RNA干扰介导PARP-1基因沉默：解锁卵巢癌细胞增殖与耐药性之谜

RNA干扰介导PARP-1基因沉默：解锁卵巢癌细胞增殖与耐药性之谜一、引言1.1研究背景与意义卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，严重威胁女性的生命健康。相关数据显示，卵巢癌的发病率在女性生殖系统恶性肿瘤中位居第三，但其死亡率却居于首位。由于卵巢癌早期症状不明显，缺乏有效的早期筛查手段，多数患者确诊时已处于晚期。晚期卵巢癌患者的5年生存率仅为30%左右，且复发率高达85%。这使得卵巢癌成为了严重影响女性生活质量和生存预期的重大疾病。目前，卵巢癌的治疗主要以手术切除病灶为主，辅以铂类及紫杉醇类药物化疗、放疗及靶向抗癌药物等多种治疗方案。铂类化疗药物在卵巢癌治疗中具有重要地位，然而，大多数患者在治疗过程中会出现耐药或复发的情况，这极大地限制了治疗效果，成为卵巢癌临床治疗的一大难题。耐药性的产生使得肿瘤细胞对化疗药物的敏感性降低，导致化疗失败，患者病情进展，严重影响患者的预后。因此，深入研究卵巢癌耐药的分子机制，寻找有效的耐药逆转方法或治疗靶点，对于提高卵巢癌患者的治疗效果和生存率具有至关重要的意义。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）是一种参与DNA修复的蛋白质，在维持基因组完整性方面发挥着关键作用。PARP-1通过识别并结合DNA断裂链，启动并调节多种DNA修复途径。当DNA出现损伤时，PARP-1能够迅速被激活，催化ADP-核糖向靶蛋白转移，从而促进DNA的修复过程。越来越多的研究表明，PARP-1在肿瘤的发生、发展中具有重要的调控作用。在卵巢癌中，PARP-1的高表达与肿瘤的生长、淋巴结转移以及不良预后密切相关。一方面，PARP-1可通过促进肿瘤血管生成，为肿瘤细胞提供充足的营养和氧气，从而支持肿瘤的生长和转移。研究发现，PARP-1可通过PARP-1-缺氧诱导因子-血管内皮生长因子通路促进肿瘤血管的生成，在缺氧反应和肿瘤血管生成中起重要作用。另一方面，PARP-1还能与Snail启动子结合，刺激Snail和波形蛋白共表达，从而促进肿瘤细胞的上皮-间质转化，增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。此外，PARP-1在卵巢癌耐药机制中也扮演着重要角色。有研究表明，在耐药的卵巢癌细胞中，PARP-1的活性增强，能够增强DNA受损后修复的能力，使得肿瘤细胞对化疗药物产生抗性。通过抑制PARP-1的活性或敲除PARP-1基因，能够显著提高耐药卵巢癌细胞对铂类药物的敏感性，提示抑制PARP-1可能成为逆转卵巢癌耐药的有效策略。因此，深入研究PARP-1基因与卵巢癌的关系，特别是其在卵巢癌细胞增殖及耐药性中的作用机制，对于开发新的卵巢癌治疗方法具有重要的理论和实践意义。本研究旨在通过RNA干扰技术抑制PARP-1基因表达，探讨其对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响，为卵巢癌的治疗提供新的靶点和思路，有望改善卵巢癌患者的治疗效果和预后。1.2国内外研究现状在卵巢癌的研究领域，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）与卵巢癌细胞增殖及耐药性的关系一直是研究的重点。国内外学者从多个角度进行了深入探索，取得了一系列重要成果。在国外，早期的研究主要集中在PARP-1的结构和功能解析上。科研人员明确了PARP-1在真核细胞胞核中存在，其具有独特的结构，包括N端的DNA结合区、中间的自我修复区及C端的催化区。这种结构赋予了PARP-1识别并结合DNA断裂链，启动并调节多种DNA修复途径的能力，对维持基因组完整性至关重要。后续研究发现，PARP-1在肿瘤发生和进展中具有重要调控作用。如通过PARP-1-缺氧诱导因子-血管内皮生长因子通路促进肿瘤血管生成，为肿瘤细胞提供充足的营养和氧气，支持肿瘤的生长和转移。在卵巢癌中，PARP-1的高表达与肿瘤的生长、淋巴结转移以及不良预后密切相关，相关研究成果为卵巢癌的治疗提供了新的靶点和思路。随着研究的深入，国外学者开始关注PARP-1与卵巢癌耐药性的关系。有研究表明，在耐药的卵巢癌细胞中，PARP-1的活性增强，能够增强DNA受损后修复的能力，使得肿瘤细胞对化疗药物产生抗性。通过抑制PARP-1的活性或敲除PARP-1基因，能够显著提高耐药卵巢癌细胞对铂类药物的敏感性，提示抑制PARP-1可能成为逆转卵巢癌耐药的有效策略。基于这些发现，PARP-1抑制剂的研发成为热点，多种PARP-1抑制剂已获得美国和欧洲的批准，应用于不同类型卵巢癌的治疗，且对具有BRCA突变的卵巢癌患者疗效显著，为卵巢癌患者带来了新的希望。在国内，学者们也在积极开展相关研究。在PARP-1与卵巢癌血管生成方面，通过免疫组织化学等方法检测上皮性卵巢癌原发灶中PARP-1、VEGF-A、MVD的表达，发现PARP-1表达与肿块大小、病理分级和淋巴结转移具有相关性，且通过调控VEGF-A的表达影响卵巢癌的血管生成。在卵巢癌化疗前后肿瘤组织中PARP-1的表达及其与细胞上皮间质转化的相关性研究中，发现TC方案化疗能够通过抑制卵巢癌病灶内PARP-1的表达来抑制上皮间质转化及血管新生过程，为卵巢癌的化疗提供了理论支持。尽管国内外在PARP-1与卵巢癌的研究中取得了显著进展，但仍存在一些不足。目前对于PARP-1在卵巢癌中的具体作用机制尚未完全明确，尤其是在不同基因背景和细胞类型下，PARP-1的功能是否存在差异，还需要进一步深入研究。虽然PARP-1抑制剂在临床应用中取得了一定疗效，但部分患者会出现耐药现象，对于PARP-1抑制剂耐药机制的研究还不够深入，这限制了其临床应用效果的进一步提升。在RNA干扰技术抑制PARP-1基因表达方面，如何提高干扰效率，降低脱靶效应，以及如何将RNA干扰技术与临床治疗更好地结合，也是亟待解决的问题。