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文档简介

一、标准研制的必要性

苦苣苔科(Gesneriaceae)在全世界约有160属3800余种,主要分布在亚洲东部和南部、

非洲、欧洲南部、大洋洲、南美洲至墨西哥等热带至温带地区。我国是苦苣苔科植物主要分

布中心之一,截止2021年08月29日,我国自然分布的苦苣苔科植物已记载有2族14亚族

45属796种(含种下等级),其中特有属10个,单型属11个。我国苦苣苔科植物的分布和

特有中心是滇黔桂及其相邻地。广西西靠云贵高原,南部濒临海洋,地势西北高、东南低,

境内群山环绕,岩溶地形广泛发育,有着典型而复杂多变的喀斯特地貌。全区地跨热带和亚

热带,属亚热带季风性气候。独特的喀斯特地貌环境和气候条件为苦苣苔科植物的生长提供

了多样的生境。截止到2020年11月,广西拥有的苦苣苔科植物属数为33属,占全国总属

数的73.33%,仅次于云南(75.56%),高于贵州(62.22%),排全国第二;拥有的种的数量

达320种,占全国总种数的40.71%,高于云南(35.88%)和贵州(19.47%),位居全国第一。

报春苣苔属(Primulina)是苦苣苔亚科植物中物种多样性极其丰富的属,适生能力强,

在花色、花型、花量、株型、叶色、叶纹等方面具有极高观赏价值,是极具发掘潜力的

花卉资源,产业前景广阔。其对荫蔽环境的适应性很高,大部分种类喜阴湿环境,这种独

特的生长习性使其非常适宜作室内观赏花卉,对于庭园活动空间日渐缩小,诸多喜阳植物在

人们家庭中较难生存而言,种养报春苣苔是一个十分不错的选择。长久以来,市场上流行

的报春苣台属盆栽绝大部分源自原始挖掘,对环境和资源破坏很大。因此,开展人工繁

育技术研究,建立完善成熟的繁育技术,形成标准化、规范化的种苗生产技术,对缓解

市场需求、保护环境和资源具有重要意义。报春苣苔属植物可用种子播种和叶片扦插繁殖

等方式。但种子繁殖常受种源及发芽率的影响,而扦插繁殖则存在速度慢(产生新子株的时

间长,一般需要3个月以上),繁殖系数小,成苗质量不整齐的缺点,很难满足商品化的生

产的缺点。而组培快繁具有周期短、繁殖系数大,易成规模,繁殖后代品质优良的优点,是

人工繁殖的有效途径之一。形成报春苣苔组培快繁技术规程,有利于其种苗规模化生产,对

其产业的发展具有重要促进作用。

目前国家暂无该属植物的相关标准,我区亦无该属植物的标准颁布。国家标准中,仅有

《主要花卉产品等级第2部分:盆花》涉及了苦苣苔科大岩桐属植物的盆花质量等级划分。

在广西地方标准上,已有《重瓣大岩桐组培快繁技术规程》(DB45/T1587-2017)、《重瓣大

岩桐盆花生产技术规程》(DB45/T1586-2017)两套标准颁布实施。大岩桐和报春苣苔属植

物为同科不同属的物种,原产地也不同,栽培方式、繁殖方法也有差异。本标准的拟定、颁

布填补了这一空白。

二、任务来源和承担单位

根据桂市监函〔2021〕2199号文件《广西壮族自治区市场监督管理局关于下达2021年

第二批广西地方标准制修订项目计划的通知》,《报春苣苔组培快繁技术规程》列入2021年

广西地方标准制定计划中,序号为2021-2095,是由广西壮族自治区农业农村厅提出,起草

单位为广西壮族自治区农业科学院花卉研究所。

三、编写标准的原则和技术依据

(一)原则

1.以科学、准确、权威为指导思想,坚持可靠性、准确性和实用性原则。

标准起草过程中,查询了大量的国内技术资料,凝练了编制者多年的试验,并参考了我

国近十多年来的科学实验结果。结合苦苣苔产业当前和长远发展需要,考虑我区现有基础,

兼顾将来发展,提出的技术既有科学性、先进性,又有实用性,可操作行强。

2.坚持先进性、规范性原则

本标准属首次编制,采取了严肃认真态度注意反复推敲和斟酌,通过广泛征求意见,合

理采纳同行专家的宝贵意见,采纳国内标准中的合理、适宜的内容,保证内容和条款的先进

性和规范性。编写过程中,严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化

文件的结构和起草规则》,结合调研和试验研究的结果,组织标准的起草工作。

3.坚持尽量收集报春苣苔相关组织培养技术,使本标准的技术方法具有更好的可操作

性,可以作为政府部门监督、指导生产的依据,在生产上切实可行。

(二)技术依据

本标准按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规

则》的规定起草,参考《NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程》等相关标准,应用前

期研究成果、参考国内文献资料,确定本标准的指标设置和各项指标要求。

四、主要工作过程

标准制定项目计划下达后,标准起草单位组织主要编写人员对《报春苣苔组培快繁技术

规程》的总体技术要求进行了讨论,研究制定了标准工作方案、技术路线、主要研究方法,

标准的具体格式,确定了标准的总体框架和制定原则,明确了标准制定的具体工作计划和进

展。主要工作过程如下:

