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DB13河北省市场监督管理局发布I本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构与起本文件主要起草人：刘建钗、柳焕章、刘会恰1禽烟曲霉菌病综合诊断技术规程本文件规定了禽烟曲霉病综合诊断技术的临床诊断、实验室诊断和综合本文件适用于鸡、鸭、鹅、鸽子、鹌鹑等禽类烟曲霉下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改各日龄禽均可感染，雏禽易感。病禽眼神呆滞、眯眼、呼吸困4.2剖检病变肺脏发生不同程度坏死、气囊增厚、出现黄色菌斑并包括常规检测和定量PCR检测技术。参照GB19489-22取病禽肺、肝脏、肾等病料，放入无菌的平皿中；其他器官用无菌剪刀各取小块组菌水充分冲洗后，一份接种于YEPD平板上（1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖，2%琼脂粉），一份5.1.2病原菌的分离纯化与形态观察取疑似菌落菌体进一步接种于PDA试管斜面，28℃培养3d后保存备用。选择有典型症状的病禽，无菌采血或病变组织（肺），放入1.5mL灭菌EP管中，将EP管编号，记），解在50μLTE（10mMTris，1上游引物F：5ʹ-TAATAGCTACAA3下游引物R：5ʹ-ACGAGGAACATAT5.2.5标准曲线和熔解曲线性克隆为模板在同样条件下进行SYBRGr5.2.6结果判断样品中含有烟曲霉菌，而且可通过Ct值大小判断感染的程度（参见附录A）。未出现“S”型扩增4A.1镜检28℃恒温培养36h～48h；将疑似单菌落取菌体经革兰氏染色和棉蓝染色镜检，将霉菌样细胞的相应菌落取菌体分别接种于沙保弱培养基平板，于28℃恒温、保湿培养3d～4d，观察平板菌落特征并直A.2判断沙保弱培养基平板上可见中央为蓝绿色，周围为白色的菌落，但蓝绿色占比多于周围白菌落背面，周边为黄绿色，中央为蓝绿色。第四天菌落正面分为三种颜色，由内向外分别为墨A.3不同染色方法检查HE染色：血管充血，呼吸毛细管消失，肺房间隔增宽甚至消失，被结缔组织所取代，并有炎性细织结构不清楚，菌丝染成紫色，孢子染成红色，而背景为蓝紫色，真菌与周围组织反差明显反差明显易辨认。菌丝分布与PAS染色相同；CFW染色，

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