1.3研究目的与创新点本研究旨在深入探究RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响，具体研究目的如下：首先，精确检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）在上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13及其亲本的上皮性卵巢癌顺铂敏感细胞OV2008中的表达差异。通过对比这两种细胞中PARP-1的表达情况，为后续研究提供基础数据，明确PARP-1在卵巢癌耐药过程中的表达变化趋势。其次，构建含PARP1-siRNA的慢病毒载体，并成功转染上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13。利用RNA干扰技术，特异性地抑制PARP-1基因的表达，从而深入研究PARP-1基因表达下调对卵巢癌耐药细胞的具体影响，为揭示卵巢癌耐药机制提供关键线索。然后，全面检测转染外源性PARP-1小干扰RNA后对上皮性卵巢癌耐药细胞的影响，包括细胞增殖能力、细胞周期分布、细胞凋亡率以及对顺铂的敏感性等多个方面。通过综合分析这些指标的变化，系统地阐述RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响，为卵巢癌的治疗提供新的理论依据。最后，初步探讨PARP-1与卵巢癌耐药的关系，从分子层面揭示PARP-1在卵巢癌耐药机制中的作用，为开发新的卵巢癌治疗靶点和策略提供有力支持。本研究的创新点主要体现在以下几个方面：在研究视角上，将RNA干扰技术与卵巢癌耐药机制研究相结合，从基因表达调控的角度深入探讨PARP-1对卵巢癌细胞耐药性的影响，为卵巢癌耐药机制的研究提供了新的视角和思路。在研究方法上，采用构建慢病毒载体转染的方式，实现对PARP-1基因表达的有效抑制，相比传统的研究方法，具有更高的干扰效率和稳定性，能够更准确地研究PARP-1基因表达下调对卵巢癌细胞的影响。此外，本研究还综合运用多种实验技术，如MTT法、实时荧光定量PCR、Western印迹法等，从多个层面、多个角度对卵巢癌细胞的增殖及耐药性进行全面分析，使得研究结果更加全面、深入、可靠。这种多技术联用的研究方法，为卵巢癌相关研究提供了新的技术手段和研究模式，有助于推动卵巢癌治疗领域的发展。二、RNA干扰与PARP-1基因概述2.1RNA干扰技术原理与应用RNA干扰（RNAinterference，RNAi）是一种在真核生物中高度保守的转录后基因沉默机制，其作用机制主要包括以下几个关键步骤。首先是dsRNA的引入，外源或内源的双链RNA（dsRNA）进入细胞后，在Dicer酶的作用下被切割成21-25个核苷酸长度的小片段，即小干扰RNA（siRNA）。这些siRNA带有3′端单链尾巴及磷酸化的5′端，是RNAi的起始诱导物。接着进入RISC的形成阶段，切割后的siRNA中的反义链与细胞内的RNA诱导的沉默复合体（RISC）结合，形成具有活性的RISC-siRNA复合体。在这一复合体中，RISC的核心组分为核酸内切酶Ago，它在ATP供能情况下，负责催化siRNA其中一条链去寻找互补的mRNA链。最后是mRNA的降解，RISC-siRNA复合体通过碱基互补配对的方式，识别并结合到靶mRNA的特定序列上。随后，RISC的核酸酶活性被激活，在距离siRNA3'端12个碱基的位置将mRNA切断降解，从而抑制靶基因的表达，使基因沉默。不仅如此，siRNA在RNA依赖性RNA聚合酶（RdRP）的作用下，还能以mRNA为模板，siRNA为引物，扩增产生足够数量的dsRNA作为底物提供给Dicer酶，产生更多的siRNA，可再次形成RISC，并继续降解mRNA，从而产生级联放大效应，少量的siRNA就可以产生高效的基因沉默效果。RNAi技术因其高效性和特异性，在多个领域展现出广泛的应用前景。在基因功能研究领域，RNAi技术是沉默靶基因的主要方法之一，可用于破坏基因在细胞中的转录或翻译，从而评价该基因的功能。通过将特定的siRNA导入细胞，抑制目标基因的表达，观察细胞表型的变化，能够深入了解基因在细胞生长、分化、代谢等过程中的作用。在基因治疗方面，RNAi技术可用于沉默体内特定基因的表达，从而实现治疗目的。在抗病毒治疗中，针对病毒基因设计的siRNA能够有效抑制病毒的复制和传播；在神经系统疾病的治疗中，RNAi疗法也展现出潜力，如针对某些神经退行性疾病相关基因的沉默，有望延缓疾病的进展。在肿瘤研究领域，RNAi技术同样发挥着重要作用。一方面，它可以通过抑制癌基因、生长因子及其受体的过表达来抑制细胞生长。如在乳腺癌研究中，通过RNAi技术抑制HER-2基因的表达，能够显著抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。另一方面，RNAi技术还可通过干扰细胞周期蛋白及其相关基因的表达来抑制细胞增殖。研究发现，干扰细胞周期蛋白D1的表达，能够使肿瘤细胞停滞在G1期，从而抑制肿瘤细胞的增殖。在卵巢癌研究中，RNAi技术也有诸多应用实例。有研究利用RNAi技术沉默survivin基因，有效抑制了卵巢癌细胞株SKOV3/ADM中survivin基因的表达，增加了细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性，显著上调了细胞的凋亡活性。还有研究通过RNAi干扰ERCC1基因，明显抑制了卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP内ERCC1基因mRNA和蛋白的表达，增加了细胞对化疗药顺铂的敏感性。这些研究表明，RNAi技术在卵巢癌的治疗研究中具有重要价值，为卵巢癌的治疗提供了新的策略和方法。2.2PARP-1基因结构与功能聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1），又简写为ADPRT，全称poly(ADP-ribose)polymerasefamily,member1，中文名为多聚ADP核糖转移酶。