1.前期研究

2017年开始对报春苣苔属进行组培快繁研究,以叶片获种子为外植体,开展附加了不

同植物生长调节剂的培养基对不定芽诱导、增殖培养、壮苗培养、生根培养的对比实验,筛

选出各培养阶段的适宜培养基,建立其离体快繁体系。结果表明:不同种类的报春苣苔在各

培养阶段的最佳培养基有所不同,可具体参考以下文章或专利技术:《永福报春苣苔离体快

繁体系的建立》、《贵港报春苣苔的叶片组培与植株再生》、《黄花牛耳朵离体叶片不定芽的诱

导及植株再生》、《褐纹报春苣苔组织培养与快速繁殖》、《羽裂报春苣苔的组织培养研究》、

《17种报春苣苔属植物的组培苗移栽季节研究》、《一种微斑报春苣苔的无菌播种和组织培

养方法》。目前为止已开展了60个原生种以及30个园艺种的报春苣苔属组培快繁研究。通

过开展组培实验,积累了丰富的实验经验,收集了大量的实验数据,并形成了成熟完善的组

培技术,发表报春苣苔组培快繁技术相关论文7篇。同时该技术率先在本单位进行了应用,

取得了良好的效果。此外,2017年已完成了2项苦苣苔科植物的广西地方标准的编制并获

颁布实施:《重瓣大岩桐组培快繁技术规程》(DB45/T1587-2017)、《重瓣大岩桐盆花生产

技术规程》(DB45/T1586-2017)。大量的实验经验、实验数据以及两项标准的颁布实施为

报春苣苔组培快繁技术规程的制定奠定了良好的基础。

2.人员组织

标准任务下达后,我们积极组织技术骨干成立标准编制工作小组,工作组成员具有较丰

富的专业知识和实践经验,熟悉业务,了解标准化工作的相关规定并具有较强的文字表达能

力。工作组成立后,制定了工作计划,明确了内部分工及进度要求,责任落实到人,具体人

员分工(见表1)。

表1主要编制人员与责任分工

姓名工作单位职称编制分工

闫海霞广西壮族自治区农业科学院花卉研究所副研究员主笔、规程编制

陶大燕广西壮族自治区农业科学院花卉研究所助理研究员产技术实施,试验研究

关世凯广西壮族自治区农业科学院花卉研究所助理研究员生产技术实施,试验研究

周锦业广西壮族自治区农业科学院花卉研究所高级工程师总体协调,协助主笔

宋倩广西壮族自治区农业科学院花卉研究所高级工程师资料收集整理

罗述名广西壮族自治区农业科学院花卉研究所研究员技术指导、监督

3.文献资料的收集、调研和分析

为了制定好《报春苣苔组培快繁技术规程》,我们首先收集和查阅了报春苣苔属植物的

组织培养等方面的相关材料,其中包括我国在2013年颁布的《NY/T2306-2013花卉种苗

