DB13T 2066-2014 牛胚胎性别鉴定技术规程_第1页
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文档简介

DB13河北省质量技术监督局发布I本标准起主要草人：余文莉、苗玉涛、李树静、冯春涛、陈龙、毕1牛胚胎性别鉴定技术规程本标准适用于体内及体外生产的牛早期胚胎准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用《中华人民共和国畜牧法》（中华人民共和国主席令第四十五号2005年12月《中华人民共和国专利法》（中华人民共和国主席令第八号2008年专利：《牛Y染色体重复序列特异性引物及鉴定牛早期胚胎性别鉴定的PCR方法》，(专利号本标准中涉及的胚胎特指处于桑椹胚至扩张囊胚阶段PCR扩增反应缓冲液，含有PCR反应所需的全部特异性引物、内标物、dNTP、4体内胚胎的生产25.1胚胎获得获取处于紧缩桑椹胚（M）、早期囊胚（EB）、囊胚（B）、扩张囊胚（EXB）发育期的体内受精或5.2鉴定标准5.2.11级胚：发育正常，胚龄与发育阶段相吻合，卵裂球轮廓清楚，透5.2.22级胚：发育基本符合预定胚龄，轮廓清楚，明暗适中或稍暗或稍浅3启动超净工作台紫外灯消毒20min后关闭，打开通风开关，用2L～20L可调微量移液器向样品分析管中加8L超纯水，两个管不能同时打开，加样后立即盖住盖6.3.2.2将电泳槽调至水平，胶盘用透明胶带封好，把两套梳子放在胶盘上，把胶盘放在电泳槽6.3.2.3准备好包胶用的保鲜膜、锡泊纸和放杂物的卫生纸6.3.2.6用一纸巾团松松地盖在锥洗胚平皿：在6孔培养皿中依次加入①孔1.5mL～2mL保存液（放置取样前胚胎）、②孔1.5mL～2mL胚胎分割液（做切割滴）、③~⑤孔1.5mL～2mL胚胎分割液（洗取样前胚胎）、⑥孔1.5mL～2mL胚胎保胚胎存放皿：6孔培养皿每孔中放1.5mL～2mL保存液，在底盘各孔的边缘写好相应的胚用准备好的洗刀平皿依次将刀浸入，超纯水、无水乙醇、超纯水、4在ф60mm培养皿的外底部边缘标记做滴方向，用100L定量移液器从性别鉴定洗胚皿②孔胎分割液做切割小滴，之后从性别鉴定洗胚皿①孔胚胎保存液中吸取1枚胚胎放入③孔胚胎分割液中吹a)胚胎切割完成后，用3L微量移液器插上取样洗头吸取胚胎回收液，将吸头尖部对准样品将b)每取一个样换一个吸头，每分割完一枚胚胎都要核对样品管序号与胚胎序号是否一致。用2l～20l可调微量移液器，向每个样品分析管中加入8.5lYCD。每加一个样换一个胚胎吸头。将加好YCD的样品按顺序放入PCR仪中，启动PCR仪，计时60min。具体扩增程序参6.5.1带好乳胶手套，安装电泳槽6.5.4按顺序取出样品分析管，摆将胶块从电泳槽中取出，放到紫外显影仪上观察电泳结果并拍照5在照片上标出鉴定结果（F：雌性；M：雄性；N：空白对），6.8.1将适量漂白剂倒入电泳槽，把胶、样品管一起放入。沾取漂白浸液擦拭仪器表面，把胶6.8.2凡接触与PCR反应和电泳有关的物品均戴手套，凡接

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