PARP-1基因位于第1号染色体1q41-q42位置，全长47,399bp，共有25个外显子，mRNA长3,861nt，编码由1,014个氨基酸残基组成的蛋白质。PARP-1主要存在于真核生物中，在染色质结构和转录调控中影响特定信号通路的过程。其具有三个主要结构领域：一是DNA结合片段，其中包含两个锌指基序参与的DNA链断裂识别和核定位信号。当DNA出现断裂时，PARP-1能够凭借这一结构域快速识别并结合到断裂处，为后续的修复过程奠定基础。二是中央自动修改域，包括一个BRAC1的羧基端（DNA修复和细胞信号转导）并有Capase-3酶切功能。这一结构域在PARP-1的自我调节以及与其他蛋白的相互作用中发挥着重要作用，参与DNA修复和细胞信号转导等过程。三是C端催化域，包括一个富含色氨酸-甘氨酸-精氨酸域（WGR）、α螺旋结构域（HD）和ADP核糖转移酶结构域（ART）。催化域是PARP-1发挥其催化功能的关键区域，负责催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸转化为烟酰胺和多聚ADP-核糖，从而启动一系列的生物学反应。PARP-1基因编码的多聚ADP核糖转移酶，通过聚ADP核糖基化反应修正多种核蛋白基因突变，这种修正以DNA为基础，参与多种重要的细胞活动，例如分化、增殖、肿瘤转移等，同时也参与分子水平的活动，例如修复DNA受损等。在众多功能中，DNA修复是PARP-1最为重要的功能之一。PARP-1通常用于修补DNA的单个碱基断裂，这是一种常见的自发性DNA损伤。单个碱基断开在细胞中时常发生，在未修复时对细胞并无大害。然而，当这些断裂的碱基作为DNA副本被转录或者复制时就会破坏和损伤DNA。当DNA发生单链断裂时，PARP-1能迅速被激活，它会与DNA链断裂处相结合，启动碱基切除修复（BER）通路。在这一过程中，PARP-1催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）分解为烟酰胺和ADP-核糖，ADP-核糖会聚合形成长链并结合到PARP-1自身以及其他参与DNA修复的蛋白质上，通过这种聚ADP核糖基化修饰，招募并激活一系列参与BER通路的蛋白，如XRCC1、DNA聚合酶-ε、DNA连接酶III等，协同完成DNA的修复过程，从而维持基因组的完整性。除了参与DNA修复，PARP-1还在抑制受损DNA的转录以及参与部分基因的转录调控等方面发挥作用。当DNA受损时，PARP-1的激活能抑制转录因子与DNA单链的结合，从而防止受损DNA被错误转录，避免产生异常的RNA和蛋白质。在基因转录调控方面，PARP-1可以与一些转录因子相互作用，调节基因的转录活性，影响细胞的生长、分化等过程。研究表明，PARP-1与p53、NF-κB等转录因子相互作用，参与细胞周期调控、细胞凋亡等重要生物学过程的基因转录调控。在细胞受到应激或损伤时，PARP-1的激活状态改变会影响这些转录因子的活性，进而调控相关基因的表达，以维持细胞的正常生理功能或促使细胞发生相应的适应性变化。2.3PARP-1基因与卵巢癌的关联研究进展PARP-1基因与卵巢癌的发生、发展及耐药性密切相关，在卵巢癌的研究领域中，众多学者对PARP-1基因在卵巢癌中的作用机制展开了广泛而深入的研究。在卵巢癌的发生发展进程中，PARP-1基因发挥着关键作用。一方面，PARP-1可通过促进肿瘤血管生成，为肿瘤细胞提供充足的营养和氧气，从而支持肿瘤的生长和转移。有研究表明，PARP-1能够通过PARP-1-缺氧诱导因子-血管内皮生长因子通路，促进肿瘤血管的生成，在缺氧反应和肿瘤血管生成中起重要作用。在缺氧条件下，PARP-1被激活，通过一系列信号转导，上调缺氧诱导因子的表达，进而促进血管内皮生长因子的分泌，刺激肿瘤血管的新生，为肿瘤细胞的增殖和转移创造有利条件。另一方面，PARP-1还能与Snail启动子结合，刺激Snail和波形蛋白共表达，从而促进肿瘤细胞的上皮-间质转化，增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。上皮-间质转化过程使得上皮细胞失去极性和细胞间连接，获得间质细胞的特性，增强了肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，PARP-1在这一过程中起到了重要的调控作用。相关研究还发现，PARP-1的高表达与卵巢癌患者的不良预后显著相关，PARP-1表达水平越高，患者的生存率越低，复发风险越高。PARP-1基因与卵巢癌耐药性之间存在着紧密的联系。在耐药的卵巢癌细胞中，PARP-1的活性明显增强，这使得肿瘤细胞能够更有效地修复因化疗药物导致的DNA损伤，从而对化疗药物产生抗性。有研究通过对顺铂耐药的卵巢癌细胞系进行分析，发现其中PARP-1的表达水平和活性均显著高于顺铂敏感的细胞系，且抑制PARP-1的活性后，耐药细胞对顺铂的敏感性明显提高。这表明PARP-1在卵巢癌耐药机制中扮演着重要角色，其高表达和活性增强可能是导致卵巢癌耐药的关键因素之一。进一步的研究表明，PARP-1参与了多种DNA修复途径，在卵巢癌耐药细胞中，PARP-1通过激活碱基切除修复等通路，增强了DNA受损后的修复能力，使得肿瘤细胞能够在化疗药物的作用下存活并继续增殖。基于PARP-1基因与卵巢癌的紧密关联，PARP-1抑制剂的研发成为卵巢癌治疗领域的研究热点。目前，多种PARP-1抑制剂已进入临床试验阶段，并在部分卵巢癌患者中取得了显著的疗效。这些抑制剂能够特异性地抑制PARP-1的活性，阻断其参与的DNA修复过程，从而使肿瘤细胞对化疗药物更加敏感，提高治疗效果。研究显示，对于携带BRCA突变的卵巢癌患者，PARP-1抑制剂单药治疗即可取得较好的疗效，显著延长患者的无进展生存期。然而，部分患者在使用PARP-1抑制剂后会出现耐药现象，这可能与PARP-1基因的突变、其他DNA修复途径的代偿性激活等因素有关。三、实验设计与方法3.1实验材料准备3.1.1细胞系选择本研究选用上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13及其亲本的上皮性卵巢癌顺铂敏感细胞OV2008。