组培快繁技术规程》、2017年广西颁布的《重瓣大岩桐组培快繁技术规程》(DB45/T

1587-2017),广西农业科学院花卉研究所闫海霞发表的《永福报春苣苔离体快繁体系的建

立》、《贵港报春苣苔的叶片组培与植株再生》、《黄花牛耳朵离体叶片不定芽的诱导及植株再

生》、《褐纹报春苣苔组织培养与快速繁殖》、《羽裂报春苣苔的组织培养研究》、《17种报春

苣苔属植物的组培苗移栽季节研究》、《一种微斑报春苣苔的无菌播种和组织培养方法》等国

家、地方标准、论文、发明专利。通过对资料的广泛收集、整理、调研和分析,并组织标准

起草组人员多次讨论分析,广泛收集和听取区内外同行专家学者的意见,最终确定了标准的

制定原则和主体框架。

4.标准的起草

借鉴《NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程》等资料的基础上,以广西农业科

学院花卉研究所多年积累的报春苣苔组培快繁技术作为制定标准的基础,为使标准更具适宜

性、实用性和可操作性,在充分酝酿讨论的基础上,我们为报春苣苔组培快繁技术标准的组

织培养方法、组培苗移栽、质量要求以及包装、标签和运输等确定了相关技术。在确定了技

术标准内容的基础上,我们GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结

构和起草规则》,于2021年12月完成了《报春苣苔组培快繁技术规程(征求意见稿)》标

准文本的起草工作。

五、标准主要指标的确定

1.外植体的消毒和灭菌

取无病虫害、生长健壮植株的幼嫩获成熟叶片,经洗衣粉获洗洁精浸泡10-30min后在

流水下冲洗10-30min,然后转移到超净工作台上进行灭菌操作。先用棉球蘸取75%乙醇溶

液拭擦叶片正面和背面,无菌水冲洗2-5次;再将叶片在75%乙醇溶液中浸泡10~20s,无

菌水冲洗3-5次;最后用0.1%氯化汞溶液浸泡,如仅浸泡1次,则时间为8-10min,浸泡后

用无菌水冲洗3-5次,如果进行两次浸泡,每次浸泡时间为6min,每次浸泡后用无菌水冲

洗3-5次。乙醇溶液和氯化汞溶液浸泡过程中要轻轻震荡使灭菌剂充分接触叶片。在接种盘

内将叶片切成1~3cm×1~3cm大小的叶块,以备用。

表1不同种类报春苣苔的外植体处理方法

种类外植体灭菌前处理75%酒精拭75%酒精浸0.1%升汞浸泡时间切成

擦泡时间(s)(min)

