DB42T 1621-2021 辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程

DB42湖北省市场监督管理局发布I 2 3 3 3 4 5 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话邮箱邮箱：597871辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程NY/T2060.1辣椒抗病性鉴定技术规程第1部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程4接种体制备上用纱布过滤马铃薯残渣，收集滤液置于干净锅中，加入14.2接种体的分离4.3接种体的鉴定4,4接种体保存将鉴定的新鲜胶孢炭疽菌进行3次单孢分离纯化后，转接于含PDA斜面培养基的5cm试管中，28℃24,6接种孢子制备取辣椒青熟果（花后35d～40d）或红熟果（花后45d～50d），每个鉴定品种或材料设3次重复，5.3对照材料致性。鉴定材料的育苗应符合NY/T2060.175%的乙醇溶液中浸泡2min，用1%次氯酸钠溶液浸泡2min，用无菌水洗净，置于超净工作台晾干。5.5接种5.5.1接种体浓度接种分生孢子悬浮液1µL，浓度为1×105个/mL。接种无菌水1µ5.5.2接种方法5.5.3接种后的管理保鲜膜密闭。置于室内28℃黑暗保湿（相对湿度100%）24h，培养条件控制为：温度28℃,相对湿度80%～100%，每天光照和黑暗各12h。36.2调查方法6.3病情分级6.4病情记载依据鉴定材料3次重复的病情指数（DI）的平均值确定其抗病水平，划分标准见附录7.2鉴定结果的有效性判别4A.1辣椒炭疽病及其分类侵染辣椒青果和红果的炭疽病菌以胶孢炭疽菌A.2辣椒炭疽病的症状病，病部呈现不规则或梭形病斑，纵裂凹陷，见图A.1和图51×TEBuffer（500mL）：1mol/LTris-HClBuffer，pH8.0，5mL；0.5mol/LEDTA，pH8.0，1mL；均匀混合定容到500mL，高温高压灭菌后，室温保存。2%CTAB裂解液（1L）：NaCl82g，EDTA7.44g，Tris12.12g，CTAB20g，PVP2g，用ddH2O定容至1L，常温保存，使用时可加入1%的β-巯基乙醇。50×Tris-乙酸（TAE）电泳缓冲液：242gTris；57.1mL冰乙酸；100mL0.5MEDTA（pH=8.0去离子水定容至1000ml，室温保存。将保存的病原菌菌株在PDA培养基上、28℃暗培养7d～10d后，将培养基表面菌丝轻轻刮下，液氮45min～60min，并不时轻轻转动离心管。加入等体积的氯仿：异戊醇，轻轻地颠倒混匀，室温下10000r/min离心10min，转移上清液至另一新离心管中。加入2倍体积的无水乙醇或0.7倍体积的异丙醇，出现絮状沉淀后，-20℃放置30min，12000r/min离心10min～15min，回收DNA沉淀。用70%的乙醇清洗沉淀2次，吹干后溶于适量的灭菌水中。PCR反应体系和PCR引物分别见表B.1和表B.6扩增产物经1.2%的琼脂糖凝胶电泳后，BIO-RAD凝胶成像系统进行紫