卵巢癌顺铂耐药细胞C13对顺铂具有高度耐药性，能够在含有高浓度顺铂的培养基中存活和增殖，而其亲本细胞OV2008对顺铂较为敏感，在较低浓度顺铂作用下就会受到明显的生长抑制。选择这两种细胞系进行研究，能够直观地对比PARP-1在耐药细胞和敏感细胞中的表达差异，以及RNA干扰抑制PARP-1基因表达后对耐药细胞和敏感细胞增殖及耐药性的不同影响，为深入研究卵巢癌耐药机制提供理想的细胞模型。通过对这两种细胞系的研究，有望揭示PARP-1基因在卵巢癌顺铂耐药过程中的关键作用，为开发新的卵巢癌治疗策略提供有力的实验依据。3.1.2主要试剂与仪器实验所需的主要试剂包括：PARP1-siRNA，用于特异性干扰PARP-1基因的表达，由专业生物技术公司合成，序列经过优化设计，以确保高效的干扰效果和较低的脱靶效应。顺铂，作为卵巢癌化疗的常用药物，用于处理细胞，检测细胞对其敏感性的变化，购自知名医药公司，纯度和质量符合实验要求。DMEM培养基，为细胞提供生长所需的营养物质，含有多种氨基酸、维生素、矿物质等成分，购自专业细胞培养试剂供应商。胎牛血清，富含多种生长因子和营养成分，能够促进细胞的生长和增殖，与DMEM培养基按一定比例混合使用，来源可靠，经过严格的质量检测。胰蛋白酶，用于消化细胞，使细胞从培养瓶壁上脱离，便于进行传代培养和实验操作，为细胞培养级别的试剂。RNA提取试剂盒，用于从细胞中提取总RNA，采用先进的提取技术，能够高效、快速地提取高质量的RNA，购自专业生物技术公司。反转录试剂盒，将提取的RNA反转录为cDNA，以便后续进行实时荧光定量PCR检测，具有高反转录效率和准确性。实时荧光定量PCR试剂盒，用于检测基因的表达水平，采用荧光染料法或探针法，能够精确地定量目标基因的表达量。MTT试剂，用于检测细胞的增殖活性，其原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将MTT还原为不溶性的蓝紫色结晶甲臜，甲臜的生成量与活细胞数量成正比。DMSO，用于溶解MTT还原产物甲臜，以便在酶标仪上进行吸光度检测。主要仪器包括：PCR仪，用于进行聚合酶链式反应，扩增目标基因，具有精确的温度控制和快速的升降温速率，能够保证PCR反应的高效性和准确性。实时荧光定量PCR仪，用于实时监测PCR反应过程中荧光信号的变化，从而定量分析基因的表达水平，具有高灵敏度和准确性。酶标仪，用于检测MTT实验中细胞培养板各孔的吸光度值，以此评估细胞的增殖活性，具有高精度的光学检测系统和稳定的性能。离心机，用于离心细胞和分离核酸等生物分子，能够提供不同的离心力和转速，满足实验的各种需求。超净工作台，为细胞培养和实验操作提供无菌环境，采用高效空气过滤器，能够有效过滤空气中的微生物和杂质。二氧化碳培养箱，为细胞培养提供适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度，模拟细胞在体内的生长环境，保证细胞的正常生长和增殖。显微镜，用于观察细胞的形态和生长状态，配备高分辨率的镜头和成像系统，能够清晰地观察细胞的细节。三、实验设计与方法3.2实验方法与步骤3.2.1细胞培养与处理上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*及其亲本的上皮性卵巢癌顺铂敏感细胞OV2008均培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO₂的二氧化碳培养箱中培养。细胞生长至对数期时进行传代，传代时，先用PBS冲洗细胞2次，然后加入适量0.25%胰蛋白酶进行消化，待细胞变圆并脱离瓶壁后，加入含10%胎牛血清的DMEM培养基终止消化，轻轻吹打细胞，使其形成单细胞悬液，按1:3的比例接种于新的培养瓶中继续培养。对于细胞的处理，将处于对数生长期的C13*和OV2008细胞分别接种于6孔板中，每孔接种密度为5×10⁵个细胞，培养24小时，待细胞贴壁后，进行分组处理。实验组加入终浓度为50μmol/L的顺铂溶液，对照组加入等体积的PBS溶液，继续培养48小时。在药物处理过程中，密切观察细胞的形态变化和生长状态，如细胞的贴壁情况、形态改变、增殖速度等。药物处理结束后，收集细胞，用于后续实验。对于需要转染的细胞，在转染前24小时，将细胞接种于6孔板中，每孔接种密度为3×10⁵个细胞，使细胞在转染时达到50%-70%的融合度。转染时，按照脂质体转染试剂的说明书进行操作，将构建好的含PARP1-siRNA慢病毒载体与脂质体混合，室温孵育20分钟，然后将混合液加入到细胞培养孔中，轻轻混匀，继续培养。转染6小时后，更换为新鲜的含10%胎牛血清的DMEM培养基，继续培养至所需时间。3.2.2RNA干扰实验构建含PARP1-siRNA慢病毒载体时，首先根据GenBank中PARP-1基因的序列，设计针对PARP-1基因的小干扰RNA（siRNA）序列，同时设计阴性对照siRNA序列。将设计好的siRNA序列和阴性对照siRNA序列分别克隆到慢病毒表达载体中，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆菌落进行培养，提取质粒进行测序鉴定，确保插入的siRNA序列正确无误。将测序正确的含PARP1-siRNA慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体分别与包装质粒共转染293T细胞，进行慢病毒的包装和扩增。收集培养上清液，通过超速离心法浓缩慢病毒，测定慢病毒滴度。转染卵巢癌细胞时，将处于对数生长期的上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*接种于6孔板中，每孔接种密度为3×10⁵个细胞，培养24小时，待细胞贴壁后，进行转染。按照感染复数（MOI）为50的比例，将含PARP1-siRNA慢病毒载体或阴性对照慢病毒载体加入到细胞培养孔中，同时加入终浓度为8μg/mL的聚凝胺，轻轻混匀，继续培养。