实时荧光pcr技术试题及答案

实时荧光pcr技术试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）1.实时荧光PCR技术中，荧光信号主要来自（）A.模板DNAB.引物C.荧光探针D.缓冲液2.实时荧光PCR反应的基本步骤不包括（）A.变性B.退火C.延伸D.转录3.用于实时荧光PCR定量分析的方法是（）A.终点法B.荧光强度法C.Ct值法D.吸光度法4.实时荧光PCR技术中，常用的荧光基团是（）A.溴酚蓝B.荧光素C.二甲苯青D.考马斯亮蓝5.以下哪种物质不是实时荧光PCR反应体系的成分（）A.dNTPB.Taq酶C.限制性内切酶D.引物6.实时荧光PCR检测的是（）A.反应开始时模板量B.反应结束时产物量C.反应过程中荧光信号变化D.引物结合情况7.实时荧光PCR技术可用于（）A.基因克隆B.蛋白质测序C.病毒核酸定量D.细胞培养8.一般实时荧光PCR反应的退火温度范围是（）A.30-40℃B.50-65℃C.70-80℃D.85-95℃9.实时荧光PCR实验中，阴性对照的作用是（）A.检测试剂是否污染B.确定最佳反应条件C.比较不同样本差异D.优化引物设计10.荧光阈值一般设定在（）A.基线期B.指数增长期C.平台期D.任何时期二、多项选择题（每题2分，共10题）1.实时荧光PCR技术的优点有（）A.灵敏度高B.特异性强C.可定量分析D.操作简单2.实时荧光PCR反应体系包含（）A.模板DNAB.引物C.荧光探针D.缓冲液3.荧光定量PCR常用的探针类型有（）A.TaqMan探针B.SYBRGreenIC.分子信标D.引物二聚体4.影响实时荧光PCR结果准确性的因素有（）A.模板质量B.引物设计C.反应条件D.仪器性能5.实时荧光PCR可应用于（）A.疾病诊断B.药物研发C.基因表达分析D.亲子鉴定6.实时荧光PCR技术中的荧光信号来源可能是（）A.结合双链DNA的荧光染料B.标记在探针上的荧光基团C.引物自身发出的荧光D.反应缓冲液的荧光7.关于Ct值，以下说法正确的是（）A.与起始模板量成反比B.是荧光信号达到设定阈值时的循环数C.可以用于定量分析D.不同仪器测得的Ct值不同8.实时荧光PCR实验中，阳性对照的作用是（）A.验证实验体系有效性B.检测仪器是否正常C.比较不同样本结果D.优化引物浓度9.在实时荧光PCR反应中，可能出现的问题有（）A.引物二聚体形成B.非特异性扩增C.荧光信号弱D.反应时间过长10.实时荧光PCR技术与传统PCR技术相比，其特点在于（）A.能够实时监测反应进程B.可进行定量分析C.无需进行电泳检测D.对实验环境要求低三、判断题（每题2分，共10题）1.实时荧光PCR技术只能用于DNA检测，不能检测RNA。（）2.荧光阈值设定越高，Ct值越小。（）3.实时荧光PCR反应体系中引物浓度越高越好。（）4.只要实验操作规范，实时荧光PCR结果就一定准确可靠。（）5.SYBRGreenI可以特异性结合双链DNA和单链DNA。（）6.实时荧光PCR可用于检测基因的突变情况。（）7.Ct值相同的样本，其起始模板量一定相同。（）8.实时荧光PCR实验中，实验结果出现假阳性可能是由于模板污染。（）9.实时荧光PCR技术不需要引物就可以进行反应。（）10.不同厂家生产的实时荧光PCR仪器，其工作原理完全不同。（）四、简答题（每题5分，共4题）1.简述实时荧光PCR技术定量的基本原理。答：基于Ct值与起始模板量的对数成反比关系。在荧光信号指数增长期，荧光信号达到设定阈值时的循环数Ct可反映起始模板量，通过已知浓度标准品建立标准曲线，进而对未知样本定量。2.实时荧光PCR反应体系中各成分的作用是什么？答：模板DNA是扩增的对象；引物引导DNA合成；荧光探针（或荧光染料）用于产生荧光信号；dNTP提供合成原料；Taq酶催化DNA合成；缓冲液维持反应的适宜环境。3.列举两种实时荧光PCR常用的荧光标记方法并简要说明。答：①TaqMan探针法：探针两端分别标记荧光报告基团和淬灭基团，PCR延伸时Taq酶将探针降解，使荧光信号释放。②SYBRGreenI法：该染料能特异性结合双链DNA，随着双链DNA合成，荧光信号增强。4.实时荧光PCR实验中，如何避免非特异性扩增？答：优化引物设计，提高特异性；合理调整反应条件，如退火温度、时间等；确保模板纯度，避免杂质干扰；设置合适的阴性对照，监控反应体系是否存在污染。五、讨论题（每题5分，共4题）1.实时荧光PCR技术在疾病诊断领域有哪些应用及优势？答：应用于病原体检测，如新冠病毒核酸检测；基因异常检测用于肿瘤诊断等。优势在于灵敏度高，能早期发现病原体；特异性强，结果准确；可定量，利于病情监测和治疗评估，且检测快速，能及时诊断。2.在进行实时荧光PCR实验时，若出现荧光信号异常，可能有哪些原因及解决方法？答：原因可能是模板质量差、引物或探针设计不合理、反应条件不当、仪器故障、试剂污染等。解决方法：重新制备高质量模板，优化引物探针设计，调整反应条件，检查仪器，更换无污染试剂，必要时重新实验。3.讨论实时荧光PCR技术在基因表达分析中的作用及应用实例。答：作用是精确测量基因转录水平，分析基因表达差异。实例：研究肿瘤细胞与正常细胞中某些基因表达差异，探索肿瘤发生机制；分析植物在不同环境胁迫下相关基因表达变化，了解植物应激反应机制。4.随着技术发展，实时荧光PCR技术面临哪些挑战和机遇？答：挑战：对实验人员技术要求高，易出现实验误差；成本较高；存在交叉污染风险。机遇：不断改进优化，提高灵敏度和特异性；在更多领域如精准医疗、食品安全检测等有广阔应用前景，与其他技术联用可拓展功能。答案一、单项选择题1.C2.D3.C4.B5.C6.C7.C8.B9.A10.B二、多项选