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文档简介

外源性DNA残留量的检查法第三节第十章生物制品的生物测定法第三节外源性DNA残留量的检查法一.外源性DNA的测定方法

目前对生物制品中残留外源性DNA的测定方法主要包括：分子杂交技术、基于DNA结合蛋白分析系统及实时定量PCR（Q-PCR）3类检测技术，其中以分子杂交技术最为常用。/video/av23340978/?p=17第三节外源性DNA残留量的检查法1.分子杂交技术的基本原理

采用DNA探针来检测固定在硝酸纤维素膜上的变性的宿主细胞DNA。供试品中的外源性DNA经变性成为单链，再吸附在固相膜上，在一定温度下可与相匹配的单链DNA复性而重新结合成双链DNA，称为杂交。阳性对照和标记探针的DNA可由生产供试品所用的传代细胞、工程菌及杂交瘤细胞提取纯化来制备。第三节外源性DNA残留量的检查法2.实验步骤01用标记物来标记特异性的单链DNA探针与吸附在固相膜上的供试品单链DNA杂交02030405使用与标记物相对应的显示系统来显示杂交结果与已知含量的阳性DNA对照对比测出供试品中外源性DNA的含量，其灵敏度可达10pg以下第三节外源性DNA残留量的检查法3.注意事项(1)DNA残留量在1.25～80ng/ml范围内，本法线性较好。(2)供试品首次应用本法测定时需要进行方法学验证，验证内容至少包括精密度试验和回收率试验。鼠IgG残留量的检查法第四节第十章生物制品的生物测定法第四节鼠IgG残留量的检查法一.试验原理

同宿主细胞（或菌体）蛋白残留量的检查法，即利用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法来测定经单克隆抗体亲和层析方法纯化的重组制品中残留的鼠IgG的含量。第四节鼠IgG残留量的检查法1.实验步骤

(1)包被抗体：将特异性的抗体（山羊抗鼠IgG抗体）包被在固相载体上，洗涤除去未吸附的抗体和杂质。

(2)加待测标本并孵育：使标本中的待测抗原（供试品溶液）和标准品溶液与上述固相抗体结合形成抗原-抗体复合物，洗涤除去其他未结合的游离抗原和杂质。

(3)加酶标抗体孵育：使固相抗原-抗体复合物中的抗原再与对应的经辣根过氧化物酶标记的绵羊抗鼠IgG抗体相结合，形成固相抗体-待测抗原-酶标抗体复合物（即双抗体夹心法），洗涤除去未结合的酶标抗体和其他杂质。第四节鼠IgG残留量的检查法

(4)加底物显色：固相上的辣根过氧化物酶催化加入的底物（邻苯二胺）形成有色产物，根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量检测。最后加入终止液硫酸来终止反应。用酶标仪在492nm波长处测定吸光度，以不同浓度的标准品溶液的吸光度做出工作曲线，由此可以测出由单克隆抗体亲

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