转染6小时后，更换为新鲜的含10%胎牛血清的DMEM培养基，继续培养48小时。转染结束后，收集细胞，通过实时荧光定量PCR和Western印迹法检测PARP-1基因和蛋白的表达水平，验证干扰效果。同时，设置未转染细胞组作为空白对照，用于对比分析。3.2.3检测指标与方法采用MTT法检测细胞增殖。将经过不同处理的卵巢癌细胞（C13*和OV2008）以每孔5×10³个细胞的密度接种于96孔板中，每组设置5个复孔，培养24小时后，加入不同浓度的顺铂（0、1、5、10、20、40μmol/L），继续培养48小时。培养结束前4小时，每孔加入20μLMTT溶液（5mg/mL），继续孵育。孵育结束后，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150μLDMSO，振荡10分钟，使结晶物充分溶解。选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔的光吸收值（OD值），记录结果。以顺铂浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，计算顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50），以此评估细胞对顺铂的敏感性。细胞存活率=（实验组OD值/对照组OD值）×100%。采用实时荧光定量PCR检测基因表达。使用RNA提取试剂盒从细胞中提取总RNA，按照试剂盒说明书操作。提取的RNA经紫外分光光度计测定浓度和纯度，确保RNA质量符合要求。取1μg总RNA，使用反转录试剂盒将其反转录为cDNA。以cDNA为模板，使用实时荧光定量PCR试剂盒进行扩增，反应体系为20μL，包括10μLSYBRGreenMasterMix、上下游引物各0.5μL、cDNA模板1μL，其余用ddH₂O补足。反应条件为：95℃预变性30秒，然后95℃变性5秒、60℃退火30秒，共40个循环。以β-actin作为内参基因，采用2^-ΔΔCt法计算目的基因PARP-1的相对表达量。采用Western印迹法检测蛋白表达。收集细胞，加入适量RIPA裂解液，冰上裂解30分钟，然后12000rpm离心15分钟，取上清液作为蛋白样品。采用BCA法测定蛋白浓度，将蛋白样品与上样缓冲液混合，煮沸5分钟使蛋白变性。取30μg蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后将蛋白转移至PVDF膜上。将PVDF膜用5%脱脂牛奶封闭1小时，然后加入一抗（抗PARP-1抗体和抗β-actin抗体），4℃孵育过夜。次日，用TBST洗涤PVDF膜3次，每次10分钟，然后加入二抗，室温孵育1小时。再次用TBST洗涤PVDF膜3次，每次10分钟，最后用化学发光底物显色，在凝胶成像系统下曝光成像。使用ImageJ软件分析条带灰度值，以β-actin为内参，计算PARP-1蛋白的相对表达量。四、实验结果分析4.1PARP-1基因在卵巢癌细胞中的表达差异采用实时荧光定量PCR和Western印迹法，对顺铂耐药细胞C13和亲本细胞OV2008中PARP-1基因mRNA及蛋白表达进行检测，结果显示，C13细胞中PARP-1mRNA的表达量显著高于OV2008细胞，以OV2008细胞中PARP-1mRNA表达量为参照，C13细胞中PARP-1mRNA的表达量是其（2.12±0.97）倍。在蛋白表达水平上，C13细胞中PARP-1蛋白的表达量同样明显高于OV2008细胞，C13细胞中PARP-1蛋白的表达量为OV2008细胞的（1.89±0.23）倍。这表明PARP-1基因在顺铂耐药的C13细胞中呈现高表达状态，而在顺铂敏感的OV2008细胞中表达相对较低。为进一步探究不同浓度顺铂作用对PARP-1基因表达的影响，将C13和OV2008细胞分别用不同浓度（0、1、5、10、20μmol/L）的顺铂处理24小时后，检测PARP-1基因的表达变化。结果发现，随着顺铂浓度的增加，OV2008细胞中PARP-1mRNA和蛋白的表达量逐渐下降。当顺铂浓度为10μmol/L时，OV2008细胞中PARP-1蛋白含量明显下调（P＜0.05）。而在C13细胞中，不同浓度顺铂作用24小时后，PARP-1mRNA和蛋白的表达量均无明显变化（P＞0.05）。这说明顺铂能够抑制OV2008细胞中PARP-1基因的表达，而对C13细胞中PARP-1基因的表达无显著影响。这种表达差异可能与卵巢癌细胞对顺铂的耐药性密切相关，高表达的PARP-1可能赋予了C13细胞更强的DNA修复能力，使其能够抵抗顺铂诱导的DNA损伤，从而产生耐药性。4.2RNA干扰对PARP-1基因表达的抑制效果将构建的含PARP1-siRNA慢病毒载体转染上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*，48小时后，采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测PARP-1基因mRNA及蛋白的表达水平。结果显示，与未转染组和转染阴性对照慢病毒载体组相比，转染PARP1-siRNA慢病毒载体组中PARP-1基因mRNA的表达量显著下降。以未转染组PARP-1基因mRNA表达量为参照，转染PARP1-siRNA慢病毒载体组中PARP-1基因mRNA的表达量下降了（71.23±5.41）%。在蛋白表达水平上，转染PARP1-siRNA慢病毒载体组中PARP-1蛋白的表达量同样明显降低，与未转染组和转染阴性对照慢病毒载体组相比，下降了（73.84±3.78）%。这表明PARP1-siRNA能够有效地抑制C13*细胞中PARP-1基因的表达，在转录和翻译水平均取得了显著的干扰效果。通过RNA干扰技术成功下调PARP-1基因的表达，为进一步研究其对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响奠定了坚实基础。