褐纹报幼嫩叶洗衣粉浸洗酒精棉球拭10-12s10min1cm×1

春苣苔片(春10min,流水冲洗擦后用无菌无菌水冲洗5无菌水冲洗5次cm

季)30min水冲洗5次次

永福报成熟叶洗洁精800倍液酒精棉球拭8-10s浸泡2次,每次62~3

春苣苔片浸泡10min,流擦后用无菌无菌水冲洗5min,每次浸泡后用cm×2~3cm

水下冲洗10min,水冲洗2次次无菌水冲洗5次

羽裂报叶片洗衣粉溶液浸泡酒精棉球拭20s浸泡2次,每次63cm×3cm

春苣苔25~30min,流擦后用无菌无菌水冲洗3min,每次浸泡后用

水下冲洗30min水冲洗3次次无菌水冲洗3次

贵港报幼嫩叶直接流水下冲洗酒精棉球拭10s8——

春苣苔片10~15min擦后用无菌无菌水冲洗5无菌冲洗5次

水冲洗5次次

黄花牛幼嫩叶——————————

耳朵片

2.初代培养

将切好的叶片按叶片初代培养基中。经过26-50d的培养后,发现在培养基上添加了一

定浓度的植物生长调节剂有利于不定芽的诱导,并可形成不定芽。适宜的不定芽诱导培养基

为MS+1.0-4.5mg·L-16-BA+0.01-0.25mg·L-1NAA,获得的不定芽长势良好。培养基中虽有

添加IAA,但IAA不能高温灭菌,在一定程度上增加了操作的繁琐性,因此,建议培养基

中不添加IAA。

表2不同种类报春苣苔的初代培养

种类基本培养基6-BA(mg/L)NAA(mg/L)IAA(mg/L)诱导率(%)培养时间(d)

褐纹报春苣苔MS2.00.1089.6730

永福报春苣苔MS3.00.25090.0026

羽裂报春苣苔MS1.0-2.00.01-0.10100.0050

贵港报春苣苔MS4.001.5100.0040

黄花牛耳朵MS4.50.03093.6740

3.增殖培养

将从叶片诱导得到的不定芽切取下来,以单个芽形式接入增殖培养基中。培养30d后,

发现适宜的不定芽增殖培养基为:MS+2.0mg·L-16-BA+0.05mg·L-1NAA或MS+1.0~3.0

mg·L-1ZT+0.05~0.1mg·L-1NAA或MS+1.0~3.0mg·L-1ZT+0.25mg·L-1IBA。添加物的增加

虽然可以提高增殖系数,但是也提高了成本上,在工厂化成产中,降低成本也是生产的目的

之一,故不建议在培养基中增加添加物。

表3不同种类报春苣苔的增殖培养

种类基本6-BAZTKTNAAIBA活性增殖系数附加物培养

培养(mg(mg/L)(mg/(mg/(mg/炭时间

基/L)L)L)L)(g/L)(d)

褐纹报春苣苔MS02.000.1000.0511.09无30

永福报春苣苔MS01.0-3.0000.25012.47-13.07无30

羽裂报春苣苔MS2.0000.0500.18.61无20

贵港报春苣苔MS01.000.10008.55土豆、香蕉、苹果(g/L):30

30、30、20,椰汁

(mL/L):100

黄花牛耳朵MS003.001.009.82无30

4.壮苗培养

由表4可以看出,在试验的5种报春苣苔中,仅永福报春苣苔有壮苗培养这一阶段。在

实际的工厂化生产中,为缩短组培周期以及生产成本,可以省略此步骤。

表4不同种类报春苣苔的壮苗培养

种类基本培养基6-BA(mg/L)NAA(mg/L)活性炭(g/L)培养时间(d)

褐纹报春苣苔无

永福报春苣苔1/2MS00.10.130

羽裂报春苣苔无

贵港报春苣苔无

黄花牛耳朵无

5.生根培养

将具有2对以上叶片的植株以单株形式接入生根培养基中。培养30d后,发现4种报

春苣苔的适宜的生根培养基为1/2MS+0.1-0.5mg·L-1IBA+0.05-0.50g·L-1活性炭或MS+0.5

mg·L-1IBA+0.1g·L-1活性炭。由于贵港报春苣苔的生根基本培养基配制较为繁琐,为简便环

节,故不采用该培养基配方,在实际实验中,贵港报春苣苔的生根基本培养基采用1/2MS

也可取得良好的生根效果。

表5不同种类报春苣苔的生根培养

种类基本培养基IBA(mg/L)NAA(mg/L)活性炭(mg/L)培养时间(d)生根率(%)

褐纹报春苣苔1/2MS0.1或0.500.0530100.00

永福报春苣苔1/2MS0.300.5030100.00

羽裂报春苣苔MS0.500.1040

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