗夫斯基染液覆盖在病料上。放置片刻，让染料与病料充分接触，滴加95%酒精溶液至玻片边缘，让酒精从边缘处缓慢渗入，直至玻片中央，作用30s后，用滤纸吸去多余酒精，自然干燥，用显微镜观察染色后的细菌。在显微镜下能够观察到菌体被染成红色，背景是淡黄色或者淡棕色，其他菌体被染成蓝色。出现上述特征之后，可以初步判定为布鲁氏菌感染。2、虎红平板凝集试验在玻璃板各方格标记受检血清编号，然后加入相应的血清25L，各待检血清旁滴加虎红抗原25L，用灭菌牙签类小棒快速混匀血清和抗原，涂成2cm直径的圆形，于4min内观察结果。标准阴性血型不出现凝集，标准阳性血清出现凝集，在阴性对照和阳性对照成立的基础上待检血清出现凝集之后表示为阳性，不出现凝集表示为阴性。3、试管凝集试验在实验之前准备好布鲁氏菌标准抗原，0.5%石炭酸生理盐水，待检血清，已知阴性和阳性血清，用于对照、凝集试验管（三角管）、试管架、吸管和温箱。按常规方法将牦牛血清从-20℃冰箱中取出恢复到室温温度条件，对试管分别进行标记，记录1号、2号、3号和4号试管。1号试管到4号试管分别加入0.5%石炭酸生理盐水1.15mL、0.5mL、0.5mL、0.5mL。分别取0.1mL被检血清加入1号试管，用吸管将混合液吹打均匀后弃去0.25mL，取0.5mL混合液加入2号试管，取0.5mL混合液加入3号试管，从3号试管弃去0.5mL混合液，取0.5mL混合液加入4号试管，在各个步骤操作完成之后，分别用吸管将混合液吹打均匀。阴性对照和阳性对照成立的条件下，4号试管出现凝集现象且3号试管也出现凝集现象，2号试管不出现凝集现象判定为阳性，4号试管不出现凝集现象，3号试管不出现凝集现象，2号试管出现凝集现象表示阴性，4号试管出现凝集现象，3号试管出现凝集现象，2号试管也出现凝集现象判定可疑。4、全乳环状试验准备好疑似患病牛的全乳样本、布鲁氏菌抗原、PBS（pH7.2-7.4）、环状试验板（直径3cm）。实验操作期间将布鲁氏菌抗原稀释为1∶100，离心全乳样本，取上清液使用，在环状试验板中添加50μlPBS，然后向其中小心加50μL稀释的抗原，沿着抗原和PBS的界面缓慢滴加100μl乳样，将试验板置于摇床或旋转仪上，以60～80r/min的速度旋转30min，在环状试验板的界面处观察结果。在抗原和乳样之间出现明显的环形沉淀带判定为阳性，没有出现环形沉淀带可以判定为阴性，在抗原和乳样之间出现不明显的或部分环形沉淀带判定为疑似感染。必要时可以采集血清进行PCR检测，以确定疫病。六、牛布鲁氏菌病的疫病处置方案在进行牦牛布鲁氏菌病疫病处置过程中，一定要严格落实所出台实施的强制性规章制度。发生疫病之后，应该注重做好疫病的报告工作，确诊疫病后，立即启动应急预案，开展疫病处置工作。首先将病患牦牛与其他牦牛分开，转移到隔离区进行观察，对病患牦牛所处的圈舍、用具使用2%的复合酚或者2%的甲酚皂等消毒剂进行全面消毒，防止疫病扩散，坚持每天上午下午各消毒1次，连续使用一周以后每周消毒1～2次，逐渐过渡到常规消毒方案。对疑似病例进行实验室检测，排查其他牦牛是否感染布鲁氏菌，对确诊为布鲁氏菌病的牦牛严格地扑杀无害化处理，防止疫病反复。同时加强疫病监测与防控，对牦牛进行布鲁氏菌病检测，确保疫病不扩散。疫病控制措施实施后，疫区的最后一头患病牛扑上，或者死亡，连续监测至少21d时间，未发现新发病例，可解除疫病，解除疫病后，应继续加强监测，防止疫病复发。七、牛布鲁氏菌病的综合预防为了有效防控牦牛布鲁氏菌病，需要做到每间隔2～3个月对牦牛群进行布鲁氏菌病的监测，使用血清学检测等方法，及时发现带菌动物，对检出的阳性牛只进行隔离扑杀，避免其与其他健康牛只接触。养殖场内部建立完善的生物安全体系，划分好隔离养殖区，严格控制外来动物及产品进入养殖场，做好畜舍的清洁和消毒工作，特别是对于流产、死胎和排泄物等高风险区域应该严格落实流产物的无害化处理和卫生消毒，避免不同年龄和来源的牦牛混群，特别是避免带菌牛与健康牛混群。另外，加强饲养管理，保持牛只良好的体质，提高其对疾病的抵抗力，避免过度拥挤和不良的饲养环境，减少疾病传播的风险。从事养殖、屠宰、加工等职业的人员在工作过程中，应采取适当的个人防护措施并做到每年对从事相关工作的人员进行健康检查，及时发现和治疗感染者。此前，农业农村部下发的常见动物疫病免疫推荐方案中，将青海省确定为布鲁氏菌病感染的一类地区，所以为更好防控该种疾病的发生流行，应该以县为单位连续3年对牛实行全面免疫接种，推荐使用M5或者S9株布鲁氏菌疫苗对牛进行免疫接种，2月龄以上的健康牛每头牛使用1mL，皮下注射，免疫期12个月。综上所述，牛布鲁氏菌病具