4.3RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响通过MTT法检测转染后细胞在顺铂作用下生存率的改变及对顺铂敏感性的变化，结果显示，转染PARP1-siRNA慢病毒载体的C13细胞在不同浓度顺铂作用下的生存率显著低于未转染组和转染阴性对照慢病毒载体组。当顺铂浓度为10μmol/L时，未转染组和转染阴性对照慢病毒载体组C13细胞的生存率分别为（68.32±4.56）%和（65.89±3.78）%，而转染PARP1-siRNA慢病毒载体组C13细胞的生存率仅为（32.56±2.13）%。以顺铂浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，计算得到转染PARP1-siRNA慢病毒载体组C13细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（8.56±1.02）μmol/L，与未转染组的（81.34±8.97）μmol/L和转染阴性对照慢病毒载体组的（79.56±7.89）μmol/L相比，显著降低，下降了（89.77±10.06）%。这表明RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，卵巢癌顺铂耐药细胞C13对顺铂的敏感性显著增强，顺铂对细胞的增殖抑制作用明显提高。在相同顺铂浓度下，转染PARP1-siRNA慢病毒载体的C13细胞生长受到明显抑制，细胞增殖速度减缓，呈现出明显的剂量-效应关系，即随着顺铂浓度的增加，细胞生存率逐渐降低。4.4RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞耐药性的影响通过MTT法检测转染后细胞对顺铂的敏感性变化，结果显示，转染PARP1-siRNA慢病毒载体的C13细胞对顺铂的敏感性显著增强。在相同顺铂浓度下，转染组细胞的生存率明显低于未转染组和转染阴性对照慢病毒载体组。以顺铂浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，计算得到转染PARP1-siRNA慢病毒载体组C13细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（8.56±1.02）μmol/L，与未转染组的（81.34±8.97）μmol/L和转染阴性对照慢病毒载体组的（79.56±7.89）μmol/L相比，显著降低，下降了（89.77±10.06）%。这表明RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，卵巢癌顺铂耐药细胞C13*对顺铂的耐药性明显降低，细胞对顺铂的杀伤作用更加敏感。这种耐药性的降低可能与PARP-1基因表达下调后，细胞内DNA修复能力下降有关，使得顺铂能够更有效地诱导肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的生长。五、结果讨论5.1RNA干扰抑制PARP-1基因表达影响卵巢癌细胞增殖的机制探讨本研究结果显示，RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，卵巢癌顺铂耐药细胞C13*对顺铂的敏感性显著增强，顺铂对细胞的增殖抑制作用明显提高。这一现象背后蕴含着复杂的分子机制，与PARP-1在细胞内的多种生物学功能密切相关。从DNA修复角度来看，PARP-1在维持基因组完整性方面发挥着关键作用，其主要参与碱基切除修复（BER）通路。当DNA发生单链断裂时，PARP-1能迅速识别并结合到断裂处，催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）分解为烟酰胺和ADP-核糖，ADP-核糖聚合形成长链并结合到PARP-1自身以及其他参与DNA修复的蛋白质上，通过聚ADP核糖基化修饰，招募并激活一系列参与BER通路的蛋白，如XRCC1、DNA聚合酶-ε、DNA连接酶III等，协同完成DNA的修复过程。在卵巢癌顺铂耐药细胞C13中，高表达的PARP-1使得细胞具备较强的DNA修复能力。顺铂作为一种化疗药物，其作用机制主要是与DNA结合，形成铂-DNA加合物，导致DNA损伤，进而诱导肿瘤细胞凋亡。然而，由于C13细胞中PARP-1高表达，当顺铂引起DNA单链断裂时，PARP-1能够快速启动BER通路，对受损DNA进行有效修复，使得肿瘤细胞能够抵抗顺铂的杀伤作用，继续存活和增殖，从而表现出对顺铂的耐药性。当通过RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，PARP-1蛋白水平显著下降，其参与的DNA修复功能受到抑制。在顺铂作用下，DNA损伤无法得到及时有效的修复，大量的DNA损伤积累，超过了细胞自身的修复能力，从而导致细胞凋亡增加，对顺铂的敏感性增强，顺铂对细胞的增殖抑制作用得以提高。在细胞周期调控方面，PARP-1也参与其中，对细胞的增殖和分裂产生影响。细胞周期的正常进行受到多种因素的严格调控，包括细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）以及相关的信号通路等。研究表明，PARP-1可以通过与一些细胞周期调控蛋白相互作用，影响细胞周期的进程。在卵巢癌顺铂耐药细胞C13中，PARP-1的高表达可能会干扰细胞周期的正常调控。具体来说，PARP-1可能会促进细胞从G1期向S期的过渡，加速细胞的增殖。这可能是因为PARP-1通过调节相关细胞周期蛋白和CDK的表达或活性，使得细胞周期进程加快，肿瘤细胞能够快速增殖。当RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，细胞周期调控失衡，细胞增殖受到抑制。一方面，细胞从G1期向S期的过渡受阻，导致细胞在G1期停滞，进入S期进行DNA合成的细胞数量减少，从而抑制了细胞的增殖。另一方面，由于PARP-1表达下调，其对细胞周期调控蛋白和信号通路的异常调节作用减弱，使得细胞周期恢复到相对正常的状态，肿瘤细胞的增殖速度减缓。这种细胞周期的改变，使得卵巢癌顺铂耐药细胞C13对顺铂的敏感性增强，顺铂能够更有效地抑制细胞的增殖。5.2RNA干扰抑制PARP-1基因表达影响卵巢癌细胞耐药性的机制分析卵巢癌耐药性是临床治疗中面临的一大难题，严重影响患者的预后。本研究通过RNA干扰技术抑制PARP-1基因表达，显著降低了卵巢癌顺铂耐药细胞C13*对顺铂的耐药性，这一现象背后涉及多种复杂的分子机制。PARP-1在DNA损伤修复通路中起着核心作用，其主要参与碱基切除修复（BER）途径。在卵巢癌顺铂耐药细胞C13中，高表达的PARP-1使得细胞具备强大的DNA修复能力。顺铂作为一种常用的化疗药物，其主要作用机制是与DNA结合，形成铂-DNA加合物，导致DNA损伤，进而诱导肿瘤细胞凋亡。然而，当顺铂引起DNA单链断裂时，C13细胞中的PARP-1能够迅速识别并结合到断裂处，通过催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）分解为烟酰胺和ADP-核糖，使ADP-核糖聚合形成长链并结合到PARP-1自身以及其他参与DNA修复的蛋白质上，通过聚ADP核糖基化修饰，招募并激活一系列参与BER通路的蛋白，如XRCC1、DNA聚合酶-ε、DNA连接酶III等，协同完成DNA的修复过程，从而使肿瘤细胞能够抵抗顺铂的杀伤作用，表现出对顺铂的耐药性。当通过RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，PARP-1蛋白水平显著下降，其参与的DNA修复功能受到抑制。在顺铂作用下，DNA损伤无法得到及时有效的修复，大量的DNA损伤积累，超过了细胞自身的修复能力，从而导致细胞凋亡增加，对顺铂的耐药性降低。PARP-1还与其他DNA修复途径存在密切关联，进一步影响卵巢癌细胞的耐药性。在同源重组修复（HRR）途径中，PARP-1虽然不是直接参与HRR过程的关键蛋白，但它可以通过与HRR相关蛋白相互作用，影响HRR的效率。研究表明，PARP-1能够与BRCA1、BRCA2等HRR关键蛋白相互作用，调节它们在DNA损伤修复中的功能。在卵巢癌耐药细胞中，PARP-1可能通过促进HRR途径的活化，增强细胞对DNA双链断裂的修复能力，从而提高细胞对化疗药物的耐药性。当PARP-1基因表达被抑制后，PARP-1与HRR相关蛋白的相互作用受到干扰，HRR途径的效率降低，使得细胞在化疗药物作用下的DNA损伤难以得到有效修复，从而增加了细胞对化疗药物的敏感性，降低了耐药性。除了DNA修复途径，PARP-1还可能通过影响细胞凋亡信号通路来调节卵巢癌细胞的耐药性。细胞凋亡是一种程序性细胞死亡方式，在肿瘤的发生发展和治疗过程中起着重要作用。PARP-1可以通过多种方式影响细胞凋亡信号通路。一方面，PARP-1的过度激活会导致NAD+大量消耗，使细胞能量代谢失衡，从而激活细胞凋亡信号通路。然而，在卵巢癌耐药细胞中，PARP-1可能通过与凋亡相关蛋白相互作用，抑制细胞凋亡的发生。例如，PARP-1可以与Bcl-2家族蛋白相互作用，调节线粒体膜电位，抑制细胞色素C的释放，从而抑制凋亡小体的形成和caspase级联反应的激活，使肿瘤细胞能够逃避凋亡。当RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，PARP-1对细胞凋亡信号通路的抑制作用减弱，细胞更容易受到化疗药物诱导的凋亡信号的影响，从而促进细胞凋亡，降低耐药性。另一方面，PARP-1还可能通过调节p53等凋亡相关转录因子的活性，影响细胞凋亡相关基因的表达，进而调节细胞凋亡和耐药性。5.3研究结果与现有文献的对比与分析本研究通过RNA干扰抑制PARP-1基因表达，对卵巢癌细胞增殖及耐药性产生了显著影响，将本研究结果与其他相关研究进行对比分析，有助于进一步深入理解PARP-1在卵巢癌中的作用机制。在PARP-1基因在卵巢癌细胞中的表达方面，本研究发现顺铂耐药细胞C13*中PARP-1基因mRNA及蛋白表达显著高于顺铂敏感细胞OV2008，这与众多现有研究结果一致。有研究检测了卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP和敏感细胞株SKOV3中PARP-1的表达，结果显示SKOV3/DDP细胞中PARP-1的表达明显高于SKOV3细胞。另一项研究对不同卵巢癌细胞系进行分析，同样发现耐药细胞中PARP-1的表达水平显著高于敏感细胞。这些研究均表明，PARP-1在卵巢癌耐药细胞中高表达，其高表达可能与卵巢癌耐药性的产生密切相关。在RNA干扰对PARP-1基因表达的抑制效果方面，本研究成功构建含PARP1-siRNA的慢病毒载体并转染上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*，显著降低了PARP-1基因mRNA及蛋白表达水平。这与相关研究中利用RNA干扰技术抑制PARP-1基因表达的结果相符。有研究设计并合成针对PARP-1基因的siRNA，转染卵巢癌细胞，结果显示PARP-1基因和蛋白表达水平明显下降。这些研究共同表明，RNA干扰技术能够有效地抑制卵巢癌细胞中PARP-1基因的表达，为进一步研究PARP-1基因功能及卵巢癌治疗提供了有力的技术手段。在RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响方面，本研究结果显示，抑制PARP-1基因表达后，卵巢癌顺铂耐药细胞C13*对顺铂的敏感性显著增强，细胞增殖受到明显抑制。现有文献中也有类似报道，有研究通过抑制PARP-1基因表达，发现卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性增强，细胞增殖受到抑制。还有研究表明，抑制PARP-1基因表达可逆转卵巢癌耐药细胞对顺铂的耐药性，使细胞对顺铂的杀伤作用更加敏感。这些研究结果的一致性进一步证实了抑制PARP-1基因表达在增强卵巢癌细胞对化疗药物敏感性、抑制细胞增殖方面的重要作用。然而，不同研究之间也存在一些差异。在研究方法上，本研究采用慢病毒载体转染的方式进行RNA干扰，相比一些研究中使用的脂质体转染等方法，具有更高的转染效率和稳定性。在细胞模型的选择上，不同研究使用的卵巢癌细胞系有所不同，这可能导致实验结果在具体数值上存在一定差异。此外，不同研究中干扰的PARP-1基因位点、干扰时间等因素也可能对实验结果产生影响。通过与现有文献的对比分析，本研究结果进一步验证了PARP-1基因在卵巢癌耐药中的重要作用，以及RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响，同时也为卵巢癌的治疗研究提供了更多的参考依据和研究思路。未来的研究可以在本研究的基础上，进一步优化实验方法，深入探讨PARP-1基因在卵巢癌中的作用机制，为卵巢癌的临床治疗提供更有效的策略。5.4研究的局限性与展望本研究在探究RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响方面取得了一定成果，但也存在一些局限性。在实验设计方面，本研究仅选用了上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*及其亲本的上皮性卵巢癌顺铂敏感细胞OV2008这两种细胞系进行研究，细胞模型相对单一。卵巢癌具有高度的异质性，不同细胞系的生物学特性和基因表达谱存在差异，单一的细胞系研究可能无法全面反映PARP-1基因在卵巢癌中的作用机制。未来的研究可以纳入更多不同组织学类型、不同分子亚型的卵巢癌细胞系，以及患者来源的原代肿瘤细胞，进行多维度的研究，以更全面地揭示PARP-1基因与卵巢癌增殖及耐药性的关系。此外，本研究主要集中在体外细胞实验，缺乏体内动物实验的验证。细胞实验虽然能够在一定程度上模拟细胞的生物学行为，但与体内环境存在差异。动物实验可以更真实地反映肿瘤在体内的生长、转移以及对治疗的反应。未来应开展体内动物实验，构建卵巢癌动物模型，进一步验证RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响，为临床应用提供更有力的实验依据。在样本数量方面，本研究中各实验组的样本数量相对较少，这可能会影响实验结果的可靠性和统计学效力。在后续研究中，可以增加样本数量，进行多中心、大样本的研究，以提高实验结果的准确性和普遍性。同时，对实验结果进行更深入的统计学分析，采用更复杂的统计模型，控制潜在的混杂因素，进一步明确RNA干扰抑制PARP-1基因表达与卵巢癌细胞增殖及耐药性之间的关系。展望未来，随着对PARP-1基因研究的不断深入，有望开发出更加高效、特异性的PARP-1抑制剂，为卵巢癌的治疗提供新的选择。结合基因检测技术，实现卵巢癌的精准治疗，根据患者的基因特征和肿瘤的分子分型，选择合适的治疗方案，提高治疗效果，减少不良反应。此外，将RNA干扰技术与其他治疗方法，如化疗、免疫治疗、靶向治疗等联合应用，可能会产生协同效应，进一步提高卵巢癌的治疗效果。未来的研究可以深入探讨这些联合治疗方案的作用机制和最佳组合方式，为卵巢癌的临床治疗提供更多的策略和思路。还可以进一步研究PARP-1基因与其他基因或信号通路之间的相互作用，揭示卵巢癌发生、发展及耐药的复杂分子网络，为开发新的治疗靶点和药物提供理论基础。六、结论与建议6.1研究主要结论总结本研究通过一系列实验，深入探究了RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响，得出以下主要结论：在PARP-1基因在卵巢癌细胞中的表达差异方面，研究发现顺铂耐药细胞C13中PARP-1基因mRNA及蛋白表达显著高于顺铂敏感细胞OV2008。以OV2008细胞中PARP-1mRNA表达量为参照，C13细胞中PARP-1mRNA的表达量是其（2.12±0.97）倍；在蛋白表达水平上，C13细胞中PARP-1蛋白的表达量为OV2008细胞的（1.89±0.23）倍。不同浓度顺铂作用对PARP-1基因表达的影响实验表明，顺铂能够抑制OV2008细胞中PARP-1基因的表达，当顺铂浓度为10μmol/L时，OV2008细胞中PARP-1蛋白含量明显下调（P＜0.05），而对C13细胞中PARP-1基因的表达无显著影响（P＞0.05）。这表明PARP-1基因的高表达可能与卵巢癌细胞对顺铂的耐药性密切相关。在RNA干扰对PARP-1基因表达的抑制效果上，成功构建的含PARP1-siRNA慢病毒载体转染上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13*后，在转录和翻译水平均取得了显著的干扰效果。与未转染组和转染阴性对照慢病毒载体组相比，转染PARP1-siRNA慢病毒载体组中PARP-1基因mRNA的表达量下降了（71.23±5.41）%，PARP-1蛋白的表达量下降了（73.84±3.78）%。这为进一步研究PARP-1基因表达下调对卵巢癌细胞的影响奠定了基础。关于RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响，MTT法检测结果显示，转染PARP1-siRNA慢病毒载体的C13细胞在不同浓度顺铂作用下的生存率显著低于未转染组和转染阴性对照慢病毒载体组。计算得到转染PARP1-siRNA慢病毒载体组C13细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（8.56±1.02）μmol/L，与未转染组的（81.34±8.97）μmol/L和转染阴性对照慢病毒载体组的（79.56±7.89）μmol/L相比，显著降低，下降了（89.77±10.06）%。这表明RNA干扰抑制PARP-1基因表达后，卵巢癌顺铂耐药细胞C13*对顺铂的敏感性显著增强，顺铂对细胞的增殖抑制作用明显提高。在RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞耐药性的影响方面，同样通过MTT法检测发现，转染PARP1-siRNA慢病毒载体的C13细胞对顺铂的敏感性显著增强，耐药性明显降低。转染组细胞在相同顺铂浓度下